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1、水稻花药的一种整体染色制片技术” 杨 弘 远周嫦 （ 武 汉 大 学 生 物 系） 朱至清等（ 1 9 7 8 ) 1 1提出的花药整体制片法， 在小麦、 黑麦、 玉米等植物的花药培养工作中都 已证明是研究雄核发育的一项有用的技术。但 水稻花粉孚尔根反应不明显，因而有必要探索 其它整体染色方法。通过试验，我们发现爱氏 苏木精 （ E h r li c h s h e m a t o x y l in )整体染色效果 较好， 现介绍如下： 染液的配制 爱氏苏木精原液的配制方法是：苏木精 2 克溶于 1 0 0 毫升无水酒精与1 0 毫升冰醋酸中。 硫酸铝钾5 克在1 0 0 毫升蒸馏水中加热溶化
2、。 将以上二液混合， 再加1 0 0 毫升甘油， 摇匀。去 掉瓶塞， 用纱布包扎瓶口， 置光亮处任其成熟， 直至溶液呈深紫红色， 盖紧瓶塞， 长期保存。 临用前， 用冰醋酸与 5 0 %酒精的等量混合 液稀释原液，使之进一步酸化 。原液与醋酸酒 精的比例可以是 4 : 1 , 2 : 1 或 1 : 1 。我们通常用 1 : 1 的染液作花药整体制片。 固定与保存 花药在醋酸甲醇( 1 : 3 ） 中固定数小时， 然后 换人 7 0 %甲醇保存。 用甲醇代替卡诺( 3 : 1 ) 固 定剂中的乙醇， 可以减少花粉的收缩。 为了避免花药在以后多次处理中开裂造成 花粉与愈伤组织的遗失，以致影响观察
3、统计的 精确性， 可以采用 B h a n d a r i ( 1 9 7 6 ) EZ 提出的棉 胶喷膜技术。这对培养中、后期的花药尤有必 要。水稻花药较小， 喷膜不方便， 我们对原法作 了如下修改：将花药从固定液或保存液中逐个 地轻轻镊出， 在滤纸上稍微吸干， 迅速在棉胶溶 液 ( 1 外棉胶溶于 3 : 7 乙醚与无水酒精混 合 液 中） 中蘸一下， 再在滤纸上吸干一下， 使花药表 面形成一层棉胶薄膜 （ 切忌内部干燥） ， 立即转 人保存液中。 染色与制片 1 . 换人 5 0 界甲醇， 约 2 0 分钟。 2 换入爱氏苏木精稀释液，染色 1 -2 天。 染液只需淹没材料即可。材料在此
4、染液中不致 过度染色， 不需分色。 3 . 蒸馏水换洗三次， 每次数十分钟， 直至彻 底洗去材料中的余色。 4 自来水换洗三次， 每次数十分钟， 直至花 药由浅紫红色转呈蓝色。换洗的方法是静止的 浸泡， 不用流水冲洗。 5 经过 5 0 并、 7 0 形、 8 5 多、 9 5 关, 1 0 0 务（ 二 次）酒精脱水，换人无水酒精与二甲苯 1 : 1 混 合液。 再经二甲苯 （ 二次） 透明。 每步各约需 2 0 分钟。注意：花药若有棉胶膜，则不可用无 水酒精脱水，因棉胶溶于无水酒精。在这种情 况下可经下述程序脱水透明, 1 : 9 5 沁 酒精一 无水酒精与氯仿 1 : 1 混合液（ 二次
5、） 一无水酒 精 、 氯仿、 二甲苯 1 : 1 : 1 混合液一二甲苯（ 二 次） 0 6 用稀加拿大树胶在 3 0 左右温 箱 中 浸 胶一天。 7 封片：在载玻片上加一滴加拿大 树 胶， 铺匀。 将数枚花药整齐地排列在树胶中， 加上盖 玻片， 用铅笔的橡皮头轻压盖玻片， 使花药略微 变扁，以便观察。也可以如下进行花粉粒的封 藏：在载玻片上整齐地加几小滴树胶，每滴刚 好容纳一枚花药。用镊尖压碎花药，使花粉密 布在各滴树胶的范围内。稍加静置，当树胶略 显凝稠时，再加一滴树胶于其间。轻轻覆上盖 1 ）工作中得到曾子申、 徐树华同志热倩支援， 特此致谢。 3 5 玻片。这样，一张盖玻片下可以分别
6、封藏数枚 花药的花粉，彼此不致混淆，而且花粉比较密 集， 便于观察统计。 效果 爱氏苏木精是一种良好的整体染色剂3 1 O 我们的试验表明，用此法不需分色即可显示水 稻活体与离体花药中的花粉构造（ 见图） 。活体 花药中的液泡化单核与二核花粉染色清晰；充 实花粉虽可显示细胞核， 但细胞质染色嫌深， 反 差不够好。离体培养花药用此法制片可以透过 药壁统计花药中的多细胞花粉粒与愈伤组织， 也可以观察早期多细胞花粉粒中的细胞核数目 与分布情况。 参考文献 图 1 单核靠边期的花粉。 2 活体花药中的小抱子分裂（ 后期） ， 分裂轴垂 直于花粉壁。 3 离体培养花药中的二核花粉。由于分裂轴改 变为与花
7、粉壁成切向， 形成两个均等的子核。 斗 培养花药中的多细胞花粉粒。 ， 低倍镜下的整体花药，示其中包含的许多大 小不等的愈伤组织。 1 朱至清、 孙敬三、 王敬驹：1 9 7 6 ，小麦雄核发育的细胞 学研究。植物学报， 2 0 : 6 -1 1 0 2 B h a n d a r i , N. N., 1 9 7 6 . P o ll e n e m b r y o s - c e ll o i d i n - s p r a y me t h o d f o r p a r a f f i n s e c t i o n i n g . S t a i n T e c h n o l o
