《淡水枝角类的耐盐性诱导研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《淡水枝角类的耐盐性诱导研究（51页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国海洋大学 硕士学位论文 淡水枝角类的耐盐性诱导研究 姓名：王丹丽 申请学位级别：硕士 专业：海洋生物 指导教师：唐学玺 20041201 淡水枝角类的耐盐性诱导研究 摘要 为了探究剥用淡水枝角类供作海产动物人工育苗的活饵料的可能性，本文在 不同的盐度、温度、食物条件下，利用盐度驯化、微波、化学诱变剂等理化方法 处理老年低额滔( S m o c e p h a ；u sv e t u u s S t r a u s ) 、蚤状浸( D a p h n f a p u J e x L e y d i g ) 和多刺裸腹涵( M o n i a 届s c t r o c o p aS t r a
2、 u s ) 三种不同的枝角类，观察潘的耐盐 能力，以期为今后提高淡水枝角类的耐盐性和大量培养提供理论依据。 在2 、3 、4 、6 、8 和l O6 个盐度梯度以及1 5 。C 、2 0 。C 、2 5 。C3 个温度组 下，观察了老年低额潘、蚤状潘和多刺裸腹潘的生殖与生存。试验表明：盐度与 温度的交互作用显著。在盐度定时，搔的发育速率随温度升高丽加快；在温度 一定时，潘的寿命随盐度升高而缩短。老年低额潘和蚤状泾生殖与生存的最佳水 平为盐度2 ，温度2 0 。C 。老年低额搔、蚤状淫、多刺裸腹淫的生殖盐度上限分别 为盐度3 4 、4 、6 。在1 5 2 5 。C ( 室温) 和2 5 下，
3、经短期的海水驯化，老年低额 潘和蚤状溪生殖与生存的盐度上限可达盐度5 - 6 ；多刺裸腹潘可达盐度8 。 在2 5 1 及小球藻、酵母、牛粪+ 稻草+ 沃土3 种食物条件下，进行了3 种 淡水枝角类海水驯化的比较研究并探讨了多刺裸腹溢在盐度2 、3 、4 、6 和淡水 5 个浓度下的种群增长参数。实验表明：无论投喂何种食物，在淡水至盐度4 范 围内，多刺裸腹骚种群的内禀增长率( r 1 ) 无显著差异为0 7 2 5 一1 0 7 0 ( d 。) ；净 增殖率( 民) 以小球藻组平均数最高为5 5 1 3 ( i n d ) ；世代时间( T ) 以酵母组 最长，平均为5 3 8 ( d )
4、 。3 种淡水枝角类生殖与生存的最优水平为多刺裸腹潘一 小球藻组。 在温度2 5 1 及牛粪+ 稻草+ 沃土为食物的条件下，采用微波辐射方法对多 刺裸腹潘和蚤状湮的耐盐性进行诱导实验，观察了分别辐射5 s 、1 5 s 、2 5 s 后多 刺裸腹潘在盐度8 、l O 、1 2 、1 5 、1 8 、2 16 个盐度下的生殖和生存情况；辐射 5 s 、l O s 、1 5 s 后蚤状潘在盐度2 、4 、6 、8 、1 05 个盐度下的生殖和生存情况。 实验表明：经微波辐射诱导后，多刺裸腹潘和蚤状溢的生殖盐度上限分别可从盐 度6 上升至盐度l0 ，盐度4 上升至盐度6 。前者在盐度2 l 中最多可
5、存活2 9 h ， 辐射效果以1 5 s 组最好：后者在盐度1 0 中最多可存活4 h ，辐射效果以l O s 组最 好。 淡水枝角类的耐盐性诱导研究 在2 5 1 及小球藻为食物的条件下，选用N 一甲基一N7 一硝基一N 一亚硝基 胍( M N N G ) 和甲基磺酸乙酯( E M S ) 两种化学诱变剂诱导不同发育阶段的多刺裸 腹搔。亚硝基胍和甲基磺酸乙酯分别设置lX 1 0 1 、3 1 0 “、5 1 06 和O 1 、0 3 、0 5 0 o o 三种处理浓度，诱导时间l h ，观察溢在8 、1 0 、1 5 、2 0 、2 55 个盐 度下的生殖和生存情况。实验表明，经诱导后多刺裸
