《粒细胞集落刺激因子对大鼠脑出血模型的保护作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《粒细胞集落刺激因子对大鼠脑出血模型的保护作用（68页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、华中科技大学 博士学位论文 粒细胞集落刺激因子对大鼠脑出血模型的保护作用 姓名：张磊 申请学位级别：博士 专业：病理学与病理生理学 指导教师：王建枝 20090501 华中科技大学同济医学院 2009 届博士学位论文 摘摘 要要 中风是全球成年人致死性疾病的第三位， 并长期位于成年人致残性疾病的首 位。脑出血（ICH）约占西方人群中所有中风性疾病的 1015%，在亚洲人群中 比例更高，至少达到 30%。生长因子是一类参与调节神经细胞生存、增殖、分化 发育的多肽。 很多生长因子在脑创伤或中风后给药都显示出神经保护和神经营养 作用。 粒细胞集落刺激因子 （G-CSF） 是生长因子类细胞因子的一员，
2、 分子量约20KD。 粒细胞集落刺激因子现已广泛的应用于临床，包括肿瘤化疗所致的白细胞减少 症、骨髓的重构、造血干细胞的募集等。近年来研究发现，一些中风模型的造模 小鼠给予粒细胞集落刺激因子后可诱导受损脑组织周围的神经发生， 最终促进小 鼠神经功能的恢复。 但粒细胞集落刺激因子在脑出血过程中是否扮演相同角色尚 未见报道。 本研究试图探讨粒细胞集落刺激因子在脑出血中是否具有神经保护作用。 我 们选择健康 wistar 雄性大鼠 40 只， 分为阴性对照组 （20 只） 和 G-CSF 治疗组 （20 只） ，全部进行脑出血模型造模。我们采用胶原酶定位注射大鼠尾壳核诱导大 鼠脑出血的方法复制脑出血
3、模型。造模 24 小时后 G-CSF 治疗组进行腹腔注射 G-CSF（15 g/kg） ，连续治疗 5 天，对照组给予生理盐水。我们每周通过肢体放 置实验检测大鼠神经功能恢复情况，连续观察 4 周后发现，给药组可以明显促进 脑出血大鼠神经功能的恢复。 为了探讨 G-CSF 促进脑出血大鼠神经功能恢复的机制， 我们用免疫组化的方 法检测了脑片的三个指标， 分别为神经干细胞标志 nestin,造血干细胞标志 CD34 和星形胶质细胞标志 GFAP， 还通过 Hoechest33258 荧光显色的方法检测了脑出血 大脑半球的细胞凋亡情况。最后，我们测量了出血坏死区病灶的面积。 实验结果显示： 1.
4、G-CSF可促进出血灶周边组织神经干细胞的表达。 2. G-CSF可动员骨髓造血干细胞入脑参与神经修复。. 3. G-CSF可增强脑出血后星形胶质细胞的增殖。 1 华中科技大学同济医学院 2009 届博士学位论文 4. G-CSF有抗凋亡的作用。 5. 两组大鼠的病灶面积未见明显差异。 综上所述， 我们的研究证实粒细胞集落刺激因子可促进脑出血大鼠神经功能 的恢复，其机制可能与粒细胞集落刺激因子促进神经干细胞表达、动员造血干细 胞入脑、刺激星形胶质细胞增殖以及其抗凋亡作用均有关系，但其具体机制仍需 进一步深入研究揭示。 关键词：脑出血，粒细胞集落刺激因子 2 华中科技大学同济医学院 2009 届
5、博士学位论文 Abstract Stroke is the third leading cause of death and a leading cause of long-term disability in adults worldwide. Intracerebral hemorrhage (ICH) represents 1015% of all strokes in the Western population and at least 30% in Asian countries. Growth factors are polypeptides which regulate sur
6、vival, proliferation, maturation of developing neuronal cells. Many factors display endogenous neuroprotective and neurotrophic effects when they are exogenously administrated after brain trauma or stroke. Granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF), is a member of the cytokine family of growth fa
7、ctors. G-CSF has been used extensively in the treatment of chemotherapy-induced neutropenia, as well as for bone marrow reconstitution and stem cell mobilization. More recently, it has been shown that administration of G-CSF in stroke mouse models could induce neurogenesis near the damaged area of t
8、hese mice, leading to neurological and functional recovery. Until now, the role of G-CSF on ICH is not fully understood. In the present study, we studied the potential neuroprotective effect of G-CSF in a rat model of ICH. For the induction of intracerebral hemorrhage and G-CSF treatment, male Wista
9、r rats were grouped as ICH-only control group (n = 20) and G-CSF-treated ICH group (n = 20). Experimental ICH was induced by the stereotaxic administration of collagenase type into caudate nucleus. The recombinant human G-CSF (15 g/kg), dissolved in normal saline, was administered through intraperit
10、oneal，at 24 h after the ICH induction and daily afterwards for 5 days. The same volume of normal saline was adminstrated to the ICH-only control group. The limb placement tests were examined weekly for 4 weeks after intracerebral hemorrhage was induced. We found that intraperitoneal injection of G-C
11、SF for 5 days could efficiently attenuate the ICH-induced neuronal behavioral impairment. To study the possible mechanisms underlying the behavioral improvement by G-CSF, we measured the expression of nestin, CD34 and GFAP by immunohistochemistry. We also observed apoptosis by the immunofluorescence
12、 3 华中科技大学同济医学院 2009 届博士学位论文 staining of Hoechst33258 and measured the sizes of necrosis area. The results are shown as follows: 1. G-CSF may stimulate the expression of neural stem cells in the peri-necrosis area of the hemorrhagic hemisphere in the rats. 2. G-CSF may stimulate HSCs to migrate into
13、the brain regions through blood circulation after ICH induction. 3. G-CSF can promote proliferation of astrocytes. 4. G-CSF has anti-apoptotic effect after ICH. 5. No differences were found in the sizes of necrosis area between G-CSF-treated group and control. In summary, we have found in the presen
14、t study that administration of G-CSF can improve the ICH-induced neurobehavioral impairments in rats. The mechanism may involve proliferation of neural stem cells; the mobilization of HSCs to damaged areas of the brain; the increased astrocytes; and the anti-apoptotic effect of G-CSF. Key words: gra
15、nulocyte colonystimulating factor, intracerebral hemorrhage 4 独创性声明 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师的指导下进行的研究工作及取 得的研究成果。据我所知，除文中已标明引用的内容外，本论文不包含任何其他 人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体， 均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 日期：2009 年 5 月 20 日 学位论文版权使用授权书 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有
16、 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和 借阅。 本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密，在_年解密后适用本授权数。 本论文属于 不保密。 （请在以上方框内打“” ） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期：2009 年 5 月 20 日 日期：2009 年 5 月 20 日 华中科技大学同济医学院 2009 届博士学位论文 前前 言言 脑出血（intracerebral hemorrhage, ICH）是指原发性非外伤性脑实质内出血， 也称自发性脑出血、出血性脑卒中，占急性脑血管病的20%30%。其临床表现 为：患者一般无前驱症状，少数可有头晕、头痛及肢体无力等。发病后症状在数 分钟至数小时达到高峰。血压常明显升
