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1、北京协和医学院临床医学专业毕业论文 z7S3 2 67 学校代码： 学号： 1 0 0 2 3 2 0 0 2 0 1 1 0 5 应用蛋白质组学技术建立B e h c e t 病相关葡萄 膜炎诊断模型并筛选血清掌标记物 I d e n t i f i c a t i o no fs e r u mp r o t e i n b i o m a r k e r sb yp r o t e o m i ct e c h n i q u ef o r d i a g n o s isa n ds c r e e n i n go fB e h c e t ， s Q 1 S e a S eW l
2、t nU V e l t l S 1 1 学生姓名：王昕 北京协和医学院临床医学专业2 0 0 2 级 导师姓名：李维业( 教授) 北京协和医学院临床学院眼科 张美芬( 教授) 北京协和医学院临床学院眼科 完成日期：2 0 1 0 年6 月 北京协和医学院临床医学专业毕业论文 删脚 Y 1 7 7 6 石1 垮d 目录 英文缩略词表3 中文摘要4 A B S T l 矾c T 5 引言6 第一部分：建立B e h c e t s 病相关葡萄膜炎诊断模型 一、实验材料与方法8 1 病例来源及入选标准8 2 实验方法1 0 二、实验结果1 3 第二部分：筛选B e h c e t s 病相关葡萄膜
3、炎活动期的血清学标记物 一、实验材料与方法2 5 1 病例来源及入选标准2 5 2 实验方法2 7 二、实验结果：3 2 讨论：4 2 结语- 4 7 参考文献4 8 综述5 1 致谢6 0 北京协和医学院临床医学专业毕业论文 英文缩略词表 ( T a b l eo fE n 9 1 i s hA b b r e V i a t i o n ) P A G E p o l y a c 叫l a m i d eg e l 聚丙烯酰胺凝胶电泳 e l e c t r o p h o r e s i s V K H 、o 垂- K o y a n a g i - H a r a d a 小柳原田综合
4、征 s y n d r o m e 3 北京协和医学院临床医学专业毕业论文 中文摘要 目的： 应用蛋白质组学技术建立B e h c e t 病相关葡萄膜炎诊断模型并筛选血清学标 记物。 方法：1 5 2 例血清样本包括B e h c e t 病相关葡萄膜炎活动期、缓解期、小柳原田病 ( V K H ) 各3 1 例及5 9 例正常对照，所有样本同批进行M A L D I T O F 州s 结合蛋白质芯片 分析并绘制蛋白指纹图谱；应用B P s 软件建立诊断模型并进行独立样本验证；应用 磁珠结合、电泳及质谱技术分离、纯化和鉴定差异蛋白；应用E L I S A 和免疫沉淀技 术验证所得蛋白质。 结
5、果：1 ) 在质荷比1 0 0 0 5 0 0 0 0 m z 范围内将B e h c e t 病相关葡萄膜炎同V K H 及正常 对照相比较，建立B e h c e t 病相关葡萄膜炎血清蛋白质组学诊断模型，经独立验证敏 感性为8 4 6 2 ，特异性为9 0 9 1 。2 ) 6 个蛋白峰( M 17 1 1 8 2 、M 8 6 8 8 13 、M 11 4 9 0 3 、 M 1 15 4 8 2 、M 3 9 4 7 8 0 和M 5 8 5 1 8 8 ) 在B e h c e t 病相关葡萄膜炎活动期与缓解期患者 中有表达差异( p 3 9 7 9 4 2 删1 6 4 4 _
6、9 6 3 9 7 9 4 2 & M 1 6 4 49 6 1 0 9 4 1 9 & & M 1 7 1 1 8 2 3 9 7 9 4 2 & & M 1 6 4 4 - 9 6 1 0 9 4 1 9 & M 1 7 1 1 8 2 2 2 8 7 3 1 & & M 8 5 5 9 5 4 1 0 9 4 1 9 & & M 1 7 1 1 8 2 2 2 8 7 3 1 & & M 8 5 5 9 _ - 5 4 1 1 8 0 2 8 则进入终结点7 ，模型诊断为绿色，即V K H 结点8 当满足蛋白峰强度M 6 6 2 8 - 9 1 3 9 7 9 4 2 & M 1 6 4
7、 4 _ 9 6 1 0 9 4 1 9 & & M 1 7 1 1 8 2 2 2 8 7 3 1 & M 8 5 5 9 5 4 4 0 9 9 2 7 则进入终结点8 ，模型诊断为绿色，即V K H 表1 6 各结点样本组成 结点 差异蛋白峰( m z ) B DV K fN C 1 6 6 2 8 9 l4 93 l4 8 68 5 5 9 5 41 664 74 3 4 7 7 11 634 M A L D I T O F M S 通过分析给出了各结点的质谱图( 其中结点2 和结点7 同为 M 4 3 4 7 7 1 ) ，其余各结点各不相同，如图1 4 ；表1 6 和1 7 则分别
