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1、同济大学医学院 硕士学位论文 线粒体苯二氮卓类受体在防治缺血性房颤中的作用 姓名：江冰 申请学位级别：硕士 专业：心血管内科 指导教师：陈义汉 20090501 摘要 摘要 背景心房颤动( a t r i a lf i b r i l a t i o n ，A F ) ，简称房颤，是临床上最常见的一种心 律失常，其表现为心房快速的无序激动和无效收缩，在心电图上主要表现为正 常P 波消失，代之以频率、振幅、形态均不等的f 波。房颤常见于风心病、冠 心病和高血压病等患者。房颤的发病率随着年龄的增长而急剧升高，一般人群 的发病率为0 4 0 o - 1 ，8 0 岁以上人群的发病率则高达9 ，在中国
2、至少存在8 0 0 万房颤患者。房颤可以引起心力衰竭和中风等严重的并发症，具有极高的致残 率和死亡率，严重危害着人类的健康。目前治疗方法包括药物、射频消融和外 科手术，但是以上方法复发率高，具有很大的局限性。寻找有效的干预方 法已经成为当务之急。 线粒体功能障碍与包括心律失常在内的多种心脏疾病密切相关。线粒体苯 二氮卓类受体( m B z R ) 是一种重要的应激蛋白，缺血时该受体活性显著升高， 且该受体的升高和缺血性心室颤动的发生密切相关，但是该受体是否在缺血性 房颤的发生中起着重要作用尚不得而知。 目的研究线粒体苯二氮卓类受体( m B z R ) 在防治缺血性房颤中的作用。 方法在L a
3、 n g e n d o r f f 灌流的离体兔缺血性房颤模型上，通过药物干预线粒体苯 二氮卓类受体( m B z R ) ，观察激动或抑制该受体对缺血性房颤发生率的影响。 在肿瘤来源的心房系细胞H L 1 上模拟心房缺血，采用F u r a 2A M 及M 9 2 + - F u r a 2 A M 探针法检测缺血及m B z R 激动和抑制情况下的H L 1 细胞内钙离子浓度及 A T P 的变化情况。 结果对照组缺血性房颤的发生率为9 0 ，抑制m B z R 后，房颤发生率降低为 2 8 6 ( P 3 0 例成年健康大白兔，雄性，体重2 0 2 ，5 千克，随机将其分为A 、B 、
4、C 三组，每组分别为1 0 个； H L 1 细胞( 威廉CC l a y c o m b 实验室，路易斯安那州立大学健康科学中心 赠送) 。 2 1 2 主要试剂 戊巴比妥钠( S i g m a ，U S A ) ； N a C I ( 国药) ； K C I ( 国药) ； M g S 0 4 ( 国药) ； M g C l 2 ( 国药) ； C a C l 2 ( 国药) ； K H 2 P 0 4 ( 国药) ； N a H C 0 3 ( 国药) ； G l u c o s e ( 国药) ； F G I N 1 2 7 ( m B z R 激动剂，S i g m a A l d
5、 r i c h ，U S A ) ：使用浓度2 3 州； 4 C I D Z P ( m B z R 抑制剂，S i g m a A l d r i c h ，U S A ) ：使用浓度1 6p M ； 超纯水：M i l l i p o r e p l u s 纯水仪( P a l l ) 制备： 无菌超纯水：M i l l i p o r e p l u s 纯水仪自制，高压灭菌待用； C l a y c o m b 培养基( S i g m a - A l d r i c h ，U S A ) ； 胎牛血清( 删B i o s c i e n c e s ) ； 青霉素( L i f
6、eT e c h n o l o g i e s ，R o c k v i l l e ，M D ) ； 6 第2 章材料和方法 链霉素( L i f eT e c h n o l o g i e s ，R o c k v i l l e ，M D ) ： 去甲肾上腺素( S i g m a ，10 u Ms t o c k , S t L o u i s ，M O ) ； 左旋谷酰胺( 2 0 0 m Ms t o c k ) ； 胰蛋白酶( S i g m a ，U S A ) “ 分装配制； 胶原蛋白酶( s i g m a ，U S A ) - 分装配制； 明胶( D i f c o
7、，S p a r k s ，M D ) ； 纤维粘连蛋白( S i g m a ) ； F u r a - 2A M ，l u MF l u k a ，U S A ； M 9 2 + - F u r a 2A M ，l u MF l u k a ，U S A 2 1 3 主要液体配方 K H 液( 成分：N a C l1 18 m m o l L ，K C I4 7m m o l L ，M g S 0 41 2m m o l L ，C a C l 2 1 2 5m m o l L ，K H 2 P 0 41 2m m o l L ，N a H C 0 32 5m m o l L ，G l u
8、c o s e10 m m o l L ) ： 台氏液( 成分：N a C I13 0 m m o l L ，K C I5 6 m m o l L ，M g C i 20 6m m o l L ，C a C l 2 2 2m m o l L ，N a H 2 P 0 41 2m m o l L ，N a H C 0 32 4 2m m o l L ，G l u c o s e 1 2 m m o l L ，用1 MN a O H 调节p H7 3 5 “ - 7 4 5 ) ； 无糖台式液( 成分：N a C I1 3 0 m m o l L ，K C l5 6 m m o l L ，M g
