《类风湿性关节炎瓜氨酸化自身免疫抗原筛选及表达特异下调蛋白的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《类风湿性关节炎瓜氨酸化自身免疫抗原筛选及表达特异下调蛋白的研究（58页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 T h e S c r e e n i n g o fC i t r u l l i n a t e d A u t o a n t i g e n e sa n d R e s e a r c ho f L o w - - e x p r e s s e d P r o t e i ni nR h e u m a t o i d A r t h r i t i s B y W a n gY u e j i a n U n d e rt h eS u p e r v i s i o no f P r o f C h a n g X i a o t i a n AT h e s i sS u
2、b m i t t e dt ot h eU n i v e r s i t yo fJ i n a n I nP a r t i a lF u l f i l l m e n to ft h eR e q u i r e m e n t s F o rt h eM a s t e r D e g r e e o fM e d i c i n e U n i v e r s i t yo f J i n a n J i n a n ，S h a n d o n g ，P R C h i n a M a y ，2 0 1 2 导师介绍 常晓天，男，1 9 6 4 年6 月出生，吉林省吉林市人，博
3、士，研究员，硕士生导师。 1 9 9 6 年3 月于日本国立基础生物学研究所获博士学位，毕业后在美国德州理工 大学生物学系从事博士后研究，回国前曾任日本国立基础生物学研究所特别研究 员和日本理化学研究所遗传多态性【S N P 】研究中心研究员。共发表S C I 论文 3 3 篇，其中第一作者通讯作者2 3 篇；获发明专利5 项( 其中国际l 项) 。山东 省泰山学者特聘专家、山东省医疗卫生系统学科带头人；9 7 3 项目课题组长类 风湿性关节炎易感基因及早期诊断靶标研究，项目编号2 0 1 0 C B 5 2 9 1 0 5 ，为首 承担国家自然基金面上项目3 项对类风湿关节炎关联基因P A
4、D l 4 病理途径的 系统性研究，项目编号3 0 9 7 2 7 2 0 ：从类风湿性关节炎滑膜中分离一种新型角质 蛋白及功能研究，项目编号3 0 6 7 1 9 4 9 ；P A D l 4 肿瘤遗传易感性和表达调控机制 研究，项目编号8 1 1 7 1 9 9 0 9 ，为首承担省科技攻关和自然基金6 项。现研究方 向：1 风湿病关联基因分离及致病机制；2 癌变分子生物学机制；3 类风湿性关 节炎蛋白质组学研究。 课题组成员 韩金祥，男，研究员，主要从事蛋白质学的研究。 潘继红，女，副研究员，主要从事生物芯片及药物基因组学的研究。 赵燕，女，助理研究员，主要从事类风湿性关节炎相关致病基因
5、病历机制的研究。 王林，男，实习研究员，主要从事P A D l 4 基因与肿瘤病变关系的研究。 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进 行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作 出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意 识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：至旦终 日 期：御二户 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解济南大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借鉴；本人授权
6、济南大学可以将学位论文的全部或部分内 容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保 存论文和汇编本学位论文。 。 口公开口保密(年，解密后应遵守此规定) 论文作者签名：至1 3 垒导师签名： 济南大学硕士学位论文 目录 摘要I l l 英文缩略词表一X 第一章类风湿性关节炎患者中瓜氨酸化自身免疫抗原的筛选1 前言1月U 舌1 1 1 材料5 1 1 1 样品5 1 1 2 试剂6 1 1 3 仪器6 1 2 方法7 1 2 1 免疫组织化学7 1 2 2 蛋白收集及定量9 1 2 3 免疫印迹法1 0 1 2 4 酶联接免疫吸附剂法1 1 1 2 5 结果分析1 2 1 3 结
