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1、氯霉素在对虾体内的动力学研究 李兰生?王勇强? ?青岛海洋大学?青岛?山东省海水养殖研究所?青岛? 提?要?在水产养殖领域倍受重视的药物动力学的应用可有效地避免虾病用药的盲目性氯霉素被认为是抑 制虾原弧菌作用最强的药物?实验中取平均体长? ?的样本虾?经暂养后一次性投喂定量药饵?然后在不同时 间间隔取样本虾速冻保存?经适当预处理后测定各组织内氯霉素含量应用高效液相色谱法进行了药物动力学 研究?分离条件? ?柱? ? ? ? ? ? ? ? ?洗脱液? ?型紫外检测器方法快速?准确?在? ? ?浓度范围内线性关系良好?相关系数为? ? 关键词?高效液相色谱法?药物动力学?氯霉素?中国对虾 分类号
2、? ? ? ? ?前言 药物动力学是指导正确使用药物?提高用药合 理性与有效性的一门应用基础学科?在临床医学和 药学等方面深受重视在水产养殖领域?国外学者曾 进行过一些鱼类体内药物动力学方面的研究由于 对虾养殖与虾病防治工作起步较晚?有关对虾体内 药物动力学方面的研究一直未见报道近年来随着 对虾养殖业的发展?虾病用药也日益增多?其中不免 存在许多盲目性在这种情况下?进行对虾体内的药 物动力学研究具有重要的理论和实践意义 通过药物筛选和最低抑菌浓度测定?氯霉素被 认为是抑制对虾病原弧菌作用最强的药物将药物 按约?的含量?与对虾饵料预混料及鲜杂鱼浆充分 混匀制成药物饵料颗粒?烘干后测定实际药物含量
3、 实验虾平均体长? ? ?根据实验设计将虾经暂养 后一次性投喂定量药饵?然后在不同的时间间隔取 实验虾样本速冻保存分析测定前将样本虾称重解 剖?分离消化道和肝胰脏?经适当处理后分析测定各 组织内的药物含量? 使用高效液相色谱法分析测定氯霉素?具有良 好的线性?回收率及精确度? 将测得的数据进行归纳整理和回归分析等数学 处理?得到了这种实验药物在对虾体内的动力学过 程及有关参数 ?实验部分 ?分析仪器与条件 仪器? ? ? ? ? ?公司? ?型高效液相色谱仪? 包括由? ?梯度自动控制的两台? ?型高压泵? ? ?型自动进样器? ?型紫外检测器? ?型记 录仪使用外标法软件进行积分计算 条件?
4、固定相? ? ? ? ? ?公司? ? ? ?色 谱柱?流动相为甲醇?重蒸馏水? ?甲醇系浙江 黄岩产色谱洗脱剂?经?微孔滤膜过滤?超声 波脱气? ?后使用?检测波长为? ?标准品制备及标准曲线 使用东北制药总厂生产的医用氯霉素粉剂?批 号?经提纯后作为标准品?配制成? ? ? ?个浓度标准?经进样测定? 线性关系如表?和图?所示回归方程为? ?峰面 积? ? ? ?浓度? ? ? ? ? 图?氯霉素标准曲线 ? ? ?样品制备 生物样品中化学成分复杂?为提高实验可靠性 及保证仪器正常运行?应在样品处理时尽可能不损 失待分析成分而除去蛋白质等大分子物质通过实 验证明?使用甲醇作为提取溶媒同时又
5、作为蛋白质 沉淀剂具有较好的效果?具体操作方法如下? ? 第?卷第?期色? ?谱? ? ? ? ?年?月? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 本课题获山东省科委基金资助 ?本文收稿日期?修回日期? 表?氯霉素线性关系测定结果 ? ? ? 浓度 ? ? ? ? ? 峰面积 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 将对虾组织样品加等量蒸馏水?在玻璃匀浆器 中匀浆?然后加甲醇?使甲醇量为前二者总量的?倍 不断振摇研磨? ?使氯霉素充分溶出?蛋白质变 性沉淀?再转入?离心管?以? ? ? ? ?转速离 心? ?取上清液进样分析经以上方法处理过的
6、 样品?蛋白质可去除?以上?满足仪器的分析要 求?进样量为? 氯霉素标准品及对虾样品中氯霉素色谱图见图 ?和图? 图?左?氯霉素标准品色谱图 ? ? ? ? ? ? 图?右?对虾样品中氯霉素色谱图 ? ? ? ? ? ? ?回收率的测定 在空白肌肉组织中加氯霉素标准液使含量分别 为? ?按样品制备方法操作?每个 样品进样测定?次?结果见表? ?以上实验结果表明?本实验方法及条件完全能 满足要求?氯霉素与样品中其它组分能很好地分离? 并具有良好的线性关系及回收率 ?实验材料与方法 ?药物饵料的加工制作 称取东北制药总厂生产的医用氯霉素粉剂?批 号?与饵料原料?及鲜杂鱼?混 合制粒 表?回收率测定
