《双环醇对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡、线粒体膜电位和casepase3的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《双环醇对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡、线粒体膜电位和casepase3的影响（58页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、河北医科大学 l8 】- 1 - 571 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师( 或指导小组) 的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则，承担相应的法律责任。 研究生签名味刍雹移师 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究 成果
2、，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生答辄参饼 导师签立： p f o 年占舄7 日 轰毪懑 蕊强一 矗，。 o 蠢j 卜 肾影。自 章 弓 勰加 导铡 年 院 p 学 矽 缄 7 目录 l l r liJllrJ I I l l f l l f l l l rU f l l l l l l l l J I l l l l l l l Y 18 0 010 7 中文摘要0 OOOOOB00 OOOOOOO OOIOO OOo 000 0 00 000000 0 00 1 英文摘要0 OOOODOOO DOO 4 研究论文双环醇对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡、线粒体膜电位
3、、 c a s p a s e 3 活性的影响 前言O OOOQO ”8 一 丹l J 舌“”“ “”“”一“一”一“” 材料与方法O OOOOOOOD 8 结果O OOOOO OOO 1 6 附I 羽O OO OOD 1 9 附表”一”“”“”一“一”一”一“一“2 7 讨 仑O OOOOOO OO 一3 3 结论3 7 参考文献3 8 综述肝星状细胞凋亡调控因素的研究进展4 2 致谢O OOOOOIOOOOO 5 2 个人简历5 3 中文摘要 双黄醇对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡、线粒体膜电位、 c a s p a s e 3 活性的影响 摘要 肝纤维化( h e p a t i cf i b
4、 r o s i s ，H F ) 发生的中心事件是由于肝星状细胞 ( h e p a t i cs t e l l a t ec e l l ，H S C ) 激活，细胞外基质( e x t r a c e l l u l a rm a t r i x ，E C M ) 生成过多、降解相对不足，在肝内大量沉积。在H F 恢复期，H S C 凋亡明 显增多，一方面消除了E C M 的来源，另一方面也解除了金属蛋白酶组织 抑制物( t i s s u ei n h i b i t o ro fm e t a l l o p r o t e i n a s e ，T I M P ) 对基质金属蛋白
5、酶 ( m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e s M M P s ) 的抑制作用，从而促进胞外基质的降 解。因此，诱导活化H S C 凋亡可使H F 发生逆转。双环醇是中国医学科学 院药物研究所研制的抗肝炎新药，其化学名为6 甲氧羧基1 5 羟甲基2 ，3 ， 2 ，3 双亚甲二氧基4 ，4 二甲氧基联苯。研究表明双环醇对各种实验性急、 慢性肝损伤均有保护作用；临床上治疗慢性乙型、丙型肝炎已取得较好的 效果。有研究显示双环醇可以使肝纤维化大鼠的I l I 前胶原肽( P I I I P ) 水平 下降；同时研究发现临床上双环醇对慢性乙型肝炎的
6、肝纤维化有效。推测 双环醇可能通过增加H S C s 的凋亡，从而达到治疗肝纤维化的作用。 目的：本实验通过设计不同浓度的双环醇干预体外培养的肝星状细 胞，研究它对激活的肝星状细胞增殖与凋亡的影响；对肝星状细胞线粒体 膜电位( m i t o c h o n d r i a lm e m b r a n ep o t e n t i a l ，M M P ) 的影响；对细胞凋亡酶 C a s p a s e 3 活性的影响。 方法：体外培养大鼠肝星状细胞，进行以下分组：对照组； 0 0 1 m m o l 1 双环醇组；0 1 m m o l 1 双环醇组；0 5 m m o l 1 双环醇组
7、； 不含D M S O 组； A C D E V D C H O 组。 应用M T T 法、3 H T d R 掺入法检测双环醇对激活肝星状细胞增殖的影 响。用H o e c h s t 3 3 2 5 染色荧光显微镜下检测细胞凋亡率；J C 1 染色激光共 聚焦显微镜检测H S C s 线粒体膜电位，流式细胞仪检测H S C s 线粒体膜电 位；应用酶标仪检测C a s p a s e 3 的酶活性。 结果：不同浓度的双环醇对H S C s 增殖的影响：M T T 法检测显示， 对照组与不含D M S O 组A 4 9 0 值无差别，说明0 0 2 D M S O 对H S C s 增殖 中