7、果1 2 1 3 1 免疫组织化学结果1 2 1 3 2 免疫印迹分析结果1 4 1 3 3 酶联接免疫吸附结果1 6 1 4 讨论1 7 第二章维生素D 结合蛋白在类风湿关节炎滑膜中表达下调1 8 前言1 8 日U 吾l 石 2 1 材料1 9 2 1 1 样品1 9 2 1 2 试剂1 9 2 1 3 仪器2 0 2 2 方法2 0 2 2 12 - D 凝胶电泳2 0 T 类风湿性关节炎瓜氨酸化自身免疫抗原筛选及表达特异下调蛋白的研究 2 2 2 免疫印迹法：2 1 2 2 3T a g S N P s 基因分型2 1 2 3 结果2 2 2 3 1V D B P 在滑膜组织中的表达2
8、2 2 3 2T a g - S N P s 基因分型2 4 2 4 讨论2 6 参考文献2 9 文献综述3 4 综述3 4 已发表论文4 3 济南大学坝士学位论文 类风湿性关节炎瓜氨酸化自身免疫抗原筛选及表达特异下调蛋 白的研究 专业：微生物与生化药学 研究生：王月俭 导师：常晓天 摘要 类风湿性关节炎患者中瓜氨酸化自身免疫抗原的筛选 背景：类风湿关节炎( r h e u m a t o i da r t h r i t i s ，R A ) 是一种慢性系统性自身免疫疾病，其 基本病理特征表现为滑膜炎、关节滑膜炎症细胞浸润、滑膜细胞异常增殖、血管翳 形成以及关节软骨和骨损伤。有多种自身免疫抗
9、体检测常用于R A 的诊断，如类风 湿因子( r h e u m a t o i df a c t o r ，R F ) 、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体( a n t if i l a g g r i n a u t o a n t i b o d y ，A F A ) 、抗角蛋白抗体( a n t ik e r a t i na n t i b o d y ，A K A ) 、抗细胞核周围因 子( a n t ip e r i n u c l e a rf a c t o r ，A P F ) 、抗波型蛋白( a n t iv i m e n t i na u t o a n t i b o d
10、y ) 抗体和 抗环状瓜氨酸肽抗体( a n t ic y c l i cc i t r u l l i n a t e dp e p t i d ea n t i b o d y ，A C C P ) 。大多数R A 自身免疫抗体B 细胞决定簇都含有由精氨酸残基催化而成的瓜氨酸残基。虽然像聚 丝蛋白、纤维蛋白和波型蛋白等瓜氨酸蛋白已经被证实参与了R A 的自身免疫反应 机制，但是，到目前为止，作为自身免疫抗原的瓜氨酸化蛋白还没有被系统性研究， 可能还有其他的瓜氨酸化自身免疫抗原的存在。对此，本课题组前期研究通过二维免 疫印迹方法( 2 Dw e s t e r nb l o t t i n
11、g ) 对R A 滑膜组织中的瓜氨酸化自身抗原进行了系 统的筛选。结果发现，0 【1 抗胰蛋白酶( A l p h a 1 - a n t i t r y p s i n ，A 1 A T ) 、动力蛋白重链 3 ( d y n e i nh e a v y c h a i n3 ，D Y H 3 ) 、纤维蛋白原BB 链( f i b r i n o g e nb e t ac h a i n ，F I B B ) 、 角蛋白8 4 ( k e r a t i n t y p e I Ic u t i c u l a r H b 4 ，K R T 8 4 ) 、角蛋白4 ( C y t o
12、k e r a t i n 4 ，K R T 4 ) 、 基膜聚醣( 1 u m i c a n ，L U M ) 、微管蛋白B 链( t u b u l i nb e t ac h a i n ，T U B B ) 矛I 波型蛋白 ( v i m e n t i n ，V I M E ) 八种瓜氨酸化自身免疫抗原在R A 滑膜中特异表达。但以上研究 只是对R A 中瓜氨酸化自身免疫抗原进行了初步筛选，筛选结果还有待于进一步的 实验验证。 目的：选取二维免疫印迹的方法筛选到的R A 中瓜氨酸蛋白K I H 8 4 、K R T 4 、T U B B I I I 类风湿性关节炎瓜氨酸化自身免疫抗
13、原筛选及表达特异F 调蛋白的研冗 为研究对象，研究这三种蛋白在R A 患者滑膜组织及滑膜液中的表达情况及表达水 平，并进一步检测R A 患者血液中是否有其对应的自身免疫抗体的表达及表达水平， 从而证实R A 中新的瓜氨酸化自身免疫抗原存在。 方法：运用免疫组织化学方法定性分析R A 滑膜组织中8 4 、K R T 4 、T U B B 的表达 情况，实验以骨关节炎( o s t e o a r t h r i t i s ，O A ) 滑膜作为对照组；通过蛋白免疫印迹 定量分析K R T 8 4 、K R T 4 、T U B B 、在R A 滑膜及O A 对照中的表达差异；通过酶联免 疫吸附实验定量分析K R T 8 4 、K R T 4 、T U B B 在R A 滑膜液及O A 对照中的表达差异； 通过酶联免疫吸附实验检测盯8 4 、K R T 4 、T U B B 在R A 血液中可能存在的自身免疫 抗体的表达水平。统计多组比较采用单因素的方差分析( o n e w a yA N O V A ) ，两两 比较采用
