《紫草素抑制il23诱导银屑病患者外周血单个核细胞产生il6、il17的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《紫草素抑制il23诱导银屑病患者外周血单个核细胞产生il6、il17的研究（42页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名： 丞彗粗 日期：碰望丛窆： 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科
2、大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 论文作者签名：巫整、：圈 指导教师签名： 丑：二：丝 日 期： 砬k ：。：2 坌： f 嬲煳必 目录 一、摘要 中文论著摘要1 英文论著摘要5 二、英文缩略语”9 三、论文 前言1 0刖晶”1 0 材料与方法掣1 0 结果”1 3 讨论2 6 结1 念一2 8 四、本研究创新性的自
3、我评价2 9 五、参考文献3 0 六、附录 综述”3 2 在学期间科研成绩3 8 致谢3 9 个人简介4 0 中文论著摘要 紫草素抑制I L 2 3 诱导银屑病患者外周血单个核细胞 产生I L 6 、I L 1 7 的研究 前言 银屑病的发病机制与近年新发现的C D 4 + T 细胞亚群n 1 7 关系密切。目前 研究显示I L 2 3 T h l 7 细胞通路是银屑病发病机制中的重要环节之一。紫草系传统 中药，具有凉血、活血、解毒、透疹之功效，治疗银屑病的疗效已被临床肯定吲。 紫草素属于萘醌类化合物，为紫草发挥药理作用的主要成分，常被作为治疗银屑 病的主要药物，但其作用机制尚不清楚。为此，我
4、们将探讨紫草素对I L 2 3 诱导 银屑病患者P B M C s 产生I L 6 、I L 1 7 的影响。 材料和方法 一、研究对象 ( 一) 病例组 银屑病患者2 0 例，均来f 1 2 0 0 9 年l O 月至2 0 1 0 年3 月期间中国医科大学附属第一 医院住院患者，其中男1 2 例，女8 例，年龄2 3 “ “ 5 5 岁，平均年龄4 0 9 士1 0 9 岁。 ( 二) 对照组 健康志愿者1 l 例，其中男5 例，女6 例，年龄2 7 5 0 岁，平均年龄3 2 1 + 4 8 岁。 患者及志愿者入组前均签署知情同意书。 ( 三) 入组标准 1 、近三个月未用任何治疗银屑病
5、及免疫抑制性药物 2 、无肿瘤及其他自身免疫性基础疾病 3 、近两周无感染病史 4 、疾病处于进展期 ( 四) 排除标准 1 、年龄 6 0 岁或 O 0 5 ) 7 C y Ai n h i b i t sI L 6a n dI L 1 7p r o d u c t i o ni n d u c e db y I L 一2 3a n d 7 8 英文缩略语 9 论文 紫草素抑制I L 2 3 诱导银屑病患者外周血 产生I L 6 、I L 1 7 的研究 刖吾 银屑病俗称牛皮癣是一种常见的免疫介导的慢性炎症性皮肤病，病因及发 病机制复杂，目前认为T 细胞活化在其中起关键作用。一般将C D 4
6、 + T 细胞分为 T h l 、T h 2 效应细胞和T r e g 细胞，但近年免疫学研究中发现一个新的C D 4 + T 细 胞亚群n 1 7 【1 1 。最新研究结果表明，银屑病患者外周血及皮损内浸润的T h l 7 细胞显著增多，且与疾病的严重程度呈正相关口捌。目前研究显示I L 2 3 T h l 7 细 胞通路是银屑病发病机制的重要环节之一。 紫草系传统中药，具有凉血、活血、解毒、透疹之功效，我国5 世纪启已用 于治疗肿瘤及炎症性疾病。目前紫草治疗银屑病的疗效已被临床肯定【4 1 。紫草素 是从传统中药紫草的根部提取的一种萘醌类化合物，为紫草发挥药理作用的主 要成分，常被作为治疗
7、银屑病的主要药物，但其作用机制尚不清楚，特别是紫 草素与T 淋巴细胞的关系目前尚无报道。为此，我们将探讨紫草素对I L 2 3 诱 导银屑病患者P B M C s 产生I L 6 及I L 1 7 的影响，试图阐明紫草素治疗银屑病的 部分机制。 材料与方法 一、研究对象 ( 一) 病例组 银屑病患者2 0 例，均来f 1 2 0 0 9 年1 0 月至2 0 1 0 年3 月期间中国医科大学附属第一 医院住院患者，其中男1 2 例，女8 例，年龄2 5 “ - 5 5 岁，平均年龄4 0 9 - 士1 0 9 岁( 见附 表1 ) 。 ( 二) 对照组 l O 健康志愿者1 1 例，其中男5
8、例，女6 例，年龄2 7 5 0 岁，平均年龄3 2 1 + 4 8 岁。 患者及志愿者入组前均签署知情同意书。 ( 三) 患者入组标准 1 、近三个月未用任何治疗银屑病及免疫抑制性药物 2 、无肿瘤及其他自身免疫性基础疾病 3 、近两周无感染病史 4 、疾病处于进展期 ( 四) 患者排除标准 l 、年龄 6 0 岁或 2 0 岁 2 、近三个月应用治疗银屑病或免疫抑制性药物 3 、有肿瘤或自身免疫性基础疾病 4 、近两周有感染病史 5 、疾病处于静止期或消退期 二、主要试剂 重组人白介素2 3 ( r l L - 2 3 ) I L 2 3 的E L I S A 检测试剂盒 I L 17 的