8、文摘要 没有影响( P O 0 5 ) ；对照组的A 4 9 0 值总体均数与不同浓度的双环醇组 的差异有统计学意义p O 0 5 ) ，在1 6 h 、1 8 h 、3 2 h 三个时间点凋亡率均高于 对照组p 0 。0 5 ) 外，各组C a s p a s e 3 活性总体均数差异 研究论文 有统计学意义( 尸 O 0 5 ) ，O 5 m M 组( 2 3 2 7 4 - 0 1 7 9 ) C a s p a s e 3 的活性最 高，其次为O 1 m M 组与A c E D V E C H O 组( 1 6 4 3 4 - 0 0 5 5 ) ( 见T a b e l l 。 F
9、i g 7 ) ，双环醇可增高C a s p a s e 3 的活性，与药物浓度有关，浓度越高作用 越强，O 5 m m o l l 的双环醇作用最强：而A c E D V E C H O 可抑制双环醇增 高C a s p a s e 3 的活性的作用。 1 8 研究论文 附 图 C o n t r o I R ；r o up w i t h o u tD M S 0g r o u o 1 9 研究论文 0 。01 m m o l 以。，。绝；i g Y S ! Q ，! 。 g r o u p 、 6 o v 、“，叶 p 、 ， ，毕 0 。lm m o l l 囊i 剿翊烈g r o u
10、 p 研究论文 0 。5 m m o l l b i c y d o ig r o u p F i g 1 d e t e c tc e l la p o p t o s i sr a t ew i t hH o e c h s t 3 3 2 5 s t a i n i n gi m a g e db yf l u o r e s c e n c em i c r o s c o p e I nt h ep i c t u r e s ，t h es h i n ym a t e r i a li sc o n d e n s e dn u c l e a rc h r o m o s o
11、m eo ra p o p t o t i cb o d i e s F i g 2 。1( 9 n 留p i g r 9 U 渺 研究论文 F i g 2 2 P 硅沁e g r o u p F i g 。2 。3b i c v c l o I8hg r o u o 研究论文 F i g 2 。4b i c v c i o li G h g r o u p F i g 。2 。5b i c v c i o I2 4 h R r o u O 一 F i g 2W i t hJ C - 1d y el a s e re o n f o c a lm i c r o s c o p et od e
12、 t e c tH S C sm i t o c h o n d r i a lm e m b r a n e p o t e n t i a l T h er a t i oo fr e df l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yV Sg r e e ni n d i c a t e dm i t o c h o n d r i a im e m b r a n e p o t e n t i a l 研究论文 t W 静 艟 R a t e ( ) 1 2 h 2 4 h3 6 h4 8 h F i g 3 T h e m e a ni n h i
13、b i t o r yr a t eo fH S C sp r o f i f e r a t i o na td i f f e r e n tt i m e sd e t e c t e dw i t h M T Tm e t h o d 糍灞疆t 重。6 毯匿飘 重，4 重2 - 墓 l I豳 臻霾l 暾 E 圈 l ”。I l l I 口i W 卜豳 o 。曩n l墓 o 。6 D 4 “ o 2 一 A p o p t o s i s 艟妤p 嗽h o u tD M C O N O 0 Z m M O 2 r a M 9 7 S m M c 螺c D E 协铋铷t F i g 5 w
14、 i t hH o e c h s t 3 3 2 5 s t a i n i n gb yf l u o r e s c e n c em i c r o s c o p et od e t e c tt h ea p 叩t o s i s 珊t e o fH S C si n t e r v a l 矗膨矽哇尊喜I 善r 尊 亭蟊如 酾气一一 O h 8 h 1 6 h 2 4 h 3 6 h 。 c o n t r 0 1 B i o cl o l F i g 6W i t hH o e c h s t 3 3 2 5s t a i n i n gb yf l u o r e s c e n c em i c r o s c o p et od e t e c tt h ea p 叩t o s i sM t e o fH S C si n t e r v a lb y0 5 m M B i c y c l o la td i f f e r e n tt i m e s 一 一 叩 始 胎 蜡 瓣 研究论文 C a s e p a s e 3a c t i v i t yu I n 艟一 o 2 童，亭 聋 o5 n C o n t r o l0 。0 1 m M 0 、t
