《蝇蛆壳聚糖对实验性高脂血症大鼠降血脂作用的研究与机制初探》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蝇蛆壳聚糖对实验性高脂血症大鼠降血脂作用的研究与机制初探（61页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第二军医大学 硕士学位论文 蝇蛆壳聚糖对实验性高脂血症大鼠降血脂作用的研究与机制初 探 姓名：张蕾 申请学位级别：硕士 专业：营养食品卫生学（临床营养学） 指导教师：蔡东联 20100501 壳聚糖对实验性高脂血症大鼠降血脂作用的研究与机制初探 摘要 一、研究背景 目前认为高脂血症是心脑血管病的最重要的危险因素之一。心血管疾病是发达国 家人口中死亡的重要原因，虽然发病机理尚未完全阐明，但与血脂升高是密切相关的。 血脂主要是指血清中的胆固醇和甘油三酯。无论是胆固醇含量增高，还是甘油三酯的 含量增高，或是两者皆增高，统称为高脂血症。 高脂血症可分为原发性和继发性2 类。原发性与先天性和遗传有关，是
2、由于单基 因缺陷或多基因缺陷，使参与脂蛋白转运和代谓 的受体、酶或载脂蛋白异常所致，或 由于环境因素( 饮食、营养、药物) 和通过未知的机制而致。继发性多继发于代谢性 紊乱疾病( 糖尿病、高血压、黏液性水肿、甲状腺功能低下、肥胖、肝肾疾病、肾上 腺皮质功能亢进) ，或与其他因素( 年龄、性别、季节、饮酒、吸烟、饮食、体力活 动、精神紧张、情绪活动) 有关。 高脂血症的治疗，目前所用的方法有：口服药物治疗、中医中药治疗、饮食治疗 和运动治疗等。现有的传统药物治疗方法，疗效多不明显，故有必要迸一步寻找疗效 更好、副作用更少的调脂新药。因此，如何防治高脂血症已成为国内外科学工作者的 一个重要研究课题
3、。 近年来的许多研究表明，许多天然化学物中的活性成分在高脂血症的预防和治疗 过程中疗效稳定、毒性小，不良反应少，可长期使用。在这之中，f 1 2 0 世纪8 0 年代以 来，壳聚糖及其衍生物以其独有的理化性质成为全世界研究的热点，并在医药、食品、 化工、环保、农业等诸多应用领域取得了突破性进展。 壳聚糖( c h i t o s a n ) 是天然多糖甲壳素( c h i t i n ) 的脱乙酰基产物，学名聚氨基葡糖，也 称为壳聚胺、几丁聚糖，是甲壳素最基本、最重要的衍生物，于1 8 5 9 年由法国人R o u g e t 首先得到。壳聚糖是自然界中少见的带正电荷的高分子聚合物，它含有游离
4、氨基，属 于碱性多糖，其相对分子质量，从数十万到数百万不等。这类多糖既可生物合成，又 可生物降解，与动物的器官组织及细胞有良好的生物相容性，无毒。降解过程中产生 的低分子寡聚糖在体内不积累，几乎没有免疫原性。目前已知壳聚糖及其衍生物具有 降血糖、抗氧化、抗微生物、增强免疫、调节血脂、抑制肿瘤等药理活性。 在以往壳聚糖研究中，大多数是以虾、蟹为原料，而以蝇蛆为原料制备壳聚糖甚 少。其实，蝇蛆中的壳聚糖含量高且质量优于虾、蟹等，应用前景十分可观。蝇蛆壳 聚糖在治疗高脂血症方面有着自己独特的优势，其治疗高脂血症过程并非单纯降脂， 还能改善血糖、纠正能量代谢紊乱，改善微循环，防治并发症的发生和发展，具
5、有开 第二军医大学硕士学位论文 发应用价值。随着其降血脂机制的更深入研究，蝇蛆壳聚糖必将在高脂血症的治疗和 预防中发挥更大的作用。 本研究根据高脂血症的营养代谢特点，建立稳定的高脂血症大鼠模型，以研究蝇 蛆壳聚糖在降血脂方面所表现出的调节血脂、改善脂代谢，并从临床营养学角度切入， 采用生物化学、分子生物学等研究手段，重点从蝇蛆壳聚糖调节血脂活性，阻止血清 胆固醇升高，改善肝脏脂代谢功能，调节机体血糖，增进胃肠动力等方面初步探讨蝇 蛆壳聚糖降血脂的作用机制，为防治高脂血症及其并发症、改善高脂血症患者生活质 量提供新的实验依据。研究内容包括4 个部分。 二、研究内容 第一部分实验性高脂血症大鼠模型
