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1、实验项目 血清胆固醇的测定-CHO 2学时,血清胆固醇浓度增高见于动脉粥样硬化，肾 病综合症，胆总管阻塞，黏液性水肿和糖尿病。 其他如肥大性骨关节炎、老年性白内障及牛皮 癣等血清胆固醇有增高。 血清胆固醇浓度降低常见于恶性贫血、溶血 性贫血及甲状腺功能亢进时，血清胆固醇降低， 其他如感染和营养不良等情况。,临床意义,【参考值】：3.10mmol/L5.70mmol/L,一、实验目的,掌握：血清胆固醇测定的原理、操作方法和临床意义。,二、实验原理,2、,3、,4.生成的醌类化合物颜色的深浅与胆固醇的含量成正比， 用72-1型分光光度计分别测定标准管和测定管的吸光度值， 计算胆固醇的含量。,1、,
2、三、实验器材与试剂,（1）试管 3支 （2）水浴箱 1台 （3）试管架 1个 （4）洗耳球 1个 （5）微量五档可调移液器 2支 （6）刻度吸量管（5ml） 1支 （7）72-1型分光光度计 1台,（一）实验器材,微量五档可调移液器,使用方法：,1.将吸嘴套在移液器头上轻轻转动，以保证密封。 2.使用前应先将移液器吸液和排液几次，润洗吸嘴和保持 腔内外气压一致。 3.选择量程。 4.垂直地握住移液器，将按钮按到第一停止点，然后把吸嘴浸入到液面下23mm，再缓慢放松按钮，使之复位，等待12秒后，从液体中取出，并避免碰撞任何物体。 5.将吸液嘴移至加样容器壁上，缓慢地把按钮按到第一停止点，等待12
3、秒，再把按钮全部按下去，排尽液体后，吸液嘴应沿容器壁上滑动取出，再放松按钮，使之复位，即完成。 6.最后，打掉用过的吸液嘴，调回最大量程，仪器放置好保存。,72-1型分光光度计,工作原理,物质对光的吸收具有选择性，不同的物质都有各自的吸收波长。在一定波长下，某物质的溶液对光的吸收强弱（吸光度A）与溶液的浓度C和液层的厚度L的乘积成正比，即遵循朗伯-比尔定律： A=KCL (K为吸收系数，对同一物质来说为一常数),使用方法： 1.检查 ：指针位于“0”。 2.打开电源，打开比色皿暗箱盖，预热20分钟。 3.加样：夹毛面，擦干。 4.放置好比色皿，选择波长、调灵敏度。 5.反复调0、调100至稳定
4、。 6.合盖，读数，记录，取样，清洗，关闭仪器。,1、血清（样本） 2、工作液 3、胆固醇标准液（标本）：5.17 mmol/L,（二）实验试剂,四、实验内容和操作过程,1. 取2支干燥试管，分别标明测定管（T）、标准管（S） 然后按下表加入试剂：,加入物,测定管T 标准管S,血清（ml） 15,标准液（ml） 15,工作液（ml） 1.5 1.5,2、将样品混匀后，置于37水浴箱中水浴 10min。 3、用分光光度计在波长510nm处，以空白管O调零，分别读取两管吸光度值，记录测定管T、标准管S的吸光度值AT、AS 。,计算公式： 胆固醇（mmol/L）= 标准液浓度（5.17 mmol/L）,五、实验结果计算及分析,【结果分析】,经过计算得到的血清中胆固醇浓度为多 少，是否在人体的正常范围内（空腹胆固醇 浓度为3.10mmol/L5.70mmol/L ）。,【参考值】：3.10mmol/L5.70mmol/L,
