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1、酶联免疫检测技术简介 万泰各项产品简介,李 一 然 2008年4月,一、酶联免疫技术的基础及特点,什么是ELISA?,免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质 。 ELISA是一种免疫测定。,基础定义,抗原（Antigen）：能在机体中引起特异性免疫应答的物质。 抗体（Antibody）：能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。 Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。 机体被微生物感染后，先产生IgM抗体，然后产生I
2、gG抗体。经过一段时间，IgM抗体量逐渐减少而消失，而IgG抗体可长期存在，在疾病痊愈后可持续数年之久。,重要指标,灵敏度：能检测到的分析物的最小量，表示检测下限的能力。 特异性：鉴别阴性标本的能力。 精密度：指对同一个标本进行重复分析，其结果间的符合率。,重要指标,稳定性：指在效期内试剂质量参数的变化。一般用非储存条件下较高温度进行破坏性实验数天，参观各质量参数的变化，一般37 1天相当于445天。 质控血清：指为了对实验结果进行控制而配制的血清。一般用无溶血无脂血的血清或血浆。 本底：指底色，如HbsAg ELISA试剂盒，阳性显色、阴性不显色，本底就是阴性显色的情况；,ELISA检测方法
3、,1.夹心法. 2.间接法. 3.竞争法. 4.捕获法.,夹心法,双抗原夹心： 固相(包被)抗原Ag + 样品(抗体Ab) + 酶标抗原Ag* Ag-Ab-Ag* + 底物(TMB)显色 双抗体夹心： 固相(包被)抗体Ab + 样品(抗原Ag) + 酶标抗体Ab * Ab-Ag-Ab* + 底物(TMB)显色,间接法,固相(包被)抗原Ag + 样品(抗体Ab) + 酶标二抗Ab* Ag-Ab-抗Ab* + 底物(TMB)显色,竞争法,固相(包被)抗原Ag + 样品(无抗体Ab) + 酶标抗体Ab* Ag-Ab* + 底物(TMB)显色,捕获法,固相-抗IgM抗体(抗) + 样品(IgM) 抗-
4、IgM + 酶标抗原Ag* 抗-IgM-Ag* + 底物(TMB)显色,与其他检测方法比较,二、万泰各项产品简介,1、HIV,HIV ELSIA试剂的发展,简介,全称：人类免疫缺陷病毒HIV（1+2型）抗体诊断试剂盒 方法：双抗原夹心酶联免疫法（第三代） 检测对象：血液标本中的HIV总抗体 原料：基因重组（万泰和厦大合作研制），包被GP41、GP120、GP36，片段齐全。 检测窗口期：20天左右,优异的自产原料,1.大肠杆菌表达高活性、高特异性水溶性抗原； 2.多表位表达蛋白抗原； 3.相同表位的包被、标记抗原采用不同菌体表达，不同方法纯化；,基 因 重 组 多 表 位 嵌 合 抗 原,向其
5、他试剂生产厂家提供原料,对HIV-2型阳性出色的检测能力,试剂盒内设置有HIV 型和型阳性对 照，为国产试剂首创，我们使用美国BBI 血清盘Panel202对万泰试剂进行考核。,对HIV O亚型的检测,O亚型血来源于美国BBI,灵活、稳定的操作模式,实验温度可以设置在371。 两步孵育时间均为302分钟。 操作更灵活，试验更稳定，结果更可靠。,超强的抗干扰能力,临床研究显示，多种其他疾病潜在干扰因 素血清标本均不会影响万泰两步法HIV诊断试剂盒的灵敏度和特异性，适合临床使用,众多的荣誉,第一个国产第三代HIV检测试剂,正在申报CE认证,2007年全年部分客户使用情况,29,首家推出第四代HIV
6、试剂,HIV-Ab与HIV-Ag双系统检测 HIV-Ag和HIV P24抗体共同包被 双抗原夹心法检测HIV-Ab 双抗体夹心法检测HIV-Ag 生物素-亲和素反应系统应用 包被抗体生物素标记抗体HRP标记亲和素,30,临床考核,31,临床考核汇总,研究考核汇总： 进一步缩短窗口期，有效降低HIV传播风险 考核超过700份阳性标本（不同亚型和毒株），灵敏度100 保证高灵敏度的同时，具备优越的特异性 考核超过15000份阴性标本（包括特殊标本），特异性99.8,32,结 论 万泰 HIV Ag/Ab诊断试剂,全新第四代 HIV 筛查试剂 为使用者提供 :,增强检验安全性,更可信赖的实验结果,3