6、的建立 目的：成功建立适用于进行高脂血症营养治疗研究的动物模型，其模型要稳定、 可靠、重复性好。 方法：雄性S D 大鼠2 0 只，随机分为正常对照组( 1 0 只) 和模型组( 1 0 只) 。高脂 饲料配制：用1 胆固醇，1 0 猪油，1 0 蛋黄粉，0 1 胆盐及7 8 9 基础饲料配制丽 成。动物在适应性喂养1 w 之后，禁食( 不禁水) 1 2 h 后眼眶静脉丛采血，分离血清后用 生化分析仪检测血脂4 项，即总胆固醇( T C ) ，甘油三酯( T G ) ，高密度脂蛋白胆固醇 ( H D L C ) ，低密度脂蛋白胆固醇( L D L C ) 。正常对照组自由采食基础饲料；模型组自
7、 由采食高脂饲料，连续喂养8 w 。第5 6 d 禁食不禁水，1 2 h 后眼眶静脉丛采血，分离血 清后用生化分析仪检测血脂4 项，以确定高脂模型是否成功。 结果：造模前各组大鼠体重差异无统计学意义( 尸) 0 0 5 ) 。给高脂饲料8 周后， 高脂模型组大鼠体重显著增加，与正常对照组比较，差异有统计学意义( 尸( 0 0 1 ) 。高 脂模型组大鼠血清T C 、T G 、L D L C 含量显著升高，H D L C 无明显变化，表明高脂 模型造模成功。 第二部分蝇蛆壳聚糖对实验性高脂血症大鼠脂代谢的影响 目的：通过对实验大鼠的血脂，包括血清总胆固醇( T C ) 、甘油三酯( T G )
8、、 高密度脂蛋白胆固醇( H D L C ) 、低密度脂蛋白胆固醇( L D L C ) 、谷丙转氨酶( A L T ) 、 谷草转氨酶( A S T ) 、游离脂肪酸( F F A ) 、肝脂酶( H L ) 、脂蛋白脂酶( L P L ) 、总 脂酶含量的测定，探讨蝇蛆壳聚糖调节血脂、改善脂代谢以降低血脂的机制。 方法：雄性S D 大鼠7 0 只，随机分出1 2 只作为A 正常对照组，其余按第一部分 方法建模，将成模的高脂血症大鼠5 2 只，随机分为B 模型对照组( 1 3 只) ，C 蝇蛆 壳聚糖低剂量组( 1 3 只) 、D 蝇蛆壳聚糖中剂量组( 1 3 只) 及E 蝇蛆壳聚糖高剂量
9、组( 1 3 只) 。 2 壳聚糖对实验性高脂血症大鼠降血脂作用的研究与机制初探 各组大鼠连续灌胃3 0 d ，灌胃剂量如下：A 组( 正常对照组) 和B 组( 模型对照 组) ，每天等量蒸馏水灌胃1 次；C 组( 蝇蛆壳聚糖低剂量组) 、D 组( 蝇蛆壳聚糖 中剂量组) 、E 组( 蝇蛆壳聚糖高剂量组) 每天灌胃1 次，剂量分别为1 6 0 、3 2 0 和 4 8 0m g k g 。 第3 1 d 大鼠禁食1 2 h 后，用1 0 水合氯醛麻醉，眼眶及腹主动脉取血，测定血清 总胆固醇( T C ) 、甘油三酯( T G ) 、高密度脂蛋白胆固醇( H D L C ) 、低密度脂蛋 白胆固
10、醇( L D L C ) 、谷丙转氨酶( A L T ) 、谷草转氨酶( A S T ) ；血取净后，立即进行解 剖，观察主要脏器，剥离。肾周及睾周脂肪组织垫，用滤纸吸干组织液后称重，计算脂 体比；留取左侧肾周脂肪组织，部分左叶肝脏置液氮中保存，用于游离脂肪酸( F F A ) 、 肝脂酶( H L ) 、脂蛋白脂酶( L P L ) 、总脂酶的含量测定。 结果：各组蝇蛆壳聚糖均能显著降低血清T C 、T G 、L D L C 、A L T 、A S T 的含量， 显著升高H D L C 的含量，降低大鼠体重；蝇蛆壳聚糖组大鼠肝脏及脂肪组织中F F A 含 量低于模型对照组和正常对照组、L P
11、 L 和H L 活性高于模型对照组和正常对照组，L P S 未见显著差异，说明蝇蛆壳聚糖对改善高脂血症大鼠的脂代谢紊乱具有有益的作用。 第三部分蝇蛆壳聚糖对实验性高脂血症大鼠糖代谢的影响 目的：通过对实验大鼠的血糖、糖化血红蛋白、血清胰岛素的测定，探讨蝇蛆壳 聚糖降低血糖、改善脂代谢以降低血脂的机制。 方法：采用生化分析法测定糖化血红蛋白和血清胰岛素。 监测指标如下：第1 d 、ll d 、2 1 d 和3 1 d 空腹血糖；糖化血清蛋白；血清胰岛素。 结果：实验性高脂血症大鼠经过蝇蛆壳聚糖治疗后，3 个剂量组的空腹血糖与模 型对照组比较都有降低的趋势。蝇蛆壳聚糖低、中剂量组糖化血清蛋白含量低
