胆固醇测定2

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1、实验项目 血清胆固醇的测定-CHO 2学时,血清胆固醇浓度增高见于动脉粥样硬化,肾 病综合症,胆总管阻塞,黏液性水肿和糖尿病。 其他如肥大性骨关节炎、老年性白内障及牛皮 癣等血清胆固醇有增高。 血清胆固醇浓度降低常见于恶性贫血、溶血 性贫血及甲状腺功能亢进时,血清胆固醇降低, 其他如感染和营养不良等情况。,临床意义,【参考值】:3.10mmol/L5.70mmol/L,一、实验目的,掌握:血清胆固醇测定的原理、操作方法和临床意义。,二、实验原理,2、,3、,4.生成的醌类化合物颜色的深浅与胆固醇的含量成正比, 用72-1型分光光度计分别测定标准管和测定管的吸光度值, 计算胆固醇的含量。,1、,

2、三、实验器材与试剂,(1)试管 3支 (2)水浴箱 1台 (3)试管架 1个 (4)洗耳球 1个 (5)微量五档可调移液器 2支 (6)刻度吸量管(5ml) 1支 (7)72-1型分光光度计 1台,(一)实验器材,微量五档可调移液器,使用方法:,1.将吸嘴套在移液器头上轻轻转动,以保证密封。 2.使用前应先将移液器吸液和排液几次,润洗吸嘴和保持 腔内外气压一致。 3.选择量程。 4.垂直地握住移液器,将按钮按到第一停止点,然后把吸嘴浸入到液面下23mm,再缓慢放松按钮,使之复位,等待12秒后,从液体中取出,并避免碰撞任何物体。 5.将吸液嘴移至加样容器壁上,缓慢地把按钮按到第一停止点,等待12

3、秒,再把按钮全部按下去,排尽液体后,吸液嘴应沿容器壁上滑动取出,再放松按钮,使之复位,即完成。 6.最后,打掉用过的吸液嘴,调回最大量程,仪器放置好保存。,72-1型分光光度计,工作原理,物质对光的吸收具有选择性,不同的物质都有各自的吸收波长。在一定波长下,某物质的溶液对光的吸收强弱(吸光度A)与溶液的浓度C和液层的厚度L的乘积成正比,即遵循朗伯-比尔定律: A=KCL (K为吸收系数,对同一物质来说为一常数),使用方法: 1.检查 :指针位于“0”。 2.打开电源,打开比色皿暗箱盖,预热20分钟。 3.加样:夹毛面,擦干。 4.放置好比色皿,选择波长、调灵敏度。 5.反复调0、调100至稳定

4、。 6.合盖,读数,记录,取样,清洗,关闭仪器。,1、血清(样本) 2、工作液 3、胆固醇标准液(标本):5.17 mmol/L,(二)实验试剂,四、实验内容和操作过程,1. 取2支干燥试管,分别标明测定管(T)、标准管(S) 然后按下表加入试剂:,加入物,测定管T 标准管S,血清(ml) 15,标准液(ml) 15,工作液(ml) 1.5 1.5,2、将样品混匀后,置于37水浴箱中水浴 10min。 3、用分光光度计在波长510nm处,以空白管O调零,分别读取两管吸光度值,记录测定管T、标准管S的吸光度值AT、AS 。,计算公式: 胆固醇(mmol/L)= 标准液浓度(5.17 mmol/L),五、实验结果计算及分析,【结果分析】,经过计算得到的血清中胆固醇浓度为多 少,是否在人体的正常范围内(空腹胆固醇 浓度为3.10mmol/L5.70mmol/L )。,【参考值】:3.10mmol/L5.70mmol/L,

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