《临床尿液、粪便检验及微生物标本处理.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《临床尿液、粪便检验及微生物标本处理.ppt（112页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、临床尿液、粪便检验及微生物标本处理,泰州市人民医院韩俊岭,尿液常规检验,一、标本的采集,尿常规标本可采集晨尿、二次晨尿、随机尿； 容器、尿量，病人留尿前的准备； 采集后2小时内完成常规检验。,二、尿液的干化学检测,（二）、尿液分析仪试剂带 多联试带是将多种检测项目的试剂块，按一定间隔、顺序固定在同一条带上的试带。使用多联试带，进入一次尿液可同时测定多个项目。 采用多层膜结构： 第一层：尼龙膜保护作用，防止大分子物质对反应的污染；,尿液常规检验,4,支持层,吸水层,碘酸盐层,过滤层,透明膜,试剂层,试带的多层膜结构,2、尿液的干化学检测,反应层,尿液常规检验,5,尿试带的多层膜结构,过滤层：尼龙
2、膜，起保护作用，防止大分子物质对反应的影响 反应层：绒制品，包括过碘酸盐区（有的无此区）和试剂 区，过碘酸盐区可破坏VitC的干扰；试剂区含有试剂成分主要与所测物质发生反应，产生颜色反应。 吸水层：可使尿液均匀快速深入，并能抑制尿液流到相 邻反应区。 支持层：不被尿液浸润的塑料片做支持层。 空白块：用于消除尿自身颜色在试剂块上产生颜色的干扰。,尿液常规检验,1检测项目 尿液的酸碱度（pH）、比密（SG）、蛋白质（PRO）、葡萄糖（GLU）、酮体（KET）、胆红素（BIL）、尿胆原（URO）、 亚硝酸盐（NIT）、白细胞（LEU）、隐血（BLD）、维生素C（Vit C），一个或多个检测内容可组成
3、不同的组合。 2试带反应原理 酸碱度（pH）：采用pH指示剂法。用甲基红（pH4.66.2）和溴麝香草酚蓝（pH6.07.8）两种指示剂适量组合成为复合pH试剂模块，其呈色范围为pH4.59.0，颜色发生橙红、黄绿及蓝色变化。,尿液常规检验,比密（SG）：采用离子交换pH指示剂法。尿液中电解质释放出的阳离子与试带中的离子交换体中的H交换，释放出的H与酸碱指示剂反应，根据指示剂显示的颜色（蓝、绿、黄）可换算尿液中的电解质浓度，以电解质浓度来代表密度，从而得出比密值。 尿蛋白（PRO）：采用 pH指示剂蛋白误差法。试剂模块中主要含有酸碱指示剂溴酚蓝、枸橼酸缓冲系统和表面活性剂。在Ph3.2时，溴酚
4、蓝电离、带负电荷并释放H,带负电荷的溴酚蓝与此时带正电荷的蛋白质（白蛋白）生成复合物，导致溴酚蓝进一步电离产生更多的H，当超过缓冲范围时，指示剂发生颜色改变（黄、绿、蓝），变色程度与蛋白质含量成正比。,尿液常规检验,尿葡萄糖（GLU）：采用葡萄糖氧化酶法。尿液中葡萄糖在试带中葡萄糖氧化酶的催化下，生成葡萄糖酸内酯和过氧化氢。在有过氧化物酶的情况下，以过氧化氢为电子受体使色素原（邻甲联苯胺、碘化钾等）氧化而呈色。色素原不同，呈色可为蓝色、红褐色或红色。 尿酮体（KET）：采用亚硝基铁氰化钠法。检测尿酮体的模块中主要含有亚硝基铁氰化钠，可与尿液中的乙酰乙酸、丙酮产生紫色反应。其对乙酰乙酸的敏感性为
5、50100mg/L，对丙酮为400700mg/L，不与-羟丁酸起反应。,尿液常规检验,尿亚硝酸盐（NIT）：采用偶氮法。尿液中含有来自食物或蛋白质代谢产生的硝酸盐，如尿液中含有大肠埃希菌等具硝酸盐还原酶的细菌时，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐与芳香胺的重氮反应形成重氮盐，随后发生偶联反应，形成红色重氮色素。 尿白细胞（LEU）：采用中性粒细胞酯酶法。中性粒细胞的酯酶能水解吲哚酚酯生成吲哚酚和有机酸，吲哚酚可进一步氧化形成靛蓝，或吲哚酚和重氮盐反应生成紫色重氮色素。,尿液常规检验,尿胆原（URO）：采用醛化反应法：在强酸条件下尿胆原和对-二甲氨基苯甲醛发生醛化反应，生成樱红色缩合物。偶氮法：