6、腹潘的生殖上限可从盐 度6 上升至盐度8 1 0 。从药物浓度影响来看，诱导效果前者以1 X 1 0 “组最好， 3 1 0 4 组次之，5 X 1 0 1 组较差；后者以0 3 组最好，0 1 缀次之，0 5 o 组较 差。E b t S 诱变效果明显好于M N N G 的效果( p O 0 5 ) ，而其余各组均不能产仔；在盐度6 时，辐射5 s 的B 组和l O s 的B 组均 能怀卵，第一次怀卵目为5 d ，但不能正常产仔；盐度大于8 ，各组均不能怀卵、 产仔。 淡水枝角类的耐盐性诱导研究 淡水枝角粪的耐盐性诱导研究 3 3 讨论 从实验中可知，当微波辐射产生的热量远大于涵的耐高温极限
7、，则致死效应 明显。所以应选择一个合适的辐射时间，同时确定反应器容量的大小。微波是一 种高频率的电磁波，2 4 5 0 M H z 微波可引起极性分子( 水、脂肪、糖、蛋白质等) 在1 s 内1 8 0 。来回转动2 4 5 亿多次，强烈的转动摩擦使得生物体细胞内的D N f i 在1 s 内1 8 0 。来回转动2 4 5 亿多次，强烈的转动摩擦使得生物体细胞内的D N A 分子氢键和碱基堆积化学力受损，最终引起D N A 分子结构变化导致遗传变异“2 。 表1 6 微波诱导对蚤状淫生殖的影响 T a b1 6E f f e c t so fm i c r o w a v ei r r a
8、d i a t i o no nr e p r o d u c t i o no f 丑p u l e x 盐度第一次怀卵E l ( d )产仔量( i n d ) 每磺平岛孟仔量( i m ) 2 4 1 i 05 5 对照组44 6 A 组241 2 46 2 45 5 s6 B组4470 ，3 5 65 8 8 A 组 252 81 4 44 1 5 s6 B组4 4 5 6 8 实验结果表明：微波辐射诱导效果良好，通过诱变处理，多刺裸腹湮的生殖盐度 上限可由6 提高到1 0 ，但第一次怀卵日从1 5 2 d 延迟到3 4 d ；蚤状涵的生殖 盐度上限可由4 提高到6 ，第一次怀卵目由4
9、 d 延迟到5 d 。这是由于淡水枝角类 拍 - b 1 l 9n 弱 54 4 4 5 o 4 洳4 6 组 组 A B S加 淡水枝角类的耐盐性诱导研究 将摄取的能量更多地用于调节体内渗透压的平衡，以适应盐度的变化。经过一段 时阳J 的驯养，多刺裸腹潘和蚤状潘的生殖盐度上限也可以分别提高到8 9 和6 ， 但较费时、费力，而微波诱导操作简便，省时又省力，能大大缩短驯养周期，因 此，不失为一种提高潘类耐盐性的好方法。多刺裸腹潘在盐度8 中可以正常产仔； 其生存时问有了明显的提高，特别是在高盐度2 1 中最多可存活2 个多小时：蚤 状潘在盐度l O 中存活时间可达4 h 。从实验还可看到，经过
10、在一定盐度培养液中 选择培养的浸，其诱导效果均好于未驯养组，这是因为一方面，通过几代的繁殖 稳定了诱变后的性状，另一方面，短期的驯养增强了淫的适应能力。 由于涵类行孤雌生殖，每个潘可繁衍成带有完全相同遗传物质的群体，或者 说是一个克隆。因此，它不仅是经济鱼虾类育苗中的好饵料，也是进行遗传学、 发育生物学等研究的好材料。本实验选择多刺裸腹潘和蚤状潘的新生幼涵进行接 种，作者认为，不同年龄的个体其生殖力及其对环境的适应能力有一定的差异， 所以接种材料的种类、年龄组成及诱导时间的选择等都会对实验结果产生不同影 响，有待于进一步研究。 目前，运用理化手段诱导多细胞动物的研究目渐增多，但一些理化因子的诱
11、 导机制尚不十分清楚，本文从微波的诱导效果来看是不错的，但目前对微波化学 反应的机理认识还存在着局限性，在微波化学反应中既存在着内热效应，还存在 着一些非致热效应，因此，它的作用机制以及耐盐性提高后的性状是否能长期保 持下去，还有待于进一步深入的研究。 3 4 小结 在温度2 5 1 及牛粪+ 稻草+ 沃土为食物的条件下，采用微波辐射方法对多 刺裸腹潘和蚤状淫的耐盐性进行诱导实验，观察了分别辐射5 s 、1 5 s 、2 5 s 后多 刺裸腹淹在8 、1 0 、1 2 、1 5 、1 8 、2 16 个盐度下的生殖和生存情况；辐射5 s 、 l O s 、l5 s 后蚤状淫在2 、4 、6 、
