急性冠脉综合征患者外周血中CD4CD25调节性T细胞的检测及意义

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1、华中科技大学 硕士学位论文 急性冠脉综合征患者外周血中CD4CD25调节性T细胞的 检测及意义 姓名：胡英锋 申请学位级别：硕士 专业：内科（心血管内科） 指导教师：李大主 20070501 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 2 急性冠脉综合征患者外周血中 CD4急性冠脉综合征患者外周血中 CD4 + +CD25 CD25 + +调 节性 T 细胞的检测及意义 调 节性 T 细胞的检测及意义 研究生：胡英锋 导 师：李 7 大主 教授 华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管病研究所 武汉 中 文 摘 要 中 文 摘 要 急性冠脉综

2、合征患者外周血中 CD4 +CD25+调 节性 T 细胞的检测及意义 急性冠脉综合征患者外周血中 CD4 +CD25+调 节性 T 细胞的检测及意义 目的: 目的: 探讨急性冠脉综合征患者外周血中 CD4 +CD25+调节性 T 细胞(Tregs )的数量和功 能的的情况，及其与疾病的关系。 方法: 方法: 28 例 ACS 患者（ACS 组） 、26 例稳定型心绞痛（SAP）患者（SAP 组）和 30 例 正常人（对照组）作为入选对象，提取各组外周血单个核细胞， CD4 和 CD25 抗体包 被后， 均采用流式细胞术分选并检测各组外周血中 Tregs 表达百分比。将 Tregs 及照 射过的

3、自身外周单个核细胞 （作为抗原呈递细胞） 与抗CD3活化的效应细胞 （CD4 +CD25-T 细胞）一起作三种细胞联合培养，测定 Tregs 的抑制增殖的能力，同时在培养终止前 取上清液 100l，用 ELISA 法检测循环及上清液中细胞因子检测 TNF-和 IL-10 水 平。 常规检测循环 CRP 及血脂水平。 结果: 结果: 外周血中 Tregs 表达百分比水平 ACS 组显著低于 SAP 组（P0.05）和对照组（P 0.05） ，ACS 患者中 Tregs 对效应性 CD4 +CD25-T 细胞的抑制增殖的能力明显低于 SAP 组和对照组。 结论: 结论: ACS 患者外周血中存在

4、Tregs 数量的减少及功能的降低，这可能打破了外周免 疫耐受的平衡，导致了相关 T 细胞活化和炎症反应激活。ACS 患者 Tregs 数量及功能 方面的异常可能参与动脉粥样硬化发生发展这一病理过程。 关键词: 关键词: 急性冠脉综合征；CD4 +CD25+调节性 T 细胞；炎性反应；动脉粥样硬化 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 3 Detection and significance of regulatory CD4+CD25+T cells in peripheral blood of acute coronary synd

5、romes Abstract Objectives To investigate peripheral numbers and function of CD4+CD25+regulatory T cell in peripheral blood of patients with acute coronary syndromes and to indentify the relationship between the abnormality in peripheral numbers and function of Tregs and ACS. Methods Frequencies of C

6、D4+CD25+ regulatory T cells in peripheral blood were detected in 28 patients with ACS ,26 patients with stable angina and 30 normal individuals by flow cytometry employing labelled antibodies to CD4 and CD25. Functional suppressive properties of Tregs were assayed by establishing a triple-cell cultu

7、re in which purified Tregs were incubated with 150Gy irradiated peripheral blood mononuclear cells(antigen-presenting cells) and anti-CD3-activated responder T cells. Meanwhile Before the culture termination ,we removed 100l supernatant,then measured levels of IL-10 and TNF- in supernatant and circu

8、lation by ELISA. The levels of CRP and blood-fat were detected routinely. Results The frequencies of CD4+CD25+regulatory T cells in peripheral blood in ACS group were significantly decreased compared to the SAP group and controls (all P0.05). Tregs in ACS patients were significantly compromised as t

9、heir ability to suppress responder CD4+CD25-Tcell proliferation was attenuated. Conclusion In patients with ACS, naturally occurring CD4+CD25+ Treg numbers are reduced and their functional properties compromised. The decrease in frequencies and function of Tregs may break the balance of peripheral i

10、mmunotolerance and induce to activation of associatied-T cells and inflammatory reaction. These findings may aid in understanding the pathological mechanisms leading to the development of atherosclerosis. 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 4 Key words Acute coranary syndromes； CD4+CD25+

11、regulatory T cell ； inflammatory reaction；atherosclerosis. 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 1 一英文缩略语简表一英文缩略语简表 Tregs regulatory T cells 调节性 T 细胞 MMPS matrix metalloproteinase 基质金属蛋白酶 AS atherosclerosis 动脉粥样硬化 DC dendritic cell 树突状细胞 CRP C-Reactive Protein C-反应蛋白 FBS fetal bovine serum

12、 胎牛血清 FCA flow cytometric analysis 流式细胞分析 FITC fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 PBMC peripheral blood mononuclear cell 外周血单个核细胞 ACS acute coronary syndromes 急性冠脉综合征 UAP unstable angina pectoris 不稳定型心绞痛 SAP stable angina pectoris 稳定型心绞痛 STEMI ST elevatory myocardial infarction ST 段抬高的心肌梗塞 NSTEMI No

13、n-ST elevatory myocardial infarction 非 ST 段抬高的心肌梗塞 AMI Acute myocardial infarction 急性心肌梗塞 CHD coronary heart disease 冠心病 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲生理盐水 TCR T cell receptor T 细胞受体 独创性声明独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人

14、和集体，均已在 文中以明确方式标明。本人完全意识到，本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。 本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密 ，在_年解密后适用本授权书。 不保密。 （请在以上方框内打“”） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 本

15、论文属于 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 5 前 言 前 言 冠心病(Coranary heart disease CHD)是一类严重危害人们健康， 影响人们生活质量 的疾病。冠心病是发达国家人口发病与死亡的主要原因，近年来在发展中国家特别在 我国呈现迅速增长趋势。急性冠脉综合征(ACS,acute coronary syndromes)是以冠状动 脉粥样硬化斑块不稳定为基本病理生理特点，急性或亚急性心肌缺血为共同临床表现 的一组综合征，其临床谱包括ST抬高的与非ST段抬高的心肌梗塞(STEMI,NSTEMI) 和不稳定性心绞痛(

16、UAP)。虽然冠心病的诊断与治疗近年来有了长足的进步，但其病 因学与发病机制的研究仍未明确。 已有多种学说从不同角度阐述， 如： 脂肪浸润学说、 血小板聚集及血栓形成学说和平滑肌细胞克隆学说等，近几年来研究表明动脉粥样硬 化是一种慢性炎症和自身免疫性疾病，认为炎症和免疫是内在和外在危险因素，是导 致动脉粥样硬化发病的中介和中心环节 【1-2】 。近几年的研究结果表明，不稳定的(或者 说易损的)动脉粥样硬化(AS,atherosclerotis)斑块具有特殊的解剖及组织学特点，如:在 冠脉管腔中由内向外生长、富含脂质核心、纤维帽薄弱、斑块部位存在大量活化的巨 噬细胞和T淋巴细胞、炎性负荷重等 【3-4】，其中，T淋巴细胞所引起的一系列特异性免 疫反应在动脉粥样硬化的发生和发展中起重要作用 【5】。 正是由于不稳定斑块中的各种 炎症细胞在斑块纤维帽内浸润，并分泌多种炎性因子及基质金属蛋白酶(MMPS) ，从 而降解基质蛋白、使斑块纤维帽变薄变脆，继而破裂、活