免疫组织化学实验技术及其临床应用_第二部分_

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1、河北医 科 大学学报 ? ? ? ? ? ! ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 免疫组织化学实验技术及其临床应用 ?第二部分? 于颖彦 附属二院病理科? ? ? ? 关键词免疫组织化学 , 实验技术 ? 临床意义 以往外科病理诊断依靠?染色 和有限的 几种特殊染色 。 自从免 疫组织化学 法投入临床 应用 , 使得检测某种抗原物质在细胞和组织内 的分 布成 为 可能 。 在日本 , 该方 法已得 到厚生 省承认被列 入 健康保险范 围 , 成为医院常规检 查 项目之一 。 免疫 组织化学 之 所以发 展在 很大 程度上 取决于以下 因素 ? ?将 酶作 为抗体标记 物制成的标

2、本可供光学 显微镜观察并能永久保 存 。 ?敏 感性高 、 特异性强 。 ?抗体 的日益普 及特别是 套 装 试 剂 盒的出 现 , 给用 户带来方 便 。 ?可 应用于 福 尔马林固定 、 石蜡 包 埋 组 织 。 本文 就 实验结果的 判 定以及临床意 义作 一 介绍 。 ? 染 色结 果的 判定 临床实际 工作中 , 免疫 组织化学 法最多 应 用于肿瘤鉴别诊断 。 由于肿瘤多少保留一些 起 源细 胞的分化特性 , 产生某些 化学物质 , 因此 使用针对某种化学物质的特异性抗体进行免疫 组 织化学 染 色便可以揭示肿瘤细胞的机能状 态 , 弄 清肿瘤 细 胞起源 。 在染 色 结果 判

3、定中应 留意 下列几个问题 。 ? ? ? 固定 液 不 同所致 的染色性差 异 ? 在细胞 学 诊 断 中常常使用酒精 固 定标 本 , 酒精可以造 成某些抗原物质如 固醇 类 、 多 肤类激素和某些 酶类的流 失和 失 活 , 而? ? ? ? ? ? ?角蛋 白?等不 溶性蛋 白的抗原性可保存完 好无 损 。 因此事先 一定要选 择 适 当固定液 ?请 参阅本讲座第一部 分? 。 ? ? ? 从抗 原 在局部的 表 达 方 式 判断 特异性 ? ? 每种抗原物质各 自性质不同?如膜蛋白 、 分泌 蛋白 、 核蛋白等? , 在细胞的局部表达 方式各 异 。 例如? ! ?增殖细胞核抗原?应

4、该在细胞 核表达 , 若在 细胞浆内出现 阳性则应 当怀疑其 特异性 。 ? ? ? 染色 方法的影响 ? 本讲座第一部分介绍 了数种常用免疫组织化学方法 。 在实际工作中 既使有高特异性抗体 , 若未选择好合适的染色 方法 也未 必能 获得正确的染色结果 。 在抗原过 剩 部位应 用?法可以出现假阴性 , 其道理 在于 , ? ?法中第二抗体的抗原结合部位一 方 为第一抗 体 , 另一方 为? ?复合物 。 在抗原 过剩 时 , 第二抗体的抗原结合部两 方均与第一 抗体结合 , 游离结合部位减少 , 以至不能与足 够的 ? 复合物相联 , 造成抗原密度高区染 色减弱 或阴性的假 象 。 此

5、现象在 间接法或 ? ? 法 则不会 出现 , 但在 ? ?法存在内源性 生物素与卵 白素非特异性结合问题 。 生物素 ?也称维生素?是人体必须辅酶 , 存在于多种 正常细胞特别是肝 、 肾细胞 之中 ? 用酒精或丙 酮固定的肾脏或肝脏标本由于内源性生物素和 试剂 中的 卵白素结合可 出现 假阳性 。 而醛类固 定液可以使内源性生物素与卵白素的结合性失 活 , 故 福 尔马林固定标本的?染 色不会有 此 问题 。 ? ? ? 阴性结果的判定 ? 阳性 染色结果可以积 极评论意义但阴性染 色结果 并不能说抗原不存 在 。 尤其是在鉴别低分 化肿瘤起源 时应特别注 意 。 肿瘤分化程度 越低 ?

