《烟草中氨基酸的分离与分析方法研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《烟草中氨基酸的分离与分析方法研究（42页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、烟草中氨基酸的分离与分析方法研究郑州轻工业学院 本科毕业设计（论文）题 目 烟草中氨基酸的分离与分析方法研究学生姓名 陈晓 专业班级 应用化学06-1班 学 号 200604040104 院 （系） 材料与化学工程学院 指导教师(职称) 贾春晓（教授） 完成时间 2010年 6 月5日 38目 录摘 要IABSTRACTII前 言11 实验部分21.1 实验材料、试剂及仪器21.1.1 实验材料21.1.2 所用试剂与仪器21.2 相关溶液的配置41.2.1 盐酸的配置41.2.2 衍生化试剂的配制41.2.3 10甲醇-水溶液41.2.4 AccQTag 缓冲溶液51.2.5 60乙腈-水5
2、1.2.6 标准溶液51.2.7 BF08二号样51.2 实验原理61.2.1 高效液相色谱法分析的原理及特点61.2.2 AccQTag 方法的原理101.3 实验方法121.3.1 原料的预处理121.3.2 HPLC分析条件121.3.3 柱前衍生132 结果与讨论152.1 水解烟叶中游离氨基酸所用盐酸浓度的确定152.2 色谱条件优化152.2.1 仪器条件152.2.2 样品的稀释浓度的确定152.3烟叶中氨基酸的定性分析162.4 烟叶中氨基酸的定量分析202.4.1 氨基酸标准曲线的绘制202.4.2 烟叶中氨基酸的定量分析252.4.3 氨基酸含量的对比分析29结 论31致
3、谢33参考文献34附 表36烟草中氨基酸的分离与分析方法研究摘 要烟草中的氨基酸是重要的致香前体物质 ,同时也是合成烟碱、多酚等有关物质的前提,对烟株体内氮的代谢及烟叶品质具有重要作用。本实验研究两种黑龙江白肋烟BF08和C2F不同工艺处理的烟丝中游离氨基酸种类和含量的变化，为白肋烟的进一步应用研究提供较丰富的基础数据,同时对白肋烟的加工工艺参数的调整有着积极的指导意义，有利于选择优良的工艺条件。采用0.1M盐酸溶液水解、Waters AccQFluor 衍生剂柱前衍生法处理烟样，其中氨基酸种类及含量用反相高效液相色谱法（Waters AccQTag C18柱氨基酸分析柱）,外标法做标准曲线，
4、16种氨基酸可以准确定性并进行了定量测定。实验结果表明,所建立的定量分析方法相对标准偏差小于10 %, 线性相关系数大于0.99, 方法检测限为：0.1pmol。该法采用的标准曲线有良好的线性关系，各种氨基酸的分离效果较好，方法的精密度高。用AccQ柱前衍生反相高效液相色谱法测定氨基酸的含量，简单快速，结果准确、可靠。 关键词 高效液相色谱/氨基酸/白肋烟/柱前衍生SEPARATION ANDANALYSIS METHODOF AMINO ACIDS IN TOBACOOABSTRACTAmino acids in tobacco is an important aroma precursor
5、s, the premise of nicotine synthesis, polyphenols and other relevant material,having an important role in Nitrogen metabolism in tobacco plants and tobacco quality. We study the type and content of free amino acid changes in two kinds of Heilongjiang Burley tobacco BF08 and C2F with different proces
6、ses.This study provides a more extensive basic data for further application of burley,having a positive significance for the adjustment of Burley processing parameters ,and has an advantage of the selection in excellent conditions.The study use 0.1M HCl for hydrolysis , using pre-column derivatizati
7、on RP-HPLC to derive the tobacoo ,using Waters AccQ Tag C18 column amino acid analysis column with gradient elution to determine the type and content of amino acids.This method can accurately characterize 16 kinds of amino acids and the content of each amino acid in Burley tobacco .The results show