8、g y , 5 1 : 2 4 5 -2 4 6 . 【 3 J o h a n s e n , D . A . , 1 9 4 0 . P l a n t Mi c r o t e c h n i q u e , p . 5 3 , 7 9 . M c G r a w - H i l l B o o k C o m p a n y , N e w Yo r kLo ndo n. 4 S h a r m a , A . K. , 1 9 7 2 . C h r o m o s o m e T e c h n i q u e s , p . 1 4 5 . B u t t e r wo r t
9、h s , Lo n d o n ; Un i v e r s i t y P a r k P r e s s , Ba l t i mo r e . （ 上接第3 0 页） 上）的指标进行鉴定的。1 9 7 8 年春季气候比较 湿润， 在抽穗、 灌浆后遇到了大风和暴雨， 在大 风暴雨后的第二天在田间进行了目测鉴定，原 品种农大1 3 9 ， 有芒白4 号等倒伏很厉害， 而稳 定的矮秆突变系均未倒伏， 或只有轻微倾斜。 四、 矮秆突变系株高降低与 穗部性状的关系 参考文献 汇 1 徐成满：1 9 6 4 ， 快中子作用下获得有 益的冬小麦突 变 体。遗传学集刊， 5 : 5 5 -7 3 .
10、2 B o r o j e v i c , K., B o r o j e v i c , S . , 1 9 7 2 . M u t a t i o n s b r e e d i n g i n w h e a t . I n d u c e d Mu t a t i o n s a n d我a n t I m p r o v e m e n t . I A E A V i e n n a , 2 3 7 -2 5 1 . 3 B o g y o , T . P， S e a r a s c i a - Mu g n o z z a , S i g u r b j 6 r n s - s
11、o n , B . a n d B a g n a r a D. , 1 9 6 9 . 人d a p t a t i o n s t u - d i e s wi t h r a d i a t i o n - i n d u e e d d u r u m wh e a t mu - t a n t s . I n d u c e d Mu t a t i o n s i n P l a n t s . I A E A Vi e n n a , 6 9 9 -7 1 7 . 4 Wo o , S . C ., K o n z a k , C . F . , 1 9 6 9 . G e n
12、e t i c a n a l y - s i s o f s h o r t - c u l m mu t a n t s i n d u c e d b y EMS i n T r i t i c u m a e s t i v u w m , . I nd u c e d Mu t a t i o n 讯 Pl a nt s . I AE A V i e n n a , 5 5 1 -5 5 5 . 5 S e a r a s c i a - Mu g n o z z a , G . T . , 1 9 6 4 . I n d u c e d m u - t a t i o n i n
13、b r e e d i n g f o r L o d g i n g r e s i s t a n c e . T h e u s e o f I n d u c e d mu t a t i o n 伽p l a n t b r e e d i n g . 5 37 . 6 Ma c k e y , J，1 9 5 4 . N e u t r o n a n d X - r a y e x p e r i - me n t s i n w h e a t a n d a r e v i s i o n o f t h e s p e l t o i d p r o b l e m . H
14、e r e d i t a s , ( 4 0 ) ： 6 5 . 7 Mo a s a e B a , B . C . , 1 9 6 5 . II o u y e e H H e M y T a n T O B y o a a m o f n m e n o q u C O P T a u O A A e R C T a H e M y - n y g e i ic H 6 M C T P L I B H e f T p o a O B . P a d u a u u x“C e m x z yu r y A T O M 13 3 仄 A T , 77 - 81 . 国内外矮化育种的实践表
15、明，矮生性状往 往同青枯、 早衰、 籽粒批、 品质差等不良性状连 锁在一起，因此必须在茎秆矮化的同时要求籽 粒饱满， 千粒重高。从表2资料可见， 所有中选 的矮秆突变系及农大 1 3 9的中高秆类型的突变 系1 3 3 5 , 1 0 6 8 , 1 0 2 4 , 1 1 5 3的千粒重均高于原 品种。在 M， 代对一些有希望的中高秆型进行 了初步产量鉴定（ 鉴定圃为5 行区， 行长5米， 行距3 0 厘米， 重复2 次） 。鉴定的结果， 这4 个 中高秆突变系的产量，折合亩产比原品种增加 6 . 0 多 -1 4 . 7 关（ 表2 ) 。可见用诱变育种方法诱 发小麦矮秆、 抗倒伏突变是很有效的途径。 36
