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1、霉菌的检测,一、实验目的及意义 1.了解粮食中真菌检测的卫生学意义和基本过程。 2.掌握分离培养和鉴定霉菌的方法及特点。 3.掌握常见产毒霉菌的镜下鉴别特征。,二、仪器设备和试剂 1.器材 温箱（2528）、振荡器、天平、显微镜、玻塞三角瓶（300ml）、试管（15mm150mm）、平皿（直径9cm）、吸管（1ml和10ml）、酒精灯、载物玻璃、盖玻片、广口瓶、牛皮纸袋（121灭菌20min、试管架、接种针、橡皮乳头、金属勺、刀等。,2.培养基 （1）PDA培养基：由于该培养基含有天然成分，霉菌、酵母发育良好。 （2）孟加拉红培养基：培养基中加入氯霉素和孟加拉红，能联合抑制细菌，对样品中的霉菌
2、和酵母的选择性好，且孟加拉红能限制霉菌菌丝的扩展生长，使菌落局限，便于计数，已在国际上广泛应用。 （3）高盐察氏培养基：专门用于粮食等水分含量较低样品的霉菌计数，由于含盐量高，酵母、细菌都生长不良，因而不必添加抗生素。,三、霉菌的检测内容,（1）采样 （2）表面除菌 （3）接种与培养 （4）计数 （5）镜检与初分离 （6）常见产毒霉菌的鉴定,（1）采样：采取有代表性的样品250-500g,尽快检验。 （2）表面除菌：无菌水反复冲洗。 （3）接种与培养：粮粒均匀插到高渗察氏培养基中，5-10粒/皿。共100粒。 （4）计数：选择10-150间的数字进行计数。 （5）镜检与初分离： （6）常见产毒
3、霉菌的鉴定：,初分离,培养基的选择： （1）察氏琼脂培养基：用于青霉和曲霉的分离培养鉴定。 （2）PDA培养基：镰刀菌和其他霉菌的的分离鉴定。 （3）孟加拉红培养基：分离霉菌及酵母菌。 接种：三点接种法。 培养：25-283-5天。,平板上菌落形态特征判断依据,菌落生长速度： 菌落的颜色： 菌落的质地： 菌落的表面： 渗出物： 气味等：,常见产毒霉菌的鉴定特征 （1）寄生曲霉：生长较快，深绿色至暗绿色，绒状。 （2）黄曲霉：生长较快，开始黄色，后变成黄绿色，绒状。 （3）棕曲霉：生长较快，暗土黄色，绒状，背面黄褐色至紫褐色。 （4）构巢曲霉：生长较快，暗绿色，生闭囊壳部分呈黄褐色，绒状，背面呈
4、紫褐色。 （5）黄绿青霉：绒状，表面突起或凹陷，淡黄灰绿色，有浅黄色渗出液，背面亮黄色。 （6）橘青霉：艾绿色，表面有放射状沟纹，黄色渗出液，背面黄色。 （7）岛青霉：生长局限，致密丛生或绳状，橙色、红色、暗绿色的胡合体，背面褐色。,镜检观察方法,一 直接检查 不染色标本的直接检查： 直接采取标本制片、显微镜下直接观察，若发现真菌菌丝或孢子存在时，即可初步判定为真菌污染。 染色标本检查 1）革兰氏染色： 各种真菌均为革兰氏阳性，为深蓝色。 2）乳酸酚棉蓝染色（或是乳酸苯酚液）： 直接滴加到载玻片上，再加入真菌涂开进行观察。,粮食中常见污染的真菌形态特征,曲霉属：分生孢子头； 青霉属：帚状枝； 镰刀菌属：镰刀状地大分生孢子。,四、实验结果,1、描述平板上观测到的菌落形态特征。 2、画出镜检下菌落的形态特征。,
