《强化胰岛素治疗对2型糖尿病大鼠氧化应激及胰岛β细胞凋亡影响的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《强化胰岛素治疗对2型糖尿病大鼠氧化应激及胰岛β细胞凋亡影响的研究（50页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、l J c 瑟王玉D 8 l I 耋 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师( 或指导小组) 的指导F ，由小人独、：完成。 本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产杖l f I ；可北医科人。所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使川。凡发袋 与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科入学，试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所- 白。 否则，承担相应的法律责任。 研究生签名：劢诂导师签章：点素支二级学院领导盖章： 沙，。年，J j 彳II 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取
2、得的研究成果，除J ， 文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究 成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生签名： 导师签章：荔 疋 川，t ，年j - JJ 印 8 ：j “k 目录 中文摘要1 英文摘要4 研究论文 强化胰岛素治疗对2 型糖尿病大鼠氧化应激及胰岛p 细胞凋亡 影响的研究 1 上J L 月| j 舌7 材料与方法。9 结果l8 附I 訇。2 0 附表2 7 讨 念。2 9 参考文献：3 3 综述3 6 至殳谓 3 分为阳性， 3 分为阴性【1 4 1 。 2 5 2 胰岛细胞原位死亡检测( T L n 怔L 技术) 测胰岛t 3
3、 细胞凋亡率 2 5 2 1 操作步骤： 石蜡包埋的切片预处理，常规脱蜡脱水。 l 用蛋白酶K ( 2 0 u g m L ) 溶于T r i s H c l 中( P H 值7 4 “ - - - 8 O ) ，室温孵育1 5 “ - “ 3 0 m i n 。 l P B S 冲洗2 次，擦干样品周围的水 l 滴加5 0 u I 的T U N E L 反应混合溶液，在湿盒中3 7 。C 孵育6 0 m i n ( 为防止蒸 发和保证T U N E L 反应混合物均匀分布，可以在孵育过程中加盖盖玻片) l P B S 冲洗3 次，样品在荧光镜下分析结果 2 5 2 2 信号转化和分析： 擦干
4、样品周围的水分，加入5 0 u I 的转化剂P O D ，在湿盒中3 7 。C 孵育 3 0 m i n ( 为防止蒸发和保证转化剂P O D 均匀分布，可以在孵育过程中加盖 盖玻片)豇呓X 门， l P B S 冲洗3 次，加入5 0 “ 1 0 0 u L D A B 底物溶液，室温孵育1 0 m i n ， 研究论文 1 | P B S 冲洗3 次，封片，在光镜下分析结果。 2 5 2 3 对照： 阴性对照：经过固定和通透的石蜡组织加入5 0 u L 试剂2 以代替 T U N E L 反应混合物，从标记步骤以下同上。阳性对照：经过固定和通透 的石蜡组织用细球菌的核酸酶或D n a s
5、eI 使之产生D N A 链缺口，从标记 步骤以下同上。 2 5 2 4 结果判定方法： 由两位病理医师分别阅片，凋亡细胞核着染深棕色，将细胞核染为深 棕色的细胞定为凋亡的胰岛1 3 细胞，每个胰岛的细胞凋亡率( ) = 1 3 细胞凋 亡数1 3 细胞总数1 0 0 。每只大鼠取4 张胰腺切片，每张切片中至少计 数3 - 一5 个胰岛。 3 统计学处理 数据以均数标准差( x 士s ) 表示，用S P S S l 2 0 统计软件进行统计处 理，对所测定结果进行正态性及方差齐性检验，偏态分布变量胰岛素取自 然对数转为正态分布后进行统计学处理。两组比较采用t 检验，多组间比 较采用方差分析。
6、研究论文 结果 1 大鼠2 型糖尿病模型的建立： 连续喂养1 0 天后，H F 组大鼠的B W 较N C 组增加( 户均p 0 0 5 ) ，T G 、 T C 及F F A 均较对照组显著升高俨均 0 0 1 ) ，F I N S 水平较N C 组显著升高 俨 O 0 1 ) ，I S I 均较N C 组降低( P o 0 5 ) 。实验结果见T a b l e1 。由于I S I 降低，我们认为胰岛素抵 抗形成。 “ 注射S T Z 第3 天，H F 组动物的B W 、T G 、T C 及F F A 均较对照组显 著升高 O 0 5 或 O 0 1 ) 。F P G 亦较N C 组显著增加
7、 O 0 5 或 0 0 5 ) ；实验结果见T a b l e2 。由于F P G 升高及I S I 降低，我们认为2 型 糖尿病模型建立成功。 2 强化胰岛素治疗对2 型糖尿病大鼠体重的影响： 实验期间D C 组和D I 组大鼠各死亡2 只。治疗4 周后，与D C 组比 较，D I 组的B W 明显增加p O 0 1 ) ，接近于N C 组水平。实验结果见T a b l e 3 。可见，给予胰岛素治疗后可明显缓解由糖尿病所致的体重减轻。 3 强化胰岛素治疗对2 型糖尿病大鼠血清中F P G 、T C 、T G 、F F A 和F I N S 的影响 治疗4 周后，D I 组血清中F P G
