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1、,细胞实验室简介,作者 Vincent,细胞实验室组成 细胞实验室的设置 细胞实验室的基本设备配置 常用器皿、器械 实验室操作注意事项,大纲,细胞培养实验室的设计是由工作的目的和规模决定的， 其基本要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。 细胞培养实验室的设置必须满足三个基本的需要，即：实验准备（培养基配制，洗涤与灭菌等）、无菌操作、控制培养。,一.细胞实验室组成,基本组成：,基本实验室 消毒准备室 制备室 无菌操作室 辅助实验室 细胞学实验室 生化分析室 摄影室及暗室,消毒准备室 制备室 无菌操作室,1.基本实验室：,消毒准备室 功能 一切与实验有关的准备工作 要求 设备的安装和排列
2、要合理 房间要宽敞明亮，通风条件好 地面要便于清洁、防滑 配备 实验台，高压灭菌锅、排风灭火设备、 超声波清洗器、洗瓶机等。,制备室 功能 进行培养液及相关试剂的配制 要求 在无菌操作台内过滤、除菌。 配备 冰箱、天平、真空泵、PH计等。,无菌操作室 地面、天花板及四壁尽可能光洁，无死角，易于清洁。 大小适度，层高不高于2.5米。 干爽、安静、清洁、明亮。 紫外灯12盏，保持室内无菌状态。,无菌操作室 设置空气过滤和恒温恒湿装置，恒温温度26度左右。相对湿度控制在30-65%。 保持正压，尽量减少与外界的空气对流，减少尘埃与微生物侵入。 通常由内外间组成，外间为缓冲间，用于准备工作。 研究人员
3、进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。,无菌操作,（1）无菌操作室：无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，最好能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。 理想的无菌操作室应划为三部分： a) 更衣室供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。 b) 缓冲间位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境。 c) 无菌操作间专用于无菌操作、细胞培养。其大小要适当，且其顶部不宜过高（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌效果；墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。工作台安置不应靠墙壁，台面要光滑压塑作表面，漆成白色或灰色以利于酚红,显示pH的观察。 无菌操作间的空气消毒： 紫外线灯产生臭氧，并且室内温度及
4、湿度均较高，不利于工作人员健康。 空气过滤的恒温恒湿装置最好 无臭氧紫外线消毒器 电子消毒灭菌器在高压电场作用下，电子管的内外电极发生强烈电子轰击，使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。臭氧是一种强氧化剂，能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应，从而靠臭氧气体弥漫性扩散达到杀菌之目的，消毒时没有死角。消毒后空间的残留臭氧只需3040min即能自行还原成氧气，空气不留异味，消毒物体表面不留残毒。,细胞培养实验室应能进行五方面的工作： 无菌操作 制备 清洗 消毒灭菌处理 储藏,二.细胞实验室的设置,三.细胞实验室的基本设备配置,基本设备 灭菌设备 无菌操作设备 细胞培养设备 细胞学鉴定设备,冰
5、箱 天平 酸度计 恒温水浴锅 磁力搅拌器 液氮罐 纯水设备,1.基本设备,PH 7.07.4 去离子水 无菌,高温电子灭菌炉 蒸汽式压力灭菌锅 过滤灭菌装置 喷雾消毒器 紫外灯,2.灭菌设备,0.45 m 0.22 m,生物安全柜,3.无菌操作设备,生物安全柜 根据主要几项生物安全柜国际标准的规定，安全柜可分为一级、二级和三级三大类以满足不同生物研究和防疫的要求。安全柜的分类级别与生物安全登记无关。,一级生物安全柜 保护工作人员和环境，而不保护样品。 排气口安装有HEPA过滤器。 无自带风机，依赖外接通风管中的风机带 动气流。,二级生物安全柜 可提供对样品，环境，工作人员的保护。 排气口安装有
6、HEPA过滤器，独有特征是具有垂直层状薄片（无定向的）HEPA过滤器。 内置风机，形成下沉气流 无自带风机，依赖外接通风管中的风机带 动气流。,三级生物安全柜 为34级实验室生物安全等级而设计，柜体完全气闭。 通过手套进行操作，俗称“手套箱”。 实验品通过双门的传递箱进出。 适用于高风险的生物实验。,CO2培养箱 离心机,4.细胞培养设备,温度：370.5 CO2浓度：5% 相对湿度：100% 定期清洗、消毒,罐内压力指示,接培养箱的管子,输出压力指示,压力调节旋钮,流量控制阀门,5.细胞学鉴定设备,倒置显微镜 荧光显微镜 酶标检测仪 流式细胞仪,四.常用器皿、器械,培养器皿 移液器 特殊用具,移液器 电动移液器 微量移液器 多通道微量移液器,特殊用具 细胞筛网、细胞刮刀、细胞计数板,五.实验室操作注意事项,做好实验前准备，避免反复进出而增加污染机会 进入细胞培养室前需更换工作服,换鞋并洗净、消毒双手。 注意无菌室内的紫外灯 室内常规用品不准随意拿出室外，所有物品不得挪作它用,冰箱内的培养液要注明姓名、配制日期，不随便使用他人的培养液，以免交叉污染 注意各类设备运行状态，发现问题及时报告 实验完毕，及时清洁工作台面，将使用过的实验用品移出无菌室 定期对无菌室进行消毒灭菌,谢谢,