9、E L I S A 检测试剂盒 I L 6 的E L I S A 检测试剂盒 C C K 8 紫草素 环孢素A R P M I16 4 0 培养液 P B S 缓冲液 F i c o l l 分离液 D M S O F C S 1 0 l x g 9 6 孔 9 6 孔 9 6 孔 1 0 m g 1 0 0 m g 2 5 0 m l 2 5 0 m l 5 0 0 m l 1 0 0 m l 1 0 0 m l B D P h a r r n i n e n 公司 R & D 公司 C U S A B I OB I O T E C HC o L t d 公司 武汉博士德公司 R 本同仁化学
10、研究所 日本和光公司( W A K O ) 德国M e r k 公司 H y c l o n e 公司 H y c l o n e 公司 G E h e a l t h c a r eb i o s c i e n c e sA B s o l a r b i o 公司 H y c l o n e 公司 细胞离心机 四、方法 美 S h a n d o n ，C y t o s p i n 2 ( 一) 药物处理 1 0 m g 紫草素溶于l m l D M S O ，双蒸水定容，细胞培养液中D M S O 终浓度 0 5 。1 0 0 m g 的环孢素溶于l m l D M S O ，双蒸水
11、定容，细胞培养液中D M S O 终 浓度 O 5 。 ( 二) E L I S A 法检测血清I L 一2 3 的含量 取银屑病患者及健康志愿者外周静脉血，离心分离血清，操作步骤参照试剂 盒的说明书进行。 ( 三) P B M C s 的分离 将银屑病患者外周静脉血用F i c o l l 进行密度梯度离心，将获得的P B M C s 充分 洗涤后，用R P M l l 6 4 0 培养液调整P B M C s 的密度为6 x 1 0 8 L 。 ( 四) 细胞培养 1 2 将上述调整密度后的P B M C s 细胞培养于4 8 孔板中，每孔8 5 0 I - t L ，每个培养条 件设3
12、个复孔，在不同的刺激条件下置于3 7 。C 、5 0 M L L C 0 2 孵箱中培养。 ( 五) 细胞毒性分析 不同刺激条件下的P B M C s 培养7 2 h 后收集细胞，将收集的各孔细胞计数后用 1 0 0 I - t L R P M l l 6 4 0 重悬，放入9 6 孔板中，每孔加入C C K 8 ( 1 0 0 L ) ，置于3 7 “ C 、5 0 M L L C 0 2 孵箱中培养4 小时后，酶联免疫检测仪测O D ( 4 5 0 n m ) 。按公式：细胞存活率 ( ) = 【( A 。A b ) ( 氏A b ) X 1 0 0 计算细胞存活率。A 。：实验孔( 含细
13、胞的培养基、C C K 8 、 紫草素) ，氏：对照孔( 含细胞的培养基、C C K - 8 、无紫草素) ，A b 空白孔( 不含细胞 和毒性物质的培养基、C C K 8 ) 。 ( 六) E L I S A 法检测细胞培养上清液中m 6 及I L 1 7 的含量 不同刺激条件下的P B M C s 培养7 2 h 后收集细胞上清液，操作步骤参照试剂盒 的说明书进行。 四、统计学分析 检测数据用x + S D 表示。采用S P S S l 6 0 统计软件进行单因素t 检验或独立样 本t 检验分析，以P 0 0 5 为差异具有统计学意义。 幺七甲 宝口木 ( 一) 病例组较对照组血清中I L
14、 2 3 的含量显著升高 与对照组相比，病例组血清中I L 2 3 的含量显著升高( 见表1 ，图1 ) 。 ( 二) I L 2 3 诱导银屑病患者P B M C s 产生m 1 7 l O n g m l 、5 0 n g m l 及1 0 0 n g m l l L - 2 3 与P B M C s 共培养后，I L 2 3 可诱导P B M C s 产生I L 1 7 ( 见表2 ，图2 ) 。 ( 三) 紫草素对银屑病患者P B M C s 产生I L 1 7 及细胞存活率的影响 立u g m l 紫草素与P B M C s 共培养后，可以剂量依赖的方式增加P B M C s 产生 I L 一1 7 。5u g m l 、7 5 u g m l 、1 0u g r r d 紫草素与P B M C s 共培养后，产生I L - 1 7 剂量 的增加随紫草素剂量的增加而减少。1 2 5 u g m l 、2 0 u g m l 、3 0 u g m l 紫草素与P B M C s 共培养后，可以剂量依赖的方式减少I L 1 7 的产生( 见表3 ，图3 ) 。与m e d i u m 相比， 1 2 5