6、在强酸条件下尿胆原和对-四氧基苯重氮四氟化硼发生重氮盐偶联反应，生成胭脂红色化合物。 尿胆红素（BIL）：采用偶氮法。在强酸性介质中，胆红素与试带上的二氯苯胺重氮盐起偶联作用，生成红色偶氮化合物。,尿液常规检验, 尿隐血（BLD）：采用过氧化物酶法。血红蛋白中亚铁血红素具有弱的过氧化物酶样作用，以催化H2O2作为电子受体使色原（常用的有邻联甲苯胺、氨基比林、联苯胺等）氧化呈蓝绿色，其颜色的深浅与血红蛋白成正比。 尿维生素C（VitC）：采用还原法。试剂模块中含有2，6-二氯酚靛酚钠、中性红、亚甲基绿磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，维生素C能还原氧化型染料，而使指示剂发生由绿或深蓝至粉红色的颜色变化，颜
7、色的深浅与VitC含量成正比。也有采用VitC和作为色素原的磷钼酸反应，形成钼蓝的原理。,尿液常规检验,12,尿试纸法的项目和反应原理,项 目 代号 反应原理 试剂主要成分 酸碱度 pH pH指示剂 甲基红、溴麝香草酚蓝 蛋白质 PRO 指示剂的蛋白质误差法 溴酚蓝、枸橼酸钠、表面活性剂 葡萄糖 GLU 葡萄糖氧化酶 葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、色原受体 隐血 BLD Hb类过氧化酶法 过氧化氢茴香素或过氧化氢枯烯、色原受体 胆红素 BIL 偶氮反应法 2, 4-二氯苯胺重氮盐 尿胆原 URO 醛反应法 对二甲氨基苯甲醛或对甲氧基苯重四氟化硼 酮体 KET 亚硝基铁氰化钠法 亚硝基铁氰化钠 亚硝
8、酸盐 NIT 亚硝酸盐还原法 氨基苯砷酸、1,2,3,4-四氢并喹啉-3酚 白细胞 LEU 酯酶法 吲哚酚酯、重氮盐 比密 SG 多聚电解质离子解离法 甲氧乙烯顺丁烯二酸、溴麝香草酚蓝 抗坏血酸 VitC 吲哚酚法 2,6-二氯酚靛酚钠,尿液常规检验,【操作】 1混匀尿液 2浸湿试带 3沥去多余尿液 4比色与分析 5报告方式,尿液常规检验,【注意事项】 1熟悉试带特性 必须了解所用试带各膜块反应原 理、药物干扰以及参考范围等，掌握试带检测每一成分的敏感度和特异性。很多中间环节和干扰因素都可影响颜色变化而导致假阳性或假阴性。同一检测项目，不同厂家所用的色素原可能不同，因此存在显色差别 2注意试带
9、保存条件 尿试带应根据厂家推荐的条件（如温度、暗处等）保存，在有效期内使用。不应将试带放在直射光下照射或暴露在潮湿环境中，应保存在厂商提供的容器中，不可更换保存容器。,尿液常规检验,3规范操作 （1）试带从冷藏冰箱中拿出后，待平衡至室温再打开盛装的筒盖。一次只取所需要量的试带，并应立即将瓶盖盖好。多余试带不得放回原容器中，更不应该合并各瓶的试带。 （2）试带与尿液的反应时间需严格遵循产品说明书的规定，操作中注意切勿触摸试带上的反应检测模块。 （3）试带浸入尿液标本的时间应在12s，所有试剂模块，包括空白和参比模块，要全部渗入尿液中，试带上过多的尿液标本应去除干净。,尿液常规检验,4、室内质控
10、试带法检测应至少使用阴性和阳性质控品进行室内质控，每工作日至少检测1次。 结果偏差不超过1个等级，且阴性不可为阳性，阳性不可为阴性。 应制定程序对失控进行分析并采取相应的措施，应检查失控对之前患者样品检测结果的影响。,尿液常规检验,尿液常规检验,尿液常规检验,尿液常规检验,镜检标准: 1、泌尿道疾病、肾病、糖尿病、应用免疫抑制剂和妊娠者尿标本必须镜检。 2、尿标本外观、浊度不正常必须镜检。 3、同时满足以下5项条件：尿标本外观、浊度正常；白细胞酯酶结果为阴性；亚硝酸盐结果为阴性；尿蛋白结果为阴性；隐血（血红蛋白或红细胞）结果为阴性，可不镜检。否则必须进行镜检复核。,三、尿沉渣显微镜检查,尿液常
