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1、临床微生物标本的采集与运送,采集的基本原则,1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.采样后立即送检 5.标本容器须无菌，但不得有消毒剂 6.送检标本应注明来源和检验目的,如何提高细菌阳性检出率？,标本采集时机 标本采集方法 标本的质与量 标本的运送与保存 镜检筛选合格标本（退检制度） 高质量、 多种分离培养基 培养环境,标本分类,1。血液及骨髓标本 2。呼吸道标本 3。泌尿生殖道标本 4。粪便标本 5。脓液及创伤感染分泌物标本 6。穿刺液标本 7。真菌感染标本,血液及骨髓标本,采集及运送,血培养指征,不明原因的发烧(38)或体温过低(3
2、6) 白细胞增多（ 10*109/L），粒细胞减少 休克，皮肤黏膜出血，多器官衰竭，血压降低，CRP升高，呼吸加快 严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染，) 心率异常加快 血 液病患者可出现粒细胞减少、血小板减少,采集血培养样本的最佳时间,尽可能在患者寒战和发热高峰3060分钟内采血 在患者接受抗生素治疗前采血 如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血培养,采血套数及部位,成人“一套” 血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，也叫“一份” 注意：一次穿刺采血，算“一套”，采集第二套应从另一个穿刺点获得。 儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采集多次。特殊患
3、者才考虑厌氧培养。,采血套数及部位,每位患者每次采血最少2套，3套更好 初发患者，绝不能只采1套标本，采集1套无法判断是病原菌还是污染菌。 多个穿刺部位采血。因多部位同时发 生污染的几率较小，便于对结果进判断,采血套数及部位,常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置中采集，检出污染或定植菌的可能性较大。除非怀疑导管相关性血流感染，需经外周静脉穿刺采集2套血培养，从导管中心或静脉留置口隔膜采集1套血培养，同时做血管内导管尖端（末端5cm）半定量或定量培养,关于标本采集间隔时间,对于急性感染患者，应在5分钟内从不同部位（双臂）分别采集23套血培养。 发热原因不明患者，在24小时内应从不同部位采血23
4、套，间隔不少于60分钟 可疑急性心内膜炎患者要立即取血作血培养，起始采集3套血培养（每次间隔不少于30分钟），如果24小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。 可疑的亚急性心内膜炎患者需在30分钟至1h内连续采集3套标本。然后才开始抗菌药的经验治疗,采集血液量,采血量是影响灵敏度最关键因素 成人一份标本2个培养瓶（需氧厌氧），每瓶810ml（不少于5ml),共1620ml；要求至少采两套标本，即40ml。 儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量1总血量下，一般不少于2ml， 应先将标本注入需氧瓶，然后再厌氧瓶，采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床90以上的感染为需氧菌或兼性需氧菌感染,采各种血液
5、标本的先后顺序,尽量不要与其他采血同时进行 血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、凝血等其它标本要高。 所以要最先采集血培养标本。,关于皮肤及培养瓶消毒,1、关于皮肤及培养瓶消毒 推荐使用碘酊、碘伏、70%乙醇、次氯酸作为皮肤消毒剂。 碘町、70%乙醇作用1min 碘伏作用1.5-2min,2、培养瓶的消毒程序：,去掉培养瓶口的塑料瓶盖。 70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子60秒。 自然待干。 将标本注入培养瓶内。 5. 轻轻颠倒混匀标本与肉汤，以避免血液凝集。,培养瓶的储存温度,采集后的血培养应即送检，接种前后的血培养瓶均不得冷藏，更不能冷冻。保存在1525的室温即可，冷藏或冷冻会使一些微生物
