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1、,双击该图标,打开软件,出现此界面,确认 选择为第一个( Quantitative PCR), 点击OK,此处3个按钮,自左向右 依次为设置、运行、分析,选中实验中所用的孔,与仪器上相对应 随后在Well type的下拉选框里选择相应 的Unknown(待测样本)、NTC(阴性 对照)、NPC(阳性对照)。,选中Unknown孔,随后在Collect Fluorescence data 下面的FAM打上勾。对PTC、NTC做同样的操作,1.选中实验中A行所用的孔以及H2、H3,选择Assign Assay Names,2. 在弹出的Well annotation窗口选Assign Assay
2、with selected wells ,在Dye项选FAM ,在Assay项编辑探针名称,如Flua,在Assay Color选该探针的曲线染色,如蓝色。按Cloes退出。,B行、C行、阴性、阳性对照操作与A的操作方法相同。,最后选Thermal Profiles Setup进入反应程序设定,选Delete 多余的步骤。,选segment 添加2个步骤,以Segment 2 为例,设定程序。 选play with Ramp,添加子步骤,点击温度项,设定温度,点击时间项,设定时间,设定循环数,设定荧光检测时间点,把End point 拉到segment 3的 55度,当板、程序全部设置 完全后
3、,点击Run进 入 运行界面。点击Start(如果两次时间间隔较长最好把Turm lamp off at end of run 选上),点击Start会弹出此保存对话框 选择合适的路径,保存实验结 果,并开始实验。实验结束后 无需再次保存。,快速导入模板方法,假如 已有实验结果,日后进行 同类实验时可直接使用Import (模板导入)功能。点击Import 弹出此对话框,找到作为模板的 文件,打开即可导入板设置。,快速导入模板功能,导入程序设置方法: 选择Custom,点击 Import,按前述 方法 导入模板的程序设置,如何观察结果,在Analysis结果分析 界面下,选择扩增曲 线Amplification plots 观察扩增曲线,选择Text report可以 更方便地 观察每一个 样品的拷贝数情况。,