8、 、T G 、T C 和F F A 的水平均较D C 组 明显降低，二者有明显统计学显著性( P 0 0 5 或 o 0 1 ) 。经计算，I S I 明 显升高( 尸 O 0 1 ) ，而血清中的F I N S 水平未见明显改变。实验结果见T a b l e 3 。结果提示，强化胰岛素治疗可缓解糖尿病所致的血脂及血糖水平的升 高，并可缓解糖尿病所致的I S I 降低。 4 强化胰岛素治疗对2 型糖尿病大鼠血清及肝组织匀浆中S O D 、M D A 及 G S M 的影响 治疗第4 周末，D C 组和N C 组比较，血清及肝组织匀浆中的S O D 、 G S M 的含量均降低俨均 O 0 1
9、) ，而M D A 升高，提示T 2 D M 可致S O D 、 G S M 的水平降低，M D A 升高。D I 组血清及肝组织匀浆中S O D 、G S M 均 较D C 组明显升高俨均 O 0 5 ) ，M D A 降低，提示经强化胰岛素治疗对 T 2 D M 所致的S O D 、G S M 减低及M D A 升高有明显的对抗作用；然而， 研究论文 D I 组的S O D 、G S M 水平和N C 组相比，仍然较低( P O 0 5 ) ，而M D A 水 平亦未恢复正常( 氏O 0 5 ) 。实验结果见F i g1 - 6 。 6 强化胰岛素治疗对2 型糖尿病大鼠胰岛1 3 细胞凋亡
10、的影响 治疗4 周末，D C 组大鼠胰岛1 3 细胞b c l 2 蛋白表达( 2 6 8 + 1 2 0 ) l j Y J 显 低于N C 组( 6 4 2 4 - 1 4 5 ) ，而D C 组的b a x 蛋白表达( 6 7 2 士1 5 5 ) 则明显高 于N C 组( 2 4 1 4 - 1 0 6 ) ( 尸均 O 0 5 ) 。与D C 组相比，D I 组b c l 2 蛋白表达 升高( 6 0 5 + 1 7 3 ) ，有明显的统计学显著性( 尸 O 0 5 ) ，而b a x 蛋白表达降 低( 2 5 6 4 - 1 2 3 ) ，亦有明显的统计学显著性( P o 0 5
11、) 。实验结果见F i g 7 ， 8a n d1 0 。提示，强化胰岛素治疗可促进b c l 2 蛋白的表达，抑制b a x 蛋白 的表达。 与N C 组相比，D C 组有大量T U N E L 阳性细胞( O 7 2 4 - 0 1 8 ) V S ( O 1 8 4 - 0 0 9 ) ，差异有统计学意义( 尸 O 0 5 ) 。与D C 组相比，D I 组偶见 T U N E L 阳性细胞，为( O 2 1 4 - 0 0 7 ) ，差异有统计学意义( 尸 o 0 5 ) 。实验 结果见F i g 9 、1 l 。提示，强化胰岛素治疗可以抑制T U N E L 细胞的增殖。 研究论文
12、附图 F i g 1 T h el e v e lo fS O D ( U m 1 ) o fb l o o ds e r u ma f t e r4w e e k st r e a t m e n t w i t hi n s u l i n x 士s ) N C ：n o r m a lc o n t r o l ，D C ：D i a b a t ec o n t r o l ，D I ： D i a b e t eI n s u l i n P 0 0 5wN C 。P 0 0 5 坩D C F i g 2T h e l e v e lo fM D A ( n m o l m 1 )
13、i nb l o o ds e r u ma f t e r4w e e k st r e a t m e n t w i t hi n s u l i n ( I 士s ) N C ：n o r m a lc o n t r o l ，D C ：D i a b a t ec o n t r o l ，1 9 1 ： D i a b e t eI n s u l i n P 0 0 5w N C ，P 0 0 5wD C 8 6 4 2 O 8 6 4 2 O 1 1 研究论文 F i g 3T h el e v e lo fG S M ( m g L ) i nb l o o ds e r
14、u ma f t e r4w e e k st r e a t m e n t w i t hi n s u l i n ( x s ) N C ：n o r m a lc o n t r o l ，D C ：D i a b a t ec o n t r o l ，D I ： D i a b e t eI n s u l i n P 0 0 5 “ k SN C ，P 0 0 5wD C F i g 4 T h el e v e lo fS O D ( U m g p r o t ) i nH e p a t i ct i s s u ea f t e r4w e e k s t r e a t m e n tw i t hi n s u l i n ( 灶s ) N C ：n o r m a lc o n t r o l ，D C ：D i a b a t e c o n t r o l ，D I ：D i a b e t eI n s u l i n P 0 0 5 坩N C ，+ P 0 0 5wD C 2 l 至垄丝查 F i g 5T h el e v e lo fM D A ( n m o l m g p r o t ) i nH