7、结果 ? ? 已知浓度 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 测得浓度 ? ? ? ? ? ? ? 平均值 ? ? ? ? ? ? ? ? 回收率 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?实验样本的获取 一次性投饵后的取样时间见表?使用?注 射器直接从实验虾体内取样?每份? ?将血淋巴 液样置于小玻璃瓶中密封冷冻保存同时还进行了 连续投喂药饵的实验取样?取样时间见表? 表?一次投喂药饵后的肌肉样品中氯霉素含量? ? ? ? ? ? ? 样品号 ? ? ? 取样时间? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 平均? ? ? ? ? ? 误差? ? ? ? ? ? ?对
8、虾体内氯霉素的分析测定 样品在分析测定前一直保持冰冻状态?一次投 喂药饵的样品虾在分析测定前每尾单独称重?在每 尾虾体侧取肌肉组织块?留作处理分析?然后将 虾体解剖?剥离胃肠道及肝胰脏将肌肉组织块加蒸 馏水? ?在玻璃匀浆器中匀浆?再加甲醇? 研磨? ? ? ? ? ?离心? ? ?后取上清液进样 分析血淋巴样品每份? ?加甲醇至? ?研 磨? ?后离心?取上清液进样分析每组的胃肠道 和肝胰脏分别合并称重后匀浆?加甲醇稀释至? ? 研磨? ?离心取上清液进样分析 连续投喂药饵的样品虾按每组?尾进行肌肉混 合取样?再按前述方法处理分析?测得数据为?尾虾 的平均值 将以上制备好的样品在高效液相色谱
9、仪上用外 标法进行分析测定 ?色?谱?卷 ?结果 一次投喂氯霉素药饵后的肌肉组织样品分析测 定结果见表?连续投喂药饵的样品分析结果见表? 一次投喂药饵后血淋巴液分析结果见表?一次投喂 药饵后胃肠道及肝胰脏分析结果见表?氯霉素含量 变化趋势见图?和图? 表?连续投喂药饵肌肉中氯霉素含量? ?尾平均值? ? ? ? ? ? ? ? 样品号 ? ? ? 氯霉素含量 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 取样时间 ? ? ? ? ? ? ? 第一次投饵后 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 第二次投饵后 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 第二次投
10、饵后 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 第三次投饵后 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 第三次投饵后 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 第四次投饵后 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 第五次投饵后 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 第六次投饵后 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 表?一次投喂药饵后血淋巴液中氯霉素含量? ? ? ? ? ? 样品号 ? ? ? 取样时间? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 平均? ? ? ? ? ? 误差? ?
11、 ? ? ? ? 表?一次投喂药饵后胃肠道与肝胰脏中氯霉素含量? ? ? -? ? ? ? ? 取样时间 ? ? ? ? ? ? ? ? 胃肠道? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 肝胰脏? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?参数计算与讨论 ?根据样品的分析测定结果可以看出?对虾摄 食氯霉素药饵后约 ? 在肌肉组织和血淋巴液中达 到峰值浓度但峰值浓度水平较低?且个体差异大? 误差范围与平均值接近?相对误差可高达? 在 ? 肌肉组织中?最高浓度? ?低者仅? ? 高低之差达?倍肝胰脏中药物浓度较高?且衰减 速度慢?到?仍可检出? ?这与磺胺甲基异 口恶口坐在对虾体内