8、that the relative standard deviation of Established quantitative analysis is Less than 10%, the linear correlation coefficient of Established quantitative analysis is greater than 0.99 ,and the detection limit is 0.1pmol. In this method, the standard curve has good linear relationship,better separat
9、ion of various amino acids and high precision.The way of using pre-column derivatization RP-HPLC to determine the amino acids is simple, rapid, accurate and reliable.KEY WORDS HPLC/ amino acids/Burley tobacco / pre-coLumn deriva前 言 氨基酸（amino acid）是生物功能蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质；是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机
10、化合物的总称，氨基一般连在-碳上。氨基酸是人体中物质代谢、生理活动、基因遗传、生长发育、组织发育、组织修复、抵抗疾病必不可少的物质。氨基酸在人体中量少但种类繁多。1 烟草中的氨基酸是重要的致香前体物质 ,同时也是合成烟碱、多酚等有关物质的前提,对烟株体内氮的代谢及烟叶品质具有重要作用【2】。烟草中氨基酸有20余种，在烟草调制、醇化或发酵、加工乃至燃烧过程中, 游离氨基酸与还原糖之间可发生酶催化及非酶催化的棕色反应, 即梅拉德反应(Maillad reaction) 。生成多种具有蒸煮、烤香、爆米花香味特征的吡喃、吡嗪、吡咯、吡啶等杂环化合物, 某些氨基酸如苯丙氨酸还可以自身分解成香味化合物,
11、如苯甲醇、苯乙醇等。【3】氨基酸在烟草生长和加工(如调制、陈化、发酵、加料等)的不同阶段也会发生不同的变化,从而对烟草的品质产生较大影响。【4】一般说来,适量的氨基酸有助于提高烟气劲头和增加丰满度。若氨基酸含量太高,烟气辛辣、味苦、刺激性强烈,这是由于在燃烧过程中氨基酸通常生成NH3 等含氮化合物,个别氨基酸还产生HCN等危害健康的烟气成分;若氨基酸含量太低,烟气则平淡无味缺少丰满【5-7】。 20世纪60年代以来,国内外对烟草中氨基酸含量的研究较多,如不同品种间、不同产地间、不同生育时期及不同烘烤条件下等多方面的对比研究【8-13】。制丝过程中的不同工艺条件对烟草的内在化学成分亦会产生很大影
12、响。但这些研究大部分都集中在烤烟、水解氨基酸上. 随着吸烟与健康问题日益受到人们的重视,发展低焦油混合型卷烟势在必行,白肋烟作为混合型卷烟的一种重要原料烟,对它的研究也显得非常重要,而关于白肋烟在这方面的研究却比较少【14-16】 ,尤其对于白肋烟中涉及游离氨基酸的研究则极少【16-17】。传统氨基酸分离先通过纸色谱、薄层色谱进行分离, 分离之后再与水合茚三酮进行呈色反应, 从而用比色法测定其含量【18】。随着分析仪器的发展和普及, 氨基酸的分离和测定均转向了仪器分析, 如柱前衍生反相高效液相色谱法、高效阴离子交换色谱、积分脉冲安培检测、阳离子交换色谱与柱后茚三酮衍生结合1、柱后衍生高效阳离子
13、交换色谱法、柱前衍生反相高效液相色谱法、毛细管电泳技术(CE)，气相色谱(GC)，高效液相色谱/质谱(HPLC /MS)和毛细管电泳/质谱(CE /MS)等。【19】本文在前期探索的基础上,利用AccQ-Tag 化学品包(Waters公司)联合柱前衍生反相高效液相色谱法，研究两种黑龙江白肋烟BF08和C2F不同工艺处理的烟丝中游离氨基酸种类和含量的变化，为白肋烟的进一步应用研究提供较丰富的基础数据,同时对白肋烟的加工工艺参数的调整有着积极的指导意义，有利于选择优良的工艺条件。1 实验部分1.1 实验材料、试剂及仪器1.1.1 实验材料黑龙江恩施白肋烟 (红塔集团横向项目）1.1.2 所用试剂与
14、仪器所用试剂：名字纯度生产厂商盐酸分析纯(AR)中国宿州化学试剂有限公司安徽ACCQTagTM一级色谱纯Waters corporation made in USA乙腈一级色谱纯天津市四友精细化学品有限公司甲醇一级色谱纯天津市四友精细化学品有限公司娃哈哈纯净水-新乡娃哈哈公司氨基酸标准品88122Waters corporation made in USA所用仪器：仪器型号生产厂商高效液相色谱仪Waters 1525Waters科技有限公司超声波清洗仪SK3300LH上海科导超声仪器有限公司精密电子天平（需证实）LA2305(万分之一)北京赛多利斯仪器有限公司真空泵AUTO SCIENCE天津奥特塞斯仪器有限公司漩涡混合器XH-C江苏省金坛市医疗仪器厂350g多功能粉碎机JL-07上海佳锐工具有限公司电子恒温水浴锅DZKW北京中兴伟业仪器有限公司电热鼓风干燥箱DHG-9145A上海益恒科学仪器有限公司电热恒温干燥箱DHG-9023A上海益恒科学仪器有限公司10ml一次性使用无菌注射器0.732河南圣光集团医用制品有限公司100-1000微升可调自动取样枪ZX52820Finnpipette Thermo Scientific20-200微升可调自动取样枪ZX6