8、显示了各个结点 及终结点( 即诊断结果) 的样本组成； 1 7 北京协和医学院临床医学专业毕业论文 图1 4 各结点( 差异蛋白峰) 的质谱图 结点1 ( - 6 6 2 8 9 1 ) M 6 6 2 8 9 1M 6 6 2 8 9 1 mm _ 结点2 ( 附3 4 7 7 1 ) M 4 3 4 7 7 1M 4 3 4 7 。7 1 圃 回 |Mi | | l ； 。，0 ij i i ； | ： i ： i | i ； | ：| | ； ； l i 5 一J I ( 谳7 么 L - ，2 ：一 i r _ = - 一l J 一t 一一 。 一 1 十一一一 一。!么 一一一 一，
9、L ；一 4 卜 L t - 。，、J F ：hl ：_，止 ：，一 ：一 ；。oU凡 一 黟鳓缫罗“沙4 譬8 习 霞：。 I 轳 彩 匿 。 霪 暨 | ：；羹 缆匿 | ，：| li 。 ； 狻 l ；：一鬟毳| 隧n 缓k 。邃 l 鋈 z。磁磊蠡差缸i磊。彩磊磊荔翻蕴缢磊赫；磊施0溯l 。j 一h一 一 I 。 k ，i 4 _ 日幢 上 k J 一 圃 l 一 1 小，一：| 四 。 。“l - - h -彳 训一1L 1上二一二二一 r一”弋7一”“一“：“1 北京协和医学院临床医学专业毕业论文 结点3 ( 睨0 3 2 1 6 ) M 2 0 3 2 16 二二一两 _ _ 一
10、* j 一 ， 一一：一J n ”：二：一 玑。 _ - - - P一一 ： H _ 、哺一，。趴- 一_ - _ - C _ 。- - _ _ - - - _ 。 h ，一么 r ，“h 一一、L 、M _ 叫、 州，& ，囊二叫j ，H 。 仁圳 。 一“。一 。j 。h k o 。 。 M 2 0 3 2 16 ”呵零t 1 7 ! 。缈“? j 麓 l | 黝 ； ： 硼 卜巨 甥 ： 鞫 ，l ； ； j 酲 a 臣ll ：磋 暮 声 ! | | 。 ；，； 良l。飘薹 潆# 缓秘，2 ，澍 结点4 ( 啪6 4 4 9 6 ) M 16 4 4 9 6 I 二一风：么二。L j r
11、 k 、1 ，、。八、，、。、，_ 。、，L ，。，L _ r 。、o _ I ：、一_ _ _ 。n ，h 6 ，H J 、_ _ 。- n ： ： L 、7 ，、v 、，、 ，。_ 。_ 。 - ，_ 、 _ ，o _ 。- - _ ，1 _ 。- - 人4 叶n ，J L 、p n 、 - h h 加J 、_ ，、戏k 二、， M 16 4 4 9 6 “y _ 1 厝”、”一“ ! f鬈 ；囊1；l 嚣 。 ：； 矗-； 囊一 一 i i 鬈 ， 萋 、一；f “ “ 霪 l ； 耘 雾 蓁 霪 l 萋 雾 ；， j ， g， 笏 |薹 ； 礞 ；主文卜已嚣| 回 圃 陬 围 回 四
12、圆 圈 圃 回 回 回 北京协和医学院临床医学专业毕业论文 结点5 ( 喇7 “ 8 2 ) M 1 7 11 8 2 ： J 【，! 一 l o h v ? k 嘲，、 k - ，一叫o _ 。m J _ 、 一一一 P v 、k _ 一J 曼d 蟹垴孤 ”1 、u h _ “r 耐、挑 ： 氏 - - ，、，d n 二h 叫， i 一 h J L 、。J _ _ L ，k ，- - j A ，n - - “ n - z ：氏j ：e 聂K 。兰：三：蜊酝：兰：。 M 17 1 1 8 2 r r 了。一懋7 飞 ，爹； 匿；谨蓬 匿! ； 鬟 j 霉 毳 ： 瑟 豫! i鬈鬈7i ：j 7
13、l 鹈 霞r 甏； 耋羲i ，蕤隧$ ；t ；缠； 羧赫荔鍪；基童藿氮；。擞篇 结点6 ( _ 8 5 5 9 5 4 ) M 8 5 5 9 5 4 。j 。 献么二0 一：久 ， J ； 八 一 一 一一，、 、产、I 刃 二一 一八、八 卜一二八么、L 。 八 、 ? ， I 一一心L i _ _ M 8 5 5 9 。5 4 _ 7j 薹Ml 嚣鼍月 萋萋 二 耋羹麦? 萋羹；吁 萋 重 。 j - ： 气： 垂 l耋掣主二 结点7 ( _ 4 3 4 7 7 1 ) ( 图见结点2 ) 圃 围 墙伸54幡5商伸，存悖商”语m e O 北京协和医学院临床医学专业毕业论文 表1 7 各终结点的样本组成 表1 8 在源数据中的分组错误 M i s c I a s s m c a t i O nf o rL e a mD a t a 。分组 总例数 错分例数错分比损芙彳 04 981 6 3 30 1 6 14 848 3 30 0 8 23 141 2 9 0 0 1 3 表1 8 ：B P s 5 0 软件在建立模型以后，对于所应用4 9 例肋、4 8 例N C 和3 1 例