12、8 、1 05 个盐度下的生殖和生存情况。实验表 明：经微波辐射诱导后，多刺裸腹溢和蚤状滔的生殖盐度上限分别可从6 上升至 1 0 ，4 上升至6 。前者在盐度2 l 中最多可存活2 9 h ，辐射效果以1 5 s 组最好； 后者在1 赫度O 中最多可存活4 h ，辐射效果以1 0 s 组最好。 淡水枝危类的耐盐性诱导研究 4 化学诱变剂对多刺裸腹潘耐盐能力的诱导研究 4 1 材料与方法 4 1 1 实验材料多刺裸腹潘于2 0 0 1 年4 - 5 月采自宁波大学附近小河，接种 于小球藻培养液中，经过数代繁殖提纯后保种备用，取新生幼潘作为实验材料。 4 1 2 实验试剂实验用N 一甲基一N7
13、一硝基一N 一亚硝基胍( M N N G ) 和甲基磺酸 乙酯( E M S ) 购自上海生化试剂店，由德国F l u k a 公司生产。 4 1 3 实验条件实验分别以不同浓度的亚硝基胍( M N N G ) 和甲基磺酸乙酯( E M S ) 诱变处理不同发育阶段的多刺裸腹溪，培养温度为2 5 1 ，培养期间适时添 加培养液以保持食物密度及补充蒸发的水份。藻浓度保持在4 6x 1 0 6 c e l l m L ，自然光照。 4 1 4 诱变方法 甲基磺酸乙酯( E M S ) 的诱变：实验采用不同浓度的E M S 处理多刺裸腹潘， 观察滔体的致死效应，通过毒性实验确定适宜的处理浓度，共设置
14、0 1 o 、0 3 、0 5 三种处理浓度。诱变剂诱导处理共分为3 组。 A 组：又分2 种情况，A 1 组将新生幼滔诱导后立即进行各盐度试验。A 2 组 诱变后在淡水中培养7 2h 再进行各盐度试验。 B 组：取怀卵成体潘诱导后接种到盐度2 的培养液中进行选择培养，待潘繁 殖几代后进行各盐度试验。 C 组：取长期驯养在盐度5 中的新生幼滔诱导后进行各盐度试验。 实验分别设置了两个对照组：( 1 ) 直接把淡水的幼滔进行各盐度试验。( 2 ) 取长期驯养在盐度5 中的幼潘，直接进行各盐度试验。诱变处理时间1h ，完毕 后用大量清水冲洗滔体，以尽量除去疆体表残存的余毒。将诱导后的潘体在盐度 8
15、 、1 0 、1 5 、2 0 、2 55 个培养液中选择培养，观察滔体的存活时间和生长发育 状况。每个盐度共筛选5 0 只潘体，培养于2 0 0 m L 不同盐度的培养液中，观察潘 体的存活时间，每组实验重复3 4 次。 亚硝基胍( M N N G ) 的诱变：实验诱变剂浓度确定方法与E M S 相同，共设置 1 1 0 、3 1 0 一、5 1 0 1 6 三种处理浓度，实验操作程序与E M S 相同。 滚水枝角类的耐盏性诱导研究 4 2 结果 4 2 1 诱变处理对涵体在盐水中存活的影响 应用不同化学诱变剂处理多刺裸腹涵，药物处理浓度M N N G 为l 1 0 1 、3 1 0 1 、
16、5 1 0 一，4 8 h 内的半致死浓度为1 6 9 X 1 0 1 ，多刺裸腹潘的存活率达到1 0 0 、9 8 、9 5 ；E M S 浓度为0 1 、0 ，3 0 、0 5 ，4 8 h 内的半致死浓度为1 5 ，其存活率为1 0 0 、9 9 、9 6 。当增加药物浓度时，淫类因药物毒性而导 致死亡数明显升高。如：药物浓度为1 0 、2 0 、3 0 、4 0 ( 1 0 ) 时，幼潘在诱导 后的存活率分别为5 9 、4 8 、3 0 、2 5 。诱导后分别接入8 、1 0 、1 5 、2 04 个盐 度梯度中，A 1 组在1 5 - 2 5 h 内全部死亡：c 组的L k 为5 - 6 h ，L T 。为1 5 d 。 药物诱导对多刺裸腹滔生存的影响较为明显。由表1 7 可见，药物诱导后，A 、 B 、c 各组的L T 钟和L 丁。比对照组大多有
