粗叶悬钩子抗肝损伤类活性成分对CCI4损伤大鼠肝细胞的影响(1)

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1、学位论文原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下进行的研 究工作及所取得的研究成果。据我所知,除文中特别加以标注和致谢的地 方外,论文中不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也 不包含为获得福建中医学院或其他教育机构的学位或证书而使用过的材 料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标 明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名:垫掬旅 签字日期:2 0 口矽年f 月f 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解福建中医学院有关保留和使用学位论文的规 定,即:研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权

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3、0 分扩年,月夕咱 目录 英文缩略词表1 中文摘要2 英文摘要4 前言6f j i 】声”“”“”“”一“”“”一”一6 实验部分 第一部分:粗叶悬钩子抗肝损伤有效部位的筛选 1 材料1 0 2 方法1 l 3 结果1 2 4 讨论1 5 5 小结1 6 第二部分:粗叶悬钩子抗肝损伤有效成分的分离与鉴定 1 材料1 7 2 方法1 8 3 结果2 l 第三部分:粗叶悬购子抗肝损伤有效成分对C C l 。损伤大鼠肝细胞的影响 l 材料:2 3 2 方法2 4 3 结果2 9 4 讨论3 4 小结 3 8 文献综述5 7 作者简历6 2 善 一 姗 考 谢 录 参 致 附 一 0 蓐 ,k 英文缩

4、略词表 a l a n i n ea m i n o t r a n s f e r a s e A P O a p o p t o s i s A S T a s p a r t a t ea m i n o t r a n s f e r a s e C C l 。c a r b o nt e t r a c h l o r i d e Q I c - N aC a r b o x y m e t h y lC e ll u l o s e D E P C d i e t h y p y r o c a r b o n a t e d i m e t h y l s u l f o x i

5、 d e 丙氨酸转氨酶 凋亡 天冬氨酸转氨酶 四氯化碳 羧甲基纤维素钠 焦碳酸二乙酯 二甲基亚砜 e t h y l e n e d i a m i n o t e t r a a c e t i ca c i d 乙二胺四乙酸 n 珞 f e t a lb o v i n es e r u m F C Mf l o wc y t o m e t e r m R N A m e s s a g e rP b A M 1 广r m e t h y lt h i a z o l y lt e t r a z o li u m N O n i t r o g e nm o n o x i d u m

6、 O D O p t i c a ld e n s i t y P B S p h o s p h a t eb u f f e rs o l u t i o n 胎牛血清 流式细胞仪 信使R N A 四甲基偶氮唑蓝 一氧化氮 吸光度 磷酸盐缓冲液 P C N A p r 0 1 i f e r a t i n g c e l ln u c l e a ra n t i g e n 增殖细胞核抗原 P I P r o l i f e r a t i o ni n d e x P I p r o p i d i u mi o d i d e R T P C Rr e v e r s et r a

7、 n s c r i p t i o n p o l y m e r a s ec h a i n S o D s u p e r o x i d ed i s m u t a s e T L C t h i n 。l a y e rc h r o m a t o g r a p h y 增殖指数 碘化丙啶 一一 和 粗叶悬钩子抗肝损伤类活性成分对C C I 。损伤大鼠肝细胞的影响 研究生:赵锦燕 中文摘要 目的:通过药效学实验跟踪有效成分,筛选粗叶悬钩子抗肝损伤类的活性成分, 对有效成分进行初步鉴定,并对有效成分作用机制作初步的探讨。 方法:( 1 ) 中药常规提取方法制备粗叶悬钩子分类提取

8、物总生物碱,并进行检测。 ( 2 ) 根据总生物碱内成分极性的不同,分别用乙酸乙酯、正丁醇、氯仿等溶剂 萃取其不同极性部位。( 3 ) 制备小鼠急性肝损伤模型,并用不同极性部位进行干 预,观察效果,选取有效极性部位。( 4 ) 通过传统柱层析的方法,进一步分离有 效极性部位,并合并极性相同或相近的馏分。( 5 ) 通过制备色谱法和高效液相色 谱法,进一步分离成分。( 6 ) 培养大鼠肝细胞,并制备肝细胞损伤模型,通过药 物干预模型,观察相关指标的变化,最终选取粗叶悬钩子抗肝损伤的有效成分。 结果:( 1 ) 粗叶悬钩子抗肝损伤有效成分- 1 2 9 的不同药物浓度均可不同程度地 降低肝细胞培养

9、上清液中A L T 、A S T 的含量;( 2 ) 1 2 9 的不同药物浓度能不同程 度地升高肝细胞培养上清液中S O D 的活性,同时降低M D A 的含量:( 3 ) 1 2 9 的 不同药物浓度能不同程度地促进肝细胞的增殖;( 4 ) 1 2 9 能不同程度地调节细 胞生长周期,促使细胞向S 期转化;( 5 ) 1 2 9 能显著下调C C l 。损伤的大鼠肝细 胞中C a s p a s e - 3 m R N A 的表达,并且上调P C N A m R N A 的表达。 结论:( 1 ) 1 2 9 是粗叶悬钩子中抗肝损伤的有效活性成分:( 2 ) 1 2 9 能保护肝 细胞膜,

10、减轻肝细胞受损的程度:( 3 ) 1 2 9 能抑制自由基的生成和脂质过氧化 2 ? 一 , : , - 产物的生成,提高肝细胞的抗氧化能力;( 4 胞凋亡;( 5 ) 1 2 9 能够调节细胞生长周期。 主题词:肝炎,中毒性中医药疗法; 药理学;中药化学成分药理学;肝细 作用;细胞增殖药物作用;脂质过氧 E f f e c to fa c t i v ec o m p o n e n to fR u b u sa l c e a e f o l i u sP o i ra g a i n s t H e p a t i ci n j u r yo nr a th e p a t i cc e

11、 l li n j u r e db yC C l 4 P o s t g r a d u a t e :Z h a oJ i n y a n A b s t r a c t J 、 U b je c t i v e :T oS c r e e nf o ra c t i v ei n g r e d i e n ta g a i n s th e p a t i ce e l l i n j u r e db yC C hi n R u b u sa l c e a f o l i u sP o i rt h r o u g ha c t i v i t y - g u i d e dt r

12、 i n gm e t h o & T 0s e tu pp r e l i m i n a r y i d e n t i f i c a t i o no fa c t i v ei n g r e d i e n ta n ds t u d yt h ep o s s i b l em e c h a n i s mo ft h ea c t i o n M e t h o d s :( 1 ) T h eg e n e r a la l k a l o i do fR u b u sa l c e a e f o l i u sP 0 i r w e r ee x t r a c t

13、e db y t r a d i t i o n a lC h i n e s em e d i c i n er o u t i n ea n dd e t e c t e d ( 2 ) A c c o r d i n gt od i f f e r e n c e so f p o l a r i t y i n g e n e r a la l k a l o i d ,m e n s t r u u m s u c ha s r e s p e c t i v e l y , u s i n ge t h y l a c e t a t e , n - b u t a n o l ,t h ec h l o r o f o r mr i g h te x t r a c tw h o s ed i f f e r e n to r g a n i cs o l v e n t s f r a c t i o n s ( 3 ) E s t a b l i s h i n gah e p a

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