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1、H y d r o c a r b o n s P r o c e e d i n g so ft h eI n t e r n a t i o n a lO z o n eA s s o c i a t i o nP a nA m e r i c a nG r o u pC o n f e r e n c e ，O t t a w a ，C a n a d a ， 19 9 6 ，2 4 3 - 2 5 8 。 【2 5 O h l e n b u c hG ，H e s s eS ，F r i m m e lFH E f f e c t so fO z o n eT r e a t m e
2、 n to nt h eS o i lO r g a n i cM a t t e ro nC o n t a m i n a t e dS i t e s C h e m o s p h e r e ，1 9 9 8 ，3 7 ( 8 ) ，1 5 5 7 - 1 5 6 9 f 2 6 】J u n gH ，C h o iH ，K i mJ ，S c h w a r t zFW L a b o r a t o r y S c a l eA p p l i c a t i o no fF i b e rO p t i cT r a n s f l e c t i o nD i pP r o
3、b e ( F O T D P ) f o ri nS i t uM o n i t o r i n go fG a sP h a s eO z o n ei nU n s a t u r a t e dP o r o u sM e d i a J o u r n a lo fC o n t a m i n a n t H y d r o l o g y ，2 0 0 6 ，8 2 ，1 3 3 一1 4 4 【2 7 】K u l i k aN ，G o i aA ，T r a p i d o aM ，T u h k a n e nT D e g r a d a t i o no fP o
4、l y c y c l i cA r o m a t i cH y d r o c a r b o n sb yC o m b i n e d C h e m i c a lP r e - O x i d a t i o na n dB i o r e m e d i a t i o ni nC r e o s o t eC o n t a m i n a t e dS o i l 。J o u r n a lo fE n v i r o n m e n t a lM a n a g e m e n t ， 2 0 0 6 ，7 8 ，3 8 2 - 3 9 1 f 2 8 】O M a h
5、o n yMM ，D o b s o nA DW ，B a r n e sJD ，S i n g l e t o nI T h eU s eo fO z o n ei nt h eR e m e d i a t i o no fP o l y c y c l i c A r o m a t i cH 硼r o c a r b o nC o n t a m i n a t e dS o i l ，C h e m o s p h e r e ，2 0 0 6 ，6 3 ，3 0 0 01 4 。 【2 9 】S t e h r ，J ，M a i l e rT ，S v e n s s o nK
6、，K a m n e r d p e t c hC ，S c h e p e rT B a s i cE x a m i n a t i o n so nC h e m i c a lP r e O x i d a t i o nb y O z o n ef o rE n h a n c i n gB i o r e m e d i a t i o no fP h e n a n t h r e n eC o n t a m i n a t e dS o i l s ，A p p lM i c r o b i o lB i o t e c h n o l ，2 0 0 1 ，5 7 ， 8 0
7、 3 氆 粗酶液降解体系中芘萃取过程的破乳研究 聂麦茜蔓蕾王晓昌王志盈吴蔓莉王蕊 ( 谣安建筑科技大学，环境与市政工稳学院，7 1 0 0 5 5 ) 撼要：利用试凑法对跌C B 9 8 蘸体粗酶液降勰体系中萃取拢的防乳化及破季L 过程进行了定性研究，根据灾验现象确 定了破乳蓊晶的投加顺序，初步筛选出了具有磺显破乳或防乳纯作用的离子：H 9 2 + 、B a 2 + 和A 1 3 。在此麓硇上进幸亍 定量破乳的脱水实验，结果表明，加入H 9 2 + 破乳效果最好，其浓度在3 0 0 3 5 0 m g L 范围内，翠取时几乎不出现乳化 层；B a 2 + 效果不明显，倪其浓度为1 0 0 0
8、m g L 时，静置后期，脱水速度加快，乳化层逐渐消失；加入A P + 钉比较好的 脱承效采，髓微小稳乳滚在分滚滚斗内挂壁严燕，会导致被萃取秘震瓣损失。获酶促降解体系孛萃取圈收芘鳇回收 率：H 9 2 + 能够获得9 3 0 4 ，B a 2 + 能获得9 1 0 2 ，空白对照仅为8 4 8 5 。在无机离子存在下翠取获得的芘有机溶液 中，芘的吸收峰无变化，外加离子对物质芘的紫外光谱无影响。 关键词：酶健降祭髂系；芘；萃淑：酸毳 1 引言 多环芳烃( P A H s ) 及其它烃类化合物是广泛存在于环境中的难降解有机污染物，其中多环芳烃能 够致癌、致畸、致突变，它们在环境中的大量存在和不断积
