《双组分调控系统1910hkrr调控猪链球菌2型致病性研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《双组分调控系统1910hkrr调控猪链球菌2型致病性研究（96页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号： 华中农业大学博士学位论文 1 8 3i 8 观 密级： 双组分调控系统1 9 1 0 H K R R 调控猪链球菌2 型 致病性研究 S t u d yo nt h er e g u l a t i o no fp a t h o g e n i c i t yb yt w o - c o m p o n e n t r e g u l a t o r ys y s t e m s1 9 1 0 H K R Ri nS t r e p t o c o c c u s s u i ss e r o t y p e2 博士研究生：袁芳艳 指导教师：陈焕春院士 贝为成副教授 专业：预防兽医
2、学 获得学位名称：农学博士 研究方向：动物病原微生物学 获得学位时间：2 0 1 0 年6 月 华中农业大学动物科技与动物医学院 二。一。年六月 学位论文 是否保密 否 如需保密，解密时间年月 日 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定与我一同X - 作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意 研究生签名： 魑艳 时间：口I 。年 6
3、月r 日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版， 并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表，传播学位论文的全 部或部分内容，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力 注：保密学位论文( 即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 文) 在解密后适用于本授权书 学位论文作者娩老若佟导师她f 贿戈 签名日期：如l 年6 月，日签名日期：知I 年月厂日 注：请将本袭直接装订
4、在学位论文的扉页和目录之问 双组分调控系统191 0 H K R R 调控猪链球菌2 型致病性研究 目录 缩略语表( A B B R E V I A T I O N ) I 摘要I I I A B S T R A C T V 第l 章文献综述l 1 1 猪链球菌病的危害与防治l 1 1 1 病原学1 1 1 2 流行病学2 1 1 3 临床症状2 1 1 4 病理变化3 1 1 4 诊断。3 1 1 5 治疗与防制3 1 2 猪链球菌毒力因子及致病机理研究进展5 1 2 1 荚膜多糖( C P S ) 5 1 2 2 溶菌酶释放蛋白( M R P ) 和细胞外因子( E F ) 5 1 2 3
5、 溶血素( S l y ) 。6 1 2 4 纤连蛋白结合蛋I 刍( F B P S ) 7 1 2 5S o r t a s e 7 1 2 6 透明质酸裂解酶( h y a l u r o n a t el y a s e ) 7 1 2 7 血清浑浊因子( S e r u mO p a c i f i cF a c t o r , O F S ) 8 1 2 88 9 K 序列8 1 2 9 其它猪链球菌毒力因子8 1 3 双组分调控系统。8 1 3 1T C S 的组成及信号转导模式9 1 3 2T C S 与细菌的致病性1 0 1 3 3T C S 与与疾病防控1 1 第2 章研究目
6、的与意义1 3 第3 章材料与方法1 4 3 1 实验材料1 4 3 1 1 菌株、质粒、细胞和培养条件1 4 3 1 2 主要试剂、耗材、试剂盒及仪器16 3 1 3 培养基及抗生素的配制1 7 华中农业大学博+ 学位论文 3 1 4 主要溶液及配制18 3 1 5 引物2 1 3 1 6 实验动物2 1 3 2 实验方法。2l 3 2 1 细菌的增殖及S S 2 基因组D N A 的提取2 1 3 2 2P C R 产物或酶切产物的回收与纯化2 3 3 2 3 感受态细胞的制备2 3 3 2 4 连接产物的转化2 3 3 2 5 重组质粒的鉴定2 4 3 2 6 细菌计数2 4 3 2 7
7、 重组转移质粒的构建2 5 3 。2 8S S 2 双基因缺失株A 1 9 1 0 h k r r 的构建2 6 3 2 9 互补菌株C A l 9 1 0 h k r r 的构建2 7 3 2 1 0A 1 9 1 0 h k r r 与C A l 9 1 0 h l c r r 的功能鉴定2 7 3 2 1 1 突变株的生物学特性研究2 8 3 2 1 2 细胞感染实验。2 9 3 2 1 3 中性粒细胞( P M N ) 介导的杀菌实验3 0 3 2 1 4 突变株对C D 1 小鼠致病力分析3 l 3 2 15 突变株对仔猪致病力分析3 2 3 2 1 6 动物试验统计分析3 3 3
8、2 1 7 基因芯片3 3 ：；2 18R e a l t i m eP C R 3 4 3 2 1 9 反应调节蛋白1 9 1 0 R R 的克隆表达及纯化3 4 第4 章结果与分析3 7 4 1S S 2 中1 9 1 0 H K R R 编码基因的一般特征3 7 运用软件T M H M MS e r v e rV 2 0 对1 9 1 0 H K 和1 9 1 0 R R 的跨膜螺旋区域进行分析， 结果分别如图4 2 A 和图4 2 B 。_ 。3 8 4 2S S 2 双组分调控系统1 9 1 0 H K R R 的生物学功能研究3 9 4 2 1 基因缺失突变株A 1 9 1 0 h
9、 k r r 和互补菌株C A l 9 1 0 h k r r 的构建3 9 4 2 2S S 2W T 、A 1 9 1 0 h k r r 和C A l 9 1 0 h k r r 的生物学特性研究4 3 4 2 3 基因1 9 1 0 h k r r 的缺失对S S 2 致病力的影响4 7 4 3 基因芯片5 5 4 3 1 基因芯片结果5 5 4 3 2 荧光定量P C R 验证。5 5 双组分调控系统1 9 1 0 H K R R 调控猪链球菌2 型致病性研究 4 4 反应调控因子1 9 1 0 R R 与受调控基因的结合特性研究5 8 4 4 1 反应调控因子1 9 1 0 R R
10、 的基因克隆与原核表达5 8 4 4 2 凝胶迁移或电泳迁移率实验( e l e c t r o p h o r e t i em o b i l i t ys h i f ta s s a y , E M S A ) ! ；9 第5 章讨论与结论6 1 5 1 讨论6 1 5 1 1 关于双组分调控系统与细菌的致病性。6 1 5 1 2 关于双组分调控系统1 9 l O H K 爪R 选择6 1 5 1 31 9 1 0 H 腿对S S 2 致病力的影响。6 2 5 1 41 9 1 0 H K R R 调控S S 2 致病的可能分子机制6 4 5 2 结论6 6 致谢7 7 附录7 8 双组分调控系统1 9 1 0 H K R R 调控猪链球菌2