6、死亡,尿培养标本,采集及运送,尿培养送检指征,尿路感染、肾结核、泌尿系结石、膀胱排空功能受损或前列腺增生等患者，出现尿频、尿急、尿痛等膀胱刺激症状 肉眼脓尿或血尿，尿常规检查有白细胞或亚硝酸盐阳性 不明原因的发热或留置导管的患者出现发热、尿道口有脓性分泌物等症状 泌尿系统疾病手术前等情况,尿培养采集时间,应选择在抗菌药物应用之前采集尿液。 通常应采集晨起第1次尿液送检，确保尿液在膀胱内停留4小时以上,尿培养标本,清洁中段尿 导尿导管尿 经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液 不能立即送检者，可暂存4冰箱，但保存不超过8h,清洁中段尿液,尽量取早晨第一次尿液 嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人
7、收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水冲洗尿道口 排出前段后，不停止尿流，采集中段尿 男性病人 翻转包皮，清洗尿道口 排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿,导尿管尿液,集尿袋内的尿液不能用作培养； 导尿管末端的尿液也不能用于培养，因为很难避免没有尿道菌群污染。 留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不能把导尿管与尿袋拔开后收集尿液。 采样端口用碘酒消毒；必要时，可先夹住导尿管但不能超过30分钟；将注射器针头斜插入采样端口，抽吸出510ml尿液；注入无菌杯中,膀胱穿刺采集尿液,常用于患儿、泌尿道厌氧菌感染或脊柱损伤病人等。 可避免尿道或会阴细菌的污染，但对膀胱内少量尿液的小儿难以实施。 严
8、格无菌操作消毒耻骨联合上皮肤，用无菌注射器穿刺入膀胱抽取510ml尿液置于无菌容器中并送检。 可用于厌氧菌检测,尿培养标本的运送,应及时送检 室温下存放不得超过2小时（夏季更短），不能即时送检，应48度冷藏，但保存不得超过24小时，但应注意冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌培养 若同一份标本中检到3种或以上不同种微生物，被认为标本污染，退回重送,生殖道和尿道标本送检指征,当患者出现斑疹、丘疹、结节、水疱、囊肿、糜烂、溃疡等皮肤黏膜损害 男性患者出现尿痛、尿频、 尿急、尿道分泌物增多，会阴部疼痛及阴囊疼痛、性功能障碍，甚至泌尿生殖器畸形和缺损等； 女性患者出现阴道分泌物增多及性状异常、阴道痛痒、疼
9、痛或性功能障碍,尿道分泌物采集方法,患者排尿1小时后采集 男性先用生理盐水局部清洗，采取从尿道口溢出的脓性分泌物，或尿道内24cm旋转拭子停留20秒后取出分泌物送检 女性清洗尿道口后，从阴道内压迫悄道或向前按摩，使分泌物溢出后采集标本，无肉眼可见的脓液，可用灭菌 拭子轻轻深入前尿道内24cm旋转拭子停出留20秒后，取出分泌物送检,生殖道标本本本采集标本,生殖器溃疡标本：用无菌盐水和手术刀清除溃疡面，暴露出溃疡基底，渗出物积聚较明显时，用拭子或吸管采集 宫颈标本：原则上不采集宫腔分泌物，以免引起感染播散 阴道标本：先清除阴道表面的分泌物，弃之，然后在后穹隆或阴道上端采集黏膜分泌物 子宫内膜标本：
10、清除阴道和宫颈分泌物后，用双腔真空吸引器或拭子采集宫内膜标本 输卵管标本：在腹腔镜或剖宫产术下或将拭子插入输卵管采集 羊水标本：经腹壁羊膜腔穿刺采集 前列腺按摩液：清洗尿道口，排尿冲洗尿道后，用前列腺按摩法采集前列腺按摩液 精液标本：受检者应在5日以上未排精，清洗尿道口，采用手淫法或体外排精法受样,尿道和生殖道标本送检,室温下标本2小时内送至实验室（夏季缩短） 淋病奈瑟菌培养避免冷藏或冷冻，外界气温低时应注意保温 阴道内有大量正常菌群存在，采取宫颈标本应避免触及阴道壁,呼吸道标本,采集与运送,上呼吸道感染送检指征,病毒性普通感冒伴有明显咽痛时，怀疑为咽部链球菌感染，应做细菌培养 细菌性咽-扁桃
11、体炎：明显咽痛、咽部发红、畏寒、发热，体温可达39度以上 喉咙痛、咳嗽、喉部有脓样分泌物等临床症状 上呼吸道感染易并发鼻窦炎、中耳炎、气管-支气管炎，需送相应部位分泌物或痰液进行细菌培养,上呼吸道感染部位及采集,上呼吸道标本包括：口咽、鼻咽和鼻腔部位 鼻拭子的采集：最好使用扩鼻器，先用拭子去鼻黏膜表面的分泌物并丢弃，用第2个拭子蘸取无菌生理盐水或营养肉汤，插入鼻孔采集 咽拭子的采集：先让患者有清水漱口，用无菌咽拭子由口腔进入，越过舌根到咽后壁或腭垂的后侧，采集鼻咽红肿处标本，取材后小心将拭子退出，立即放入无菌试管内。采集标本可在咽部多点采集标本，以提高检出率,上呼吸道标本的注意事项,采集后应立