12、于模型 对照组，但无统计学意义，高剂量组与模型对照组相比有统计学意义，差异显著( 尸 2 0 、粗脂肪 4 、粗纤维 5 、粗灰分 1 3 2 、蛋氨 酸+ 胱氨酸 O 7 8 。原料组成：鱼粉、小麦、玉米、豆粕、麸皮、植物油、奶粉、 苜蓿草粉、各种维生素、矿物质、必需氨基酸。能量密度为3 4 8 k c a l g 。 高脂饲料配方为：7 8 9 基础饲料、1 胆固醇、O 1 胆酸盐、1 0 蛋黄粉、1 0 猪油。能量密度为4 9 6 K c a l g 。 ( 2 ) 模型建立 大鼠自由进食，每天观察大鼠的一般状况、饮食变化、行为( 自主活动、精神状 态) 变化、毛发变化，每天称量饲料，每
13、周称量大鼠体重，造模0 、4 w 、8 w 时监测血 糖、血脂情况，8 w 结束造模实验，全部处死，采集标本检测。 ( 3 ) 标本采集 将大鼠禁食1 2 h 后，用1 0 水合氯醛麻醉，眼眶静脉取血，血样室温静置2 h 后， 2 0 0 0 r p m 离心2 0 m i n ，取上清液待用。测定甘油三酯( T G ) 、总胆固醇( T C ) 、高密度脂 蛋白胆固醇( H D L C ) 、低密度脂蛋白胆固醇( L D L C ) 。将血放干处死后立即取出大鼠 1 5 第二军医大学硕士学位论文 肝脏，肾周脂肪及睾周脂肪，称重后取部分肝组织以1 0 甲醛溶液固定，做常规石蜡 切块，并行H E
14、 染色，在光学显微镜下进行观察，其他组织放入液氮待用。 ( 4 ) 指标测定 生理学指标观察 肝指数测定：肝脏切取后滤纸吸干表面水分后称其湿重，计算肝指数：肝指数 ( 1 i v e ri n d e x ) = P r ：脏重量( g ) 体重( g ) 1 0 0 。 大鼠血清生化检测 大鼠血清标本由全自动生化分析仪进行检测，检测项目包括甘油三酯( T G ) 、总 胆固醇( T C ) 、高密度脂蛋白胆固醇( H D L C ) 、低密度脂蛋白胆固醇( L D L - C ) 。 大鼠肝脏病理检测 固定：将大鼠放血后切取其左叶肝脏，置于4 磷酸缓冲液( O 0 1 MP B S ，p H
15、 - - 7 3 ) 中沈去血液，在1 0 甲醛溶液中固定 l 脱水：标本经缓冲液冲洗3 0 m i n ，7 5 乙醇3 0 m i n ，8 5 乙醇l h ，9 5 乙醇( I ) 、( I I ) 各l h ，9 5 Z , 醇( I I ) l h ，9 5 乙醇( I I I ) 2 h ，无水乙醇( I ) 2 0 m i n ，无水乙醇( I I ) 3 0 m i n ， 无水乙醇( I I I ) 4 0 m i n J 透明：正丁醇加二甲苯3 0 m i n ，二甲苯3 0 m i n l 浸蜡、包埋：二甲苯加软石蜡经5 0 5 2 3 0 m i n ，6 0 * (
16、2 “ - - 6 2 “ C 硬石蜡1 h ，2 次包埋 l 切片：以4 1 t m 厚度置于载玻片上，3 7 烤片4 h 后室温下保存 l 苏木素染色液染色3 1 0 m i n l 自来水洗3 5 m i n l O 5 1 盐酸酒精溶液分化数秒钟 l 自来水洗3 “ - - 5 m i n 1 6 蝇蛆壳聚糖对实验性高脂血症大鼠降血脂作用的研究与机制初探 I 温热水洗5 l O m i n ，或弱碱性溶液3 0 一- - 6 0 s 显蓝 l 自来水充分冲洗 l 伊红复染2 m i n J 脱水透明：9 5 酒精和无水酒精：二甲苯透明各2 次；2 m i n 次 l 松脂固封 l 光学显微镜下观察大鼠肝脏病理变化 ( 三) 统计分析 数据应用S P S S l l 5 软件进行统计学处理，数据用均数标准差( x 土S ) 表示，各 组率的比较采用t 检验；P O 0 5 时，有统计学意义，差异显