6、缺乏特异性抗 原的可 能性越 大 。 比如未 分 化癌可以 ? ? ? ? ? ?波型 蛋 白?阳性 , 而? ? ? ?却阴性 , 而恶 性淋巴瘤 可能 ? ? 阴性 。 ? 免疫组 织化学法的临床 应 用 免疫组 织化学 法常常在 临床病理 疑难病例 鉴别诊断中发 挥作用 , 特别 是上 皮性与非上 皮 性肿瘤的鉴别和转移癌原发灶的探索 。 有时 , 依靠免疫组 织化学染色 结果 可以确 定诊断 。 临 床常见各型肿瘤的抗体表达情况 见表 ? 。 表 ? 各型肿瘤与其免疫组织化学标记物 肿心类型 免疫组织化学标记物 上皮性肿瘤 非上皮性肿启 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ”? 神经内

7、分泌肿启 肾上膝启 肝细胞瘤 卵黄炭肿瘤 绒毛膜上皮盛 间皮瘤 位母细胞瘤 胶质瘤 少枝胶质瘤 神经 鞘瘤 脑膜瘤 恶性黑色素瘤 恶性 淋巴瘤 多发性骨甘 瘤 何杰金氏病 骨位性 白血病 巨核 细胞肿瘤 红血病 恶性组织细胞增 生症 纤维组 织 细胞瘤 血管源性肿瘤 平滑肌源性肿瘤 横纹肌肉启 骨肉瘤 骨巨细胞瘤 软骨肉瘤 脊索瘤 脂肪肉启 滑膜肉瘤 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?,一? ? ? ? ? 纯?石? 一? ? ? ? ? ! ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?恶性? ? ! # ?

8、 一? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ! ? ? 一 。 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 一? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 或 ?细胞抗体? ?链? ? ? ? , ? ?一?多克隆? ? ? ? ? ? ? ?一 ? ? ? ? 第八因子 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?一? ? ? ? ? 第八因子? ?。? 川? ?血型物质 ? ? ? ? ? ? ? ? 一? ?毛 ? ? ? ? ? 一? ? 了? ? ? ? ? ? ? ? ? ?二? ? !# 碱性碑酸酶viT n en, n

9、 V ir n ent i们 a, 一 AT a一, C T 碱性碑酸酶s , 00 V im ” “”n 5 100 K er atin E M A S 一 0 0 V ir l en rin V im e ntin K eralin E入1 2 . 1 免疫 组 织化学与软 组织肿瘤 : 软 组织 肿 瘤组 织像 多种多样 , 常常给确定组织 起源带来 困难 。 不 少学 者利用 免疫组织 化学 技术作了大 量 工 作 , 开 发 出 如 下 几 种常用软组 织肿瘤抗 体 : 肌 红 蛋白(My o gl o bi n )是横纹 肌分化特 异性 标 志 。 结 蛋 白(De smin )与

10、Z一蛋 白是横 纹肌 、 平滑 肌特异性 标志 。 肌球 蛋 白 (M yosin) 和 C PK 一 mm 也 是 骨 骼 肌标志 。 p 一烯 醇化酶 (p 一 E n o l a s e)是横纹 肌 特有蛋 白 。 第八 因子 (Faetor姐或von w illebrand F a c to r)是凝血 因 子 之一 , 为 血管 内皮细 胞以 及血管源性肿瘤如 血管肉瘤和K apo s i肉瘤的 标志 。 波型蛋 白(Vim en t i n )几乎 存在于所 有 间叶源性肿瘤 。 角蛋白虽 然是上 皮组 织特有 标记 , 但可以出现于 滑膜肉瘤及类上皮肉瘤 。 2 . 2 免疫 组

11、 织化学与淋巴造血 系统疾病 : 淋 巴造血系统 疾病特别是 淋巴结原发性疾病与转 移性疾病的鉴别 ; 原发 性肿瘤细胞 的起源以及 转移性肿瘤原发 灶的探 索等是 外科病 理诊断难 点 。 自从 免 疫组 织化学引入组织病理 诊 断 , 特 别是 恶性淋巴瘤的免疫 功能分类间世 , 多种 单 克隆或多克隆抗体已广 泛用于淋巴造血系统疾 病 。 列举 几种适用于福 尔马 林 固定 、 石蜡包 埋 组织的淋巴造血系统疾 病鉴别诊断抗体 , 见表 2 。 表 2 淋巴造血系统免痊组织化学常用抗体 抗 体 意义 T细胞 MT I U C H L I B细胞 MB : LN I L26 Ig 其它 S