12、即送检，室温运送时间2小时 避免由干燥而使某些细菌死亡 标本采集前数小时不得用消毒药物漱口或涂抹病灶局部 咽部是呼吸和食物的通路，应以晨起后采集为宜,下呼吸道标本的送检指征,凡是发热、咳嗽、和咳痰，痰呈脓性、黏稠或血性，并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音 外周血WBC总数及中性粒细胞比例明显增高 X线检查提示肺部有炎症性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道标本,咳痰方法,病人先漱口，去除表面的菌群 教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 无痰可用35NaCl 5ml雾吸约5min导痰 取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口 也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽
13、吸等法取痰,痰标本细胞学筛选标准,近年来推荐判别标本合格的简单方法是痰标本涂片镜检10个白细胞低倍镜，就可判断是基本合格并可用于细菌培养的标本，尤其是白细胞减少的患者。,痰培养的运送和保存,尽快（2h）送至实验室。 如不能及时送达，应将标本暂存于4（疑为肺炎链菌感染、流感嗜血杆菌等标本不能冷藏），但放置时间不可超过24h。 对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续23天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现改变； 被口咽部菌群污染的标本如咳痰等不可用于厌氧菌培养。,粪便标本,采集及运送,粪便标本采集指征,腹泻、大便每日3次，粪便的性状异常，可为稀便、水样便、脓血便及血便，可伴有恶心
14、、呕吐、食欲不振、发热、腹痛及全身不适等，尽量在用药前采集粪便。 伤寒患者于发病2周后采集粪便。 怀疑霍乱时立即采集粪便送检。 粪便涂片镜检WBC 5个/HP,粪便标本采集方法,自然排便法：取新鲜粪便的黏液、脓血等有意义成份2-3克或1-2ML，置于无菌容器中送检。 直肠拭子法：难以获得粪便或排便困难者及幼儿采用此法。,粪便标本的运送,室温条件下运送标本的时间不能超过2小时 怀疑霍乱弧菌感染立即送检,脓液标本的采集,怀疑感染存在，应尽早采集标本，一般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后12日采集 开放性脓肿：标本包括眼（结膜、角膜）、外耳、扁桃体、术后切口感染等脓性分泌物。 开放性脓肿：首先用无
15、菌生理盐水清洗病灶表面的污染杂菌，用无菌棉拭子先蘸少许生理盐水，然后采集靠近组织部分脓液及病灶深部的分泌物（最好从脓肿底部或脓肿壁取样,脓液标本的采集,闭锁性脓肿：指有完整脓壁与体腔，与外界不相通的脓肿，如疖、痈、淋巴结脓肿、乳腺脓肿、肺脓肿、脑脓肿、肾周脓肿、阑尾脓肿、腹腔积液、心包积液、腹腔脓肿、关节腔积液、肛周脓肿等标本 闭锁性脓肿：应采集渗出物和脓肿壁标本，不主张用拭子采集，在采集此类标本前，对患者病灶局部皮肤或黏膜表面进行消毒，用无菌注射器将脓肿内容物吸出，然后切开脓肿、引流，采集脓汁（大于1ml)用于检验 闭锁性脓肿：可以进行厌氧培养,脑脊液标本,采集时间：怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液，最好是在应用抗生素之前采集脑脊液。 采集方法:无菌腰穿采集脑脊液1-3ML注入血培养瓶中（只要需氧菌培养） 标本送检：采集后应在15分钟内送检，延误室温保存，但不超过24小时，决不可放入冰箱,穿刺液标本,穿刺液标本包括胆汁、胸腹水、关节液、心包液、鞘膜积液标本等。 无菌操作穿刺抽取标本15ML，放入无菌瓶或接种于血培养瓶 标本送检：采集后应在15分钟内送检，延误室温保存，但不超过24小时，若做真菌培养需4保存 做此类标本的同时，建议同时做血培养及厌氧菌培养,不建议采用的标本,
