《纳米化杀手肽的制备表征和抗新生隐球菌感染的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《纳米化杀手肽的制备表征和抗新生隐球菌感染的实验研究（47页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第二军医大学 硕士学位论文 纳米化杀手肽的制备表征和抗新生隐球菌感染的实验研究 姓名：车付彬 申请学位级别：硕士 专业：皮肤病与性病学 指导教师：陈江汉 20080401 英文缩写 T E M A I D S S E M K P 纳米化杀手肽的制备表征及抗新生隐球菌感染的实验研究 中英文缩略语对照表 英文全名 t a n s m i s s i o ne l e c t r o nm i c r o s c o p y 中文全名 透射电子显微镜 a c q u i r e di m m u n ed e f i c i e n c ys y n d r o m e 获得性免疫缺陷综合征 s c
2、 a ne l e c t r o nm i c r o s c o p y k i l l e rp e p t i d e K P - P L G A N Pk i l l e rp e p t i d e 一 艾滋病 扫描电子显微镜 杀手肽 杀手肽一聚乳酸一羟基 P o l y ( D ，L L a c t i d e C o g l y c o l i d e ) 。n a n o p a r t i c l e 乙酸纳米复合体 C n e o f o r m a n s C r y p t o c o c c u sn e o f o r m a n s D L S A m B M
3、P S E E B C A P V A N P D C M P L G A A T C C R E S N I H C B S B U N C r R B C W B C A S T G P T ，D y n a m i cL i g h tS c a t t e r i n g A m p h o t e r i c i nB m o n o n u c l e a rp h a g o c y t es y s t e m E n t r a p m e n te f f i c i e n c y b i c i n c h o n i n i ca c i d P o l y v i
4、n y la l c o h o l N a n o p a r t i c l e D i c h l o r o m e t h a n e p o l yl a c t i c - C O - g l y c o l i ca c i d A m e r i c a nT y p eC u l t u r eC o l l e c t i o n r e t i c u l o e n d o t h e l i a ls y s t e m N a t i o n a lI n s t i t u t eo fH e a l t h 新生隐球菌 动态光散射 两性霉素B 单核巨噬系统 包
5、封率 聚乙烯醇 纳米粒 二氯甲烷 聚乳酸一羟基乙酸 美国国家标准菌种保藏中心 网状内皮系统 国立卫生研究院 C e n t r a a l b u r e a u v o o rS c h i m m e l c u l t u r e s荷兰微生物菌种保藏中心 u r e an i t r o g e n C r e a t i n i n e r e db l o o de e l l w h i t eb l o o dc e l l g l u t a m i co x a l a c e t i ct r a n s a m i n a s e g l u t a m a t e -
6、 p y r u v a t et r a n s a m i n a s e 尿素氮 血肌酐 红细胞 白细胞 谷草转氨酶 谷丙转氨酶 5 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究 工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人 已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的 任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明 的法律责任。 学位论文作者签名：州 签字日期：V 。 年f 月日 学位论文使用授权书声明 本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论
7、文 被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手 段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：弘幻 导师签名：昃元M 箴 签字日期：v 一年岁月咖 签字日期：年 月 日 纳米化杀手肽的制备表征及抗新生隐球菌感染的实验研究 捅斐 研究背景 新生隐球菌所致的感染好发于细胞免疫功能低下患者，随着器官移植、 骨髓移植等新技术的发展以及A I D S 患者的增多，隐球菌感染的发生率也呈逐年明显 上升的趋势。研究发现隐球菌是一种胞内兼性寄生菌，不仅可逃避巨噬细胞吞噬且即 使被吞噬后也可存活于
8、巨噬细胞内，可能是导致隐球菌病临床复发的重要原因。因此 选用合适载体将更多药物输送至感染细胞内部是治愈该病的关键。杀手肽( k i l l e r p e p t i d e ) ，是近期研发的一种人工合成十肽，其序列为A K V T M T C S A S ，它是一种水 溶性多肽，对耐氟康哗白念珠菌、利什曼原虫、巴西芽生菌和新生隐球菌均具有较强 杀灭作用，初步研究表明其作用靶点主要为真菌细胞壁Bl ，3 葡聚糖。多肽类抗生素 由于其结构完全不同于传统抗真菌药物，目前耐药发生率较低，且同传统治疗深部真 菌感染的药物相比，靶点位于细胞壁因此对哺乳动物副作用小，因此杀手肽具有安全 无毒和不易耐药等
