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1、人宫颈癌放射治疗前后Pgp170的表达 作者：惠延平郭国祯黄高升王映梅马福成朱晓慧 【关键词】 宫颈肿瘤 关键词: P-糖蛋白;放射疗法;宫颈肿瘤;免疫组织化学 摘 要:目的 探讨放射治疗前、后人宫颈癌组织P-糖蛋白（P-gp170）的表达及变化特点. 方法 应用免疫组化SP法检测了38例原发性宫颈癌组织放射治疗前后P-gp170的表达. 结果 宫颈癌组织P-gp170阳性表达在放疗前为58%（22/38），其中角化型、非角化型鳞癌、腺癌及腺鳞癌分别为10/18（56%），6/10，4/6，2/4例;放疗后其P-gp170阳性表达为90%（34/38），其中角化型、非角化型鳞癌、腺癌及腺鳞癌分
2、别为16/18（89%），8/10，6/6，4/4例，P-gp170表达阳性强度较放疗前亦呈增高趋势.放疗后宫颈癌组织P-gp170表达率和强度与放疗前相比有显著性差异（P<0.01）. 结论 放射治疗可诱导和加强宫颈癌组织P-gp170过表达，这可能是引起放、化疗交叉耐受的原因之一. Keywords:P-glycoprotein;radiotherapy;cervix neoplasms;immunohistochemistry Abstract:AIM To study the expression of P-glycoprotein（P-gp170）in human cervic
3、al cancer cells pre-and post-radiotherapy.METHODS The immnuohistochemical staining was performed to test the expression of P-gp170in pre-andpost-radiation cervical tumor specimens from38patients.RESULTS The positive rate of P-gp170expression in cervi-cal cancer pre-radiotherapy was58%（22/38）.Among t
4、hem，the positive expression rates were10/18（56%），6/10，4/6and2/4in keratinizing，nonkeratinizing squamous-cell carci-noma，adenocarcinoma and adeno-squamous-cell carcinoma respectively.The positive rate of post-radiotherapy was90%（34/38）and among them，the positive expression rates were16/18（89%），8/10，6
5、/6and4/4in keratinizing，nonkera-tinizing squamous-cell carcinoma，adenocarcinoma and adeno-squamous-cell carcinoma respectively.The P-gp170positive expression after radiotherapy was significantly higher than that of pre-radiotherapy（P<0.01）.CONCLUSION Our results indicate that irradiation can indu
6、ce and increase the overexpression of P-gp170and may，therefore，be one of the reasons of crossed resistance to chemotherapy and radiothera-py. 0 引言 宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，其死亡率占妇女恶性肿瘤的首位.宫颈癌的治疗多采用手术、放射治疗和化疗相结合的综合治疗.近年来有关多药耐药基因（MDR-1）表达产生的P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp170）增高所介导的多药耐药性受到高度关注1 ，大量研究证明化疗可诱导肿瘤细胞MDR-1
7、过度表达从而产生耐药性1-3 .但在肿瘤治疗中广泛采用的放射治疗对MDR-1有何影响，很少见报道4-9 .尤其在宫颈癌治疗中，放射治疗对MDR-1及其表达产物P-gp170的影响尚不明确.我们应用免疫组化方法检测了38例原发性宫颈癌放射治疗前后癌组织P-gp170的表达，探讨放射治疗对宫颈癌多药耐药性的影响. 1 材料和方法 1.1 标本来源 选择西京医院1998-01/2001-05初诊的原发性宫颈癌并经活检病理诊断确诊后实施放疗的患者38例，平均年龄48.4（2870）岁.诊断标准参照WHO1994年分级标准，其中角化型鳞癌18例，非角化型鳞癌10例，腺癌6例，腺鳞癌4例.活检前均未接受过
8、放射治疗和化疗.病理诊断后，患者均给予术前放射治疗.直线加速器8MV-X射线，盆腔前后野（15cm20cm）对穿照射，每次2Gy，1次・d-1 ，5次・wk-1 ，共4wk，总剂量40Gy.放疗后15d，行宫颈癌根治切除.收集初次活检和放疗后根治切除标本. 1.2 方法 所有标本经40g・L-1 中性多聚甲醛固定，常规脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋.5m连续切片，切片贴于经多聚赖氨酸处理的载玻片上，50烘片2h，分别行HE染色及P-gp170免疫组化染色.P-gp170mAb，SP检测试剂盒及DAB显色剂均为美国Zymed公司产品（购自北京中山生物技术有限