11、规检验,尿沉渣的检测方法： 1、直接镜检法：又称混匀一滴尿法 2、自然沉降法：尿液置室温下一定时间(15-30min)，移去上层尿液，余0.2mL左右，混匀镜检。 3、离心镜检法：尿液经一定转速一定时间离心后，移去上层尿液，余0.2ml，混匀镜检。 4、染色法：常用结晶紫沙黄法（Sternheimer-Malbin，S-M）对尿沉渣中的有形成份进行染色后镜检，提高尿沉渣的识别率和检出率。 5、尿沉渣计数板法：取10ml尿液于离心管内，在规定时间和转速下离心，移去上层尿液，取尿沉渣混,尿液常规检验,匀后滴入计数板内，显微镜下计数，换算成一定体积内尿有形成份的含量。 6、尿沉渣分析仪法：综合应用电
12、阻抗法和流式细胞术，定量检测非离心尿中的有形成份。,尿液常规检验,方法学评价： 1、尿沉渣显微镜检查 直接镜检法：简便易行费用低，但阳性率低，重复性差，易漏诊。一般用于门诊筛查、健康体检或有明显血尿脓尿患者。 离心法：相对于直接镜检法敏感、阳性率高，为我国临床常用的尿沉渣检查方法，并已制定了相关标准化操作规程。缺点是操作繁琐耗时，对门诊量大的医院做为常规项目检查劳动强度大。 尿沉渣计数板法：由于使用了标准化的定量计数板，使尿沉渣检查更符合标准化要求，更为定量和有比较性。,尿液常规检验,粪便检查 the examination of feces/stool,粪便组成,是水 是固体,未消化的食物,
13、消化道分泌物和有形成分,食物分解产物,细菌 占干重1/3,固体 成分,检查的主要目的,1.了解消化道以及消化器官是否有炎症、出血和寄生虫感染等情况; 2.OB试验作为消化道肿瘤的过筛试验; 3.根据粪便的性状和组成，了解消化状况，借以粗略判断胰腺外分泌功能; 4.检查粪便中有无致病菌以防治肠道传染病。,第一节 标本采集,一、标本的采集,采用自然排出的粪便 无粪便排出而又必须检查 肛门指诊或采便管采集标本。,标本采集注意事项,1标本容器 带盖、干净、干燥、无渗漏、无吸水性 细菌学检查：灭菌容器 2标本的采集量 常规性检查：约5g粪便 集卵检查和血吸虫毛蚴孵化：约30g粪便 3标本的采集部位 含粘
14、液、脓血等异常成分 从粪便的表面不同部位，深处及粪端多处取材,4标本的送检时间 随送随检，1h内检查完毕 阿米巴滋养体：立即检查，标本保温 5检查蛲虫卵 透明薄膜拭子/棉拭子:晚12时或清晨排便前自肛门周围皱裂处拭取，立即镜检。 6检查寄生虫虫体及虫卵计数 采集24小时粪便,7粪胆原定量检查 连续采集3天粪便，每天约取20g送检 8脂肪定量检查 脂肪膳食 50150g/日，连服6天，第3天开始收集72h内的粪便，混合称重，取约60g送检 9隐血试验化学法 素食三天，禁服VitC及铁剂等干扰试验的药品 10灌肠或服油类泻剂的粪便 不适合作检查标本,第二节 粪便理学检验,一、量 二、性状 三、颜色
15、 四、气味 五、寄生虫,一、量,粪便量的多少与人体的进食量、食物的种类及消化器官的功能状态有直接的关系。 进食粗粮及含纤维素较多的食物：粪便量相对较多；反之，则相对较少。 健康成人每日排便一次，粪便量约100300g。 病理情况：粪便的量、排便次数和性状等可不同程度改变。,二、性状,正常成人粪便： 黄色或棕黄色，质软，成形便 婴儿粪便： 黄色或金黄色糊状便。,粪便异常性状及可能原因1,粪便异常性状及可能原因2,三、颜色,正常人粪便：黄色或褐色 婴儿粪便：黄绿色 病理情况：粪便可不同的颜色改变,粪便异常颜色及可能的原因,四、气味,健康人粪便有一定臭味： 经细菌作用后，蛋白质分解产生吲哚、硫醇、粪臭素、硫化氢、靛基质等很多有臭味的物质 肉食者：含大量蛋白质而使臭味强烈 素食者：臭味相对较淡,慢性肠炎、胰腺疾病、消化道大出血、结肠或直肠溃烂： 多因未消化的蛋白质发生腐败而致粪便有恶臭 脂肪及糖类消化或吸收不良： 由于脂肪酸分解及糖的发酵，可致粪便有酸臭味 阿米巴肠炎：粪便呈鱼腥臭味,五、寄生虫,肉眼分辨的较大虫体： 蛔虫、蛲虫、猪肉绦虫、牛肉绦虫、阔头裂节绦虫等 将粪便过筛冲洗后： 可发现钩虫、鞭虫等细小虫体 服驱虫剂后：查有无虫体 驱绦虫后：寻找头节,主要肠道寄生虫形态,鞭形虫,鞭虫卵,鞭虫成虫,鞭虫卵呈纺锤形，大小约为502