9、优点。 研究目的 本研究旨在选择合适纳米材料作为杀手肽K P 的有效载体，探索并优化制 备工艺，制备出具有细胞内靶向性且安全的载药纳米粒。 研究方法 基于以上目的，经过预实验，我们选择目前研究较多的载体材料聚乳酸一 羟基乙酸( p o l yl a c t i c C O g l y c o l i ca c i d ，P L G A ) ，采用双乳法制备杀手肽一聚乳酸羟基 乙酸纳米复合体( K P P L G A N P ) ，并采用透射电镜、扫描电镜、动态光散射、测定 包封率载药量、考察体外释放等手段进行相应的表征测定；采用平板计数法验证人工 合成杀手肽对新生隐球菌A T C C 3 2
10、6 0 9 的体外杀灭作用；构建小鼠隐球菌系统感染模 型，通过生存期和重要脏器染菌量的变化比较纳米制剂同未包裹K P 的疗效变化，并 通过生化指标考察纳米制剂毒副作用情况。 研究结果 成功制备出并表征K P P L G A N P ；验证不同参数下其粒径、包封率、分散 度的变化趋势，证明P V A 浓度是影响表征的主要参数；证实人工合成K P 具有较强 抗新生隐球菌A T C C 3 2 6 0 9 作用，其作用强度同浓度F 相关，但疗效不及C B S 6 9 9 5 菌 株，可能与A T C C 3 2 6 0 9 菌株毒力较强有关；同未被包裹的K P 相比较，纳米制剂使 隐球菌系统感染小鼠
11、生存期明显延长，重要脏器染菌量显著下降；纳米物物对肝、肾 及血液系统均未产生明显损害 结论 纳米材料包裹K P 可显著增强抗系统性隐球菌感染疗效，其作用机制可能与纳 米材料的M P S 细胞内被动靶向性、对M P S 系统的激活作用及减少肽类药物同体内各种 酶的接触有关，因此纳米材料作为一种新型药物传递与控释的载体，具有靶向性、缓 释性、定时性和稳定性等优点。生物医学和纳米技术的结合将给会给隐球菌病的治疗 带来更广阔的前景。 关键词：杀手肽，纳米技术，新生隐球菌，胞内感染，毒副作用 第二军医大学硕士学位论文 A bs t r a c t B a c k g r o u d 】C r y p t
12、 o c o c c o s i s i sas y s t e m i cd i s e a s ec a u s e d b yC r y p t o c o c c u s n e o f o r m a n s I n r e c e n t y e a r s ，t h e r e h a sb e e nad r a m a t i cr i s ei nt h ei n c i d e n c eo f c r y p t o c o c c o s i s ，e s p e c i a l l yi ni m m u n o c o m p r o m i s e dp a t
13、 i e n t s ，s u c ha sA I D Sp e o p l e ，o rt h o s e w h or e c e i v e do r g a no rm a r r o wt r a n s p l a n t a t i o n I th a sb e e np r o v e dt h a tt h eC r y p t o c o c c u s n e o f o r m a n si Sa nf a c u l t a t i v ei n t r a c e l l u l a rp a t h o g e nw h i c hc a ne v a d et
14、 h eh o s ti m m u n e r e s p o n s ea n du n d e rc e r t a i nc i r c u m s t a n c e ss u r v i v ei nad o r m a n ts t a t eu n t i lr e a c t i v a t i o n o c c u r su p o ns u s t a i n e di m m u n o d e f i c i e n c y T h i ss p e c i a lp a r a s i t i s mp r o b a b l yc o n t r i b u t
15、 e st o t h ep o o ro u t c o m eo ft h e r a p ya n dc o m m o nr e l a p s e K i l l e rp e p t i d e ( s e q u e n c eA K V T M T C S A S ) i saw a t e r - s o l u b l es y n t h e t i cd e c a p e p t i d e ， w h i c hw a se n g i n e e r e do nt h eb a s i so ft h es e q u e n c e dK T s c F vg
16、 e n e K i l l e rp e p t i d e ( K P ) h a s b e e n p r o v e d t o t a r g e to n 1 31 , 3 - g l u c a ni nt h ec e l lw a l lo fy e a s ta n dn o tl e t h a lf o r m a m m a l i a nc e l l s I np r e v i o u sw o r k ，K Pd e m o n s t r a t e das t r o n gf u n g i c i d a la c t i v i t ya g a i n s tC n e o f o r m a n s ， A c a n t h a m o e b a c a s t e l l a n i i ，P a r a c o c c i d i o i d e sb r a s i l i e n s i s ， f l u c o n