9、公司）.应用SP法染色，抗体稀释度为140，染色方法与步骤根据产品说明书进行.以正常鼠血清代替一抗为阴性对照，以PBS代替一抗为空白对照，以表达P-gp170的正常肾组织阳性切片为阳性对照. 1.3 阳性结果判断 细胞膜和胞质内出现棕黄色颗粒着色者为阳性细胞.观察5个以上有代表性的视野并计数阳性细胞.P-gp170表达强度判断:（-）为阳性细胞百分率小于20%，（+）为20%60%癌细胞阳性;（）为大于60%的癌细胞阳性. 统计学处理:采用对数线性模型分析检验. 2 结果 2.1 病理学形态观察 HE切片显示:宫颈癌组织在放疗前多呈片巢状或腺样排列，浸润性生长，放疗后癌组织多呈小巢团状、小灶状
10、伴弥漫性坏死、局灶性变性、炎细胞浸润、异物巨细胞反应及纤维组织增生. 表1 放疗前后宫颈癌组织中P-gp170的表达结果略 2.2 Pgp170染色结果 P-gp170阳性染色呈棕黄色颗粒，阳性反应颗粒均定位于癌细胞膜及胞质，肿瘤间质为阴性（Fig1，2）.不同组织类型的宫颈癌放疗后P-gp170的表达强度及表达率均较放疗前增高，P-gp170在各组织类型宫颈癌放疗前后的表达情况见Tab1.经对数线性模型分析得:4种组织类型的宫颈癌组织P-gp170表达基本一致（2 （6）=2.68，P>0.05）;放疗前后宫颈癌组织P-gp170表达明显不同（2 （2）=11.26，P<0.01
11、），放疗后P-gp170更易表达. 图1 图2 略 3 讨论 P-gp170是MDR-1的基因产物，Mr 为170103 的糖蛋白，P-gp170介导的细胞内药物外流，是肿瘤细胞存在的一种耐药机制1 .化疗药物对各种肿瘤细胞P-gp170表达的影响已有大量报道，普遍认为肿瘤细胞具有天然耐药性和接受化疗后逐渐产生的获得性耐药性2，3 .作为在肿瘤综合治疗中起主要作用或协同作用的放射治疗，对肿瘤细胞MDR-1会产生何种影响?目前国内外报道很少，多局限于体外实验且意见不一4-8 .多数研究结果显示辐射可诱导MDR-1产生，MDR-1也可加强辐射耐受性4-7 .Hill等4 用低剂量X射线照射人卵巢肿
12、瘤细胞，发现辐射后产生了MDR相关的两种蛋白过表达，在产生放疗耐受性的同时，也产生了多药抗药性，影响了化疗效果.Osmak等6 用低剂量射线照射人宫颈癌Hela细胞，诱导癌细胞对多种化疗药物的耐药性，研究显示其胞膜P-gp170表达与辐射诱导的耐药有关.Sanchez等8 的研究得出了不同的结果，该研究发现电离辐射后的KB细胞，MDR-1及P-gp170水平同时降低.国内有研究发现宫颈癌组织有较高的MDR-1基因表达，MDR-1基因表达与肿瘤组织分级有关并可能预示预后不良3，9 .但放射治疗对宫颈癌多药耐药基因表达是否有影响，目前国内未见明确报道.我们的研究显示宫颈癌组织在放疗前即具有一定的P
13、-gp170表达，放疗后其表达率、表达强度均明显增高，放疗前后宫颈癌组织P-gp170表达有显著性差异（P<0.01），从而认为宫颈癌细胞有原发耐药性，放疗可进一步诱导或加强多药耐药性产生. 辐射是如何诱导MDR-1表达以及MDR-1表达对辐射耐受性影响的机制尚不清楚.有作者认为肿瘤细胞产生对化疗、放疗耐受性的机制是不同的10 ，也有研究认为某些肿瘤细胞具有相同的抗化学药物、抗生物和抗放射机制，可能与DNA拓扑异构酶水平、基因扩增及突变以及DNA修复有关11-12 .我们认为肿瘤细胞的多药耐药性也是肿瘤细胞为维持自身生存出现的一种应激能力，它的主要功能是使细胞耐受各种不同结构、功能及杀伤
14、机制的多种药物的攻击，瘤细胞产生多药耐药性可能是在应激情况下维持自身稳定的途径之一.推测在肿瘤的治疗中，不论应用放射线或化学抗癌药，在杀伤肿瘤细胞的同时，必然引起肿瘤细胞DNA损伤和修复反应，这一过程促使抗损伤基因得以表达.多药抗药性的形成是抗损伤的反应，P-gp170过表达是引起放疗、化疗交叉耐受的原因之一.目前，放、化疗结合的综合治疗仍是中、晚期宫颈癌的主要治疗手段，鉴于放疗可引起宫颈癌P-gp170表达增强，故在制定治疗方案时应充分 考虑宫颈癌的多药耐药和抗放疗特性，使治疗方案更趋合理. 参考文献: 1Ling V.P-glycoprotein and resistance to ant
15、icancer drugs J.Cancer，1992;60（6）:2062-2066. 2Tanigawa N，Fujii H.Detection of P-glycoprotein and its clinical significance J.Nippon Rinsho，1997;55（5）:1064-1068. 3Kang S，Li S，Song CZ，Sun YM，Song JF，Zhou WD.The de-tection of expression of multiple drugs resistance genes in cervix with quantitative RT-PCR J.Zhonghua Fuchanke Zazhi（Chin J Obstet Gynecol），1998;33（3）:172-173. 4Hill BT，Moran E，Etievant C，perrin D，Masterson A，Larkin A，Whelan RD.Low-dose twice-daily fractionated X-irradiation of ovarian tumor cells in vitro generates drug-resistant cells overexpressing two multidrug resistance-