12、 , 。 al一 AT Ql 一 ACT L eu M I 全丁淋巴细胞(与 中性白细胞 、 组 织细胞有交叉反应) 丁淋巴细胞(少数T细胞阴性) 全B淋巴细胞 全B淋巴细胞(与红细胞有交又反 应) 全B淋巴细胞(与嗜酸性细胞有交 叉反应) 转化晚期B淋巴细胞 T 区网 织 细胞 , 皮肤Langorhan 、 细胞 单核细胞系 、 髓细胞系细胞 同上 组 织 细 胞何杰金氏 细胞髓细 胞系细胞(少数癌细胞) 何 杰金 氏 细胞未分化大细胞型 淋巴庸细胞 有时阳性 免疫 组 织化 学 与 神经 系统疾 病 : 神 经组 织杭 原根据其分布不 同分为分布于神经 元 中的 抗原和分 布于神经胶 质

13、细胞 抗原 。 神经 元特 异 性烯醇化酶(N SE )是神经元 抗原 , 也 出现于肾 上腺 髓质细胞 、 胰岛内分泌细 胞 、 甲状 腺C细 胞等所 谓的神经内 分 泌 细 胞 。 神 经 丝 蛋 白 (N F P )是中间丝的一种 , 分布于神经 细 胞及部 分神经节细胞中 。 可用于神经 母细 胞瘤 、 髓母 细 胞瘤 、 视网膜母 细 胞 瘤 和肺小 细 胞癌的诊 断 。 5 1 0。 蛋白为神经胶质细胞抗原 , 在末梢 神 经 组 织 主 要 局 限 于神经鞘细 胞 及外衣 细胞 。 5 1 0 0 蛋白还出现 于神经 组织以外的细 胞 如软骨 细胞 、 脂 肪细 胞 、 黑 色素

14、细胞 、 汗腺及乳腺的 肌 上 皮细胞 、 皮肤Lang e rhan s 细 胞 、 肾 曲小管 以及淋巴结的指状 突 网织细 胞 。 胶质纤维酸性 蛋 白(GFA P )是 中间丝 的 一 种 , 主 要 存在于脑 内星形 胶质细 胞 、 极 少 出现 于 少 突 胶质细胞 。 在外科病理领域 , GFAP 见 于星 形胶质细胞 瘤 、 胶 质母细 胞 瘤以及 混合性胶 质瘤 , 部 分室 管膜瘤及小脑血管 母细 胞瘤也呈阳性 。 2 . 4 免 疫组 织 化学与消化 系统疾病 : 癌 胚抗 原 ( C EA)是胚胎 期胎 儿结 肠 粘膜 抗原 。 在正常 胃枯膜以及 胃体 、 幽门腺 ,

15、 C EA 为阴性 。 在 胃 的肠 上 皮化生区及 正常大 肠 粘膜 , CEA 主要 表 达在表层 上皮 细 胞的管腔 面 , 随着 向肠隐窝 底部靠近 , 染色 则逐渐减弱 。 在胃 、 大肠 、 肝 胆胰管起 源 的 消化道癌 , CE A 染 色变得十分 不 规 则 , 可以出现 在癌细 胞全周以至于癌间 质 。 在鉴别 消化道 间 叶组 织 由来的小 细 胞性恶 性肿瘤和 梭形 细胞肿瘤的组织 起源时 , 可应 用 前 述软组 织肿瘤及淋巴造血系统肿瘤常 用抗 体 。 2 . 5 免 疫组 织化学与泌尿 生殖 系 统 疾病 : 前 列腺特异性抗原 ( P SA )对 诊断 前列 腺 癌特别是 对远 方转移病灶的确诊起决定性作用 。 在 产科 病理 领域 , 人类绒毛膜促性腺激素(H CG )免疫 组 织化 学 染色有重 要应用价值 。 在此主要指用 于流产 后或疑为妊娠的子宫 内膜刮宫 标本的诊 断 。 在外 科病理 领 域 , 当刮取的宫 内膜由于出 血 、 坏死 严重难以找 到滋养叶细胞成份给明确 诊断带来 困难时 , HCG 免疫组 织化学染色 可 以清 晰显 示有无 滋养 叶上