9、C l 20 6m m o l L ， C a C l 22 2m m o l L ，N a i l 2 P 0 41 2m m o l L ，N a H C 0 32 4 2m m o l L ，用 1 MN a O H 调节p H7 3 5 7 4 5 ) ； 缺血液( 成分：N a C l118 m m o l L ，K C I4 7m m o l L ，M g S 0 41 2m m o l L ，C a C l 2 加药 加药 1 2 5m m o l L ，K H 2 P 0 41 2m m o I L ，N a H C 0 32 5m m o l L ，G l u c o s e
10、10 m m o I L ，N a 2 5 2 0 4l0 m M ) ； K H 液( 成分：N a C I118 m m o l L ，K C I4 7m m o l L ，M g S 0 41 2m m o l L ， C a C l 21 2 5m m o l L ，K H 2 P 0 41 2m m o l L ，N a H C 0 32 5m m o l L ， G l u c o s e1 0m m o l L F G I N - l - 2 72 3 1 a M ) ； K H 液( 成分：N a C Il18 m m o l L ，K C I4 7m m o l L ，M g
11、 S 0 41 2m m o l L ， C a C l 21 2 5m m o 儿，K H 2 P 0 41 2m m o l L ，N a H C O s2 5m m o l L ， G l u c o s e10m m o l L 。4 C I D Z P16 v t M ) ； 加药缺血液( 成分：N a C I118 m m o l L ，K C I4 7m m o l L ，M g S 0 41 2m m o l L ， 7 第2 章材料和方法 C a C l 21 2 5m m o l L ，K H 2 P 0 41 2m m o l L ，N a H C O s2 5m m o
12、 I L ， G l u c o s e10m m o I L ，N a 2 S 2 0 410 m M ，F G I N l - 2 72 3 9 M ) ： 加药缺血液( 成分：N a C ll18 m m o l L ，K C I4 7m m o L ，M g S 0 41 2m m o l L ， C a C l 21 2 5m m o l L ，K H 2 P 0 41 2m m o l L ，N a i l C O s2 5m m o l L ， G l u c o s e10m m o l L ，N a 2 S 2 0 410 m M ，4 一C I - D Z Pl6 9 M
13、) ： P B S ( F a r c o ) ( 成分：N a C I1 3 7 m m o l L ，K C l2 m m o l L 、N a 2 H P 0 44m m o L L ， K H 2 P 0 41 7 6m m o l L ) 2 1 4 主要仪器 P o w e r L a b 图表记录仪( A D I N S T R U M E N T S ) ； 程控刺激器( Y C 2 型，成都仪器厂) ： 小型恒温器( W C 0 9 0 5 ，广州艾克明仪器有限公司) ； L a n g e n d o r f f 灌流系统( 恒温恒压) ：包括冷凝管、三通管、蠕动泵、水浴箱
14、； 实验用电极( 南京大中电极有限公司) ； 实验用氧气瓶( 上海浦江特种气体有限公司) ； 手术刀( 上海手术器械厂) ； 手术剪( 上海手术器械厂) ； 持针器( 上海手术器械厂) ； 血管钳( 上海手术器械厂) ； 塑料针筒( 上海手术器械厂) ； 输液器( 上海手术器械厂) ； 医用超净工作台( 苏州净化设备厂) ； 玻璃烧杯； 玻璃培养皿； M i l l i p o r e - p l u s 纯水器( M i l l i p o r e ) ； 分析天平( M e t t l e rT o l e d o ) ： 电热恒温培养箱( F u m a ) ； 电热恒温鼓风干燥箱( 上
15、海精宏实验设备有限公司) ； 制冰机( G r a n t ) ； 可调微量移液器：( E p p e n d o r f , N i c h i p e t ) ： 8 第2 章材料和方法 漩涡振动器( G e n e ) 电热恒温水浴箱( 上海精宏实验设备有限公司) ； 高压灭菌锅( S a n y o ) ： T 2 5 细胞培养瓶； 台式冷冻高速离心机( E p p e n d o r f ) ； 台式低温离心机( E p p e n d o r f ) ； 台式小型离心机( E p p e n d o r f ) ； P H S 2 5 型酸度计( 上海雷磁仪器厂) ； C 0 2
16、培养箱：( F o r m a ) ； 荧光倒置显微镜( L e i k a ) ； T i l l V i s i o n 钙成像系统( T I L L P h o t o n i c sG m b H G e r m a n y ) 2 2 方法 2 2 1实验分组 如图2 1 所示，随机将实验白兔分成三组：( 1 ) 缺血组；( 2 ) 缺血+ F G I N 1 2 7 处理组；( 3 ) 缺f f 口1 + 4 - C l - D Z P 处理组。 兰竺竺i 竺i 竺! 竺! 竺i ! ( 1 ) l 王箜 一 I 苎垒1 型鍪l 1 0m i a ( 2 ) l 兰童l 三鱼! 兰：! = 兰：l 竺垒兰呈! 兰! 兰：l