9、累，对包括人类在内的动物界盼健康己 造成了威胁。自然环境中多环芳烃降解转化的速度非常缓慢，从而造成其在环境中的大量积累【2 J 。 零| 焉微生物法净化这类物质，被认为是豳黄最安全经济的途径【l 】。隧黄对烃类污染物生物降鳃研究 的不断深入，在其酶促降解反应中主要使用粗酶液，然而，在对不同时刻粗酶降解体系中剩余烃类 的萃取和浓度分析测试时，毫无例外会遇到严重的乳化问题，不但使得萃取达到平衡的时间延长， 焉且造成有机溶裁在乳诧层中的夹带【3 】及待萃取物在季L 化层中的残留损失，最终造成萃取效率及实 验数据可信度降低。所以破坏萃取过程中的乳化朦或消除乳化现象是一个值得研究的问题。实际使 用的破乳
10、方法很多，如加入破乳剂或电解质的化学破乳法【3 “】及其它一些物理法，如超声波、超滤法 等。旦翦，国内外有关破乳麴研究报道中多限于些大型波困、冶金、制药等企业的实鼯生产和研 究中乳状液破乳研究f 5 1 ，文献【7 】中曾报道，利用超滤法解决发酵液中蛋白质产生的乳化现象给萃取 过程造成困难，但有关存在微生物及其酶的体系中萃取过程产生的乳化层的破乳未见报道。论文作 者在研究多环芳烃酶健降解反应时，发现萃取分离酶促降鼹体系中未降解的多坯芳烃是一个非常费 时、且重现性差、萃取效率低的过程。目前没有可直接借蘸的资料，为此，我们根据实验中出现的 实际问题进行了本论文的研究，结果发现在萃取过程中定擞地投加
11、一些特殊金属阳离子对破乳、消 8 3 乳是一行之有效的方法。 2 材料和方法 2 1 主要材料 磷酸盐缓冲液：K 2 H P 0 4 。H 2 02 1 7 5 9 ，N a z H P 0 41 2 H 2 03 3 4 9 ，K H 2 P 0 48 7 9 ，N H 4 C 15 哩，蒸馏水 1 0 0 0 m L ，p H = 7 0 用H g ( N 0 3 ) 2 | 2 H 2 0 配置的汞水溶液( 以H 9 2 + 计) ：1 哩L ，p H = 2 0 1 用B a ( N 0 3 ) 2 配置的钡溶液( 以B a 2 + 计) ：1 0 9 。L 。p H = 4 7 8
12、用A 1 C 1 3 配置的铝溶液( 以A 1 3 + 计) ：l m o l 。L ，p H = 2 4 2 5 0 9 L ”1 芘丙酮标准溶液：准确称取芘1 2 5 m g ，用丙酮溶解，并定容到2 5 m l ，摇匀备用环己烷： ( 西安化学试剂厂) 做萃取剂。 2 2 粗酶液的制备方法 从驯化保存斜面培养基上挑取一环C B 9 祥菌，在无菌操作条件下，接入牛肉膏蛋白胨液体培养基 中，在3 0 ，1 5 0 r m i n l 恒温振荡器上好氧培养4 8 h ，室温下 6 0 0 0 r p m ，离心3 0 r a i n 收获菌体，用磷酸盐缓冲溶液洗涤并离心分离菌体三次，再用该缓冲
13、液将 菌体制备成较浓的菌悬液；用J Y 8 8 - I I 型超声波细胞粉碎机，间歇破碎菌悬液中菌体( 以防温度过 高) ，累计3 0 m i n ，粉碎功率为4 5 0 w ，然后1 0 0 0 0 r p m ，离心2 0 r a i n ，取上清液为胞内粗酶，测得p H = 7 ， O D = O 1 0 2 ( L = 5 8 0 n m ) ，收集于I O O m L 比色管4 冰箱保存备用。 2 3 模拟体系萃取过程描述及水回收率测定方法 模拟降解体系萃取时脱水实验研究方法采用刻度试管法【8 】。具体为：准确量取一定量蒸馏水到 1 2 5 m L 梨型分液漏斗，加入1 0 m L
14、粗酶液，轻轻摇匀，分别准确加入一定量H g “、B a 2 + 或A 1 3 + 溶液， 轻轻摇匀，水相总体积为1 0 0 m L ，加入环己烷4 0 m L ，立即盖好分液漏斗。以8 0 l O O r p m 振荡l m i n ( 分4 次进行，间歇放气) ，静置。开始计时，从第0 m i n 到第2 m i n 时，放出此期间析出的水相于 1 0 0 m l 量筒中，记录脱出水的体积，将5 m i n 析出的水合并到上述量筒中，记录水的体积，依次将 l O m i n 、1 5 m i n 、2 0 m i n 、2 5 m i n 的析出水按同样的方法收集合并，并记录有关现象。根据上
15、述记录的 不同时刻的水层体积。 计算水回收率：( 三次平行实验结果平均值) 水回收率= 礞笔豸器l 。 2 4 实际芘酶促降解体系描述及芘萃取得率的测定方法 实际芘降解萃取描述：取3 个反应瓶做平行样，记为H g 、H g 、H g ：在各瓶中准确加入 一定量蒸馏水，加入芘标准溶液一定量的5 9 L ，放入3 0 ，1 5 0 r p m 恒温水浴摇床振摇3 0 r a i n ( 使丙 酮尽快挥发) ，3 0 m i n 后取下反应瓶将水样倒入1 2 5 m L 梨形分液漏斗，加入1 0 m L 粗酶液，轻轻摇 匀，分别加入一定量H 9 2 + 一溶液，使水相总体积为1 0 O m L 。轻
16、轻摇匀，立l i p D i ：l 入环己烷萃取，以 8 0 l O O r p m 振荡1 m i n ( 分4 次进行，间歇放气) ，静置1 5 m i n ，反复萃取3 次，萃取液合并入1 0 m L 比色管，定容，摇匀。 芘萃取回收率的测定方法：以环己烷为参比，在2 4 2 n m 处测定吸光度，计算芘的浓度。芘的原 浓度为未加到水样中直接取芘丙酮标准溶液用环己烷稀释后的测定值。芘萃取得率： 芘回收率= 呈餮篆纂嬲x 1 0 0 2 5 方法可行性验证 物质芘的最大吸收峰为2 4 2 n m ，在外加离子破乳后，用紫外分光光度计测量芘的吸收曲线，观 察吸收峰有无变化，以此证明外加离子破乳是否影响芘的测定。 3 结果与讨论 3 1 试凑法实验结果 3 1 1 实验研究基本思路 考萃取酶促降解体系中的多环芳烃时，能够产生严重乳化现象的主要是因蛋白质物质存在引起 8 4 的，且蛋白质及其产生的微小乳滴主要带负电的。本实验