7、3,我们在HIV方面的研发新进展,1、HIV确证试剂（RIBA试剂） 与艾控中心，地坛医院等单位合作的十五攻关课题 目前已进行部分临床考核 2、HIV唾液尿液检测试剂（DOT-ELISA） 与艾控中心，地坛医院等单位合作的十五攻关课题 目前已进行部分临床考核,2、乙肝两对半系列试剂,简介1,全称： 1、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）诊断试剂盒 2、乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）诊断试剂盒 3、乙型肝炎病毒 E 抗原（HBeAg）诊断试剂盒 4、乙型肝炎病毒 E 抗体（HBeAb）诊断试剂盒 5、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）诊断试剂盒,乙肝两对半检测原理,夹心法：阳性显色、阴性不显
8、色（右） HBsAg、HBsAb、HBeAg 竞争抑制法：阴性显色、阳性不显色（左） HBeAb、HBcAb,简介3,潜伏期: 平均60-90 天 范围：45-180 天 黄疸发生率: 5 岁, 10% 5 岁, 30%-50% 急性病死率: 0.5%-1% 慢性感染: 5 岁, 30%-90% 5 岁, 2%-10% 慢性肝病患者 病死率: 15%-25%,简介4,高,中,低/未发现,血液 血清 伤口分泌物,精液 阴道分泌物 唾液,尿液 粪便 汗液 泪液 乳汁,乙肝标志物及临床意义1,乙型肝炎病毒（HBV）具有明显的种属及嗜肝特性，可致持续性病毒感染。我国属乙肝感染的高发区，乙肝表面抗原（H
9、BsAg）的携带者超过10%。 通常判断HBV感染及其状况的指标为HBV血清血标志物乙肝两对半、HBc-IgM、HBV DNA等。 乙肝病毒（HBV）又称Dane颗粒（丹颗粒），由外至内可分为包膜蛋白、核壳蛋白、HBV DNA等主要组成。 包膜蛋白构成乙肝病毒表面抗原（HBsAg）核壳蛋白构成乙肝病毒核心抗原（HBcAg）和乙肝病毒e抗原（HBeAg）,乙肝标志物及临床意义2,乙肝表面抗原（HBsAg） HBsAg于1963年在澳大利亚土著人血中发现，故也称为澳大利亚抗原（简称“澳抗”），具有免疫原性，可刺激机体产生相应的抗体，是机体感染HBV后最早出现的血清血指标。 HBsAg分为4个亚型：
10、adw、adr、ayw和ayr。不同亚型的HBsAg刺激机体产生的HBsAb不同。,乙肝标志物及临床意义3,乙肝表面抗体（HBsAb） HBsAg刺激机体产生的特异性抗体，能中和体液中的HBV，感染乙肝病毒后6-23周出现。见于乙肝恢复期、HBV既往感染和乙肝疫苗免疫后。HBsAb滴度10mIU表示有保护性，可抵御同一亚型的再感染。,乙肝标志物及临床意义4,乙肝病毒核心抗原（HBcAg） HBV核心颗粒外表面具有HBcAg活性，但外周血中没有游离的HBcAg。HBcAg阳性表示有Dane颗粒存在，有传染性。目前临床较少检测该项指标。,乙肝标志物及临床意义5,乙肝核心抗体（HBcAb） HBcA
11、b是乙肝核心抗原的总抗体。感染HBV后最早出现的抗体是HBc-IgM抗体，它是乙肝病毒急性感染的重要指标，慢性肝炎的炎症活动期也呈阳性。核心抗体不是中和抗体，HBc-IgG抗体可持续多年不消退，是既往感染的指标。,乙肝标志物及临床意义6,乙肝e抗原（HBeAg） HBV核心颗粒内表面具有HBeAg活性，也可以由HBcAg经蛋白酶降解后产生，在乙肝潜伏期后期出现，略晚于HBsAg。HBeAg阳性表示HBV在体内复制，有很强的传染性。 进入恢复期后，HBeAg随着HBsAg的消失而消失，其消失前后出现HBeAb。,乙肝标志物及临床意义7,乙肝e抗体（HBeAb） HBeAb的出现预示HBV复制减弱
12、或中止，疾病可能向好的方向转化。HBeAg逐渐消失HBeAb逐渐产生的时期称为血清转换期，即由复制期转为非复制期。在这一时期可能出现eAg、eAb同阳的现象。HBeAb也不是保护性抗体。,乙肝标志物产生的先后顺序,HBsAg(HBcAg)HBcAbHBeAgHBeAb,乙肝两对半模式,见资料,万泰HBsAg EIA试剂特点,1.最低检出量达到1 IU，质量达到国际先进水平。 2 .特异性好，检测准确性高。 3.中国药品生物制品检定所标准血清检验结果全部合格。 4.卫生部临床检验中心历年评比全部成绩优秀。,3、HCV,简介,全称：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒 方法：间接酶联免疫法（第三代） 检测对
13、象：血液标本中的HCV IgG 抗体 原料：基因重组，包被NS3、NS4、NS5、CORE，片段齐全。,抗-HCV检测中HCV的抗原,窗口期,检测针对HCV四种抗原的抗体 第二代试剂在感染后平均10周左右可以检出 第三代试剂感染后平均7-8周为阳性 在极少数病例中，如免疫抑制、肾功能衰竭等，抗-HCV可以保持阴性,2007年武汉血液中心HCV考评,检定所考评市场流通的HCV 抗体检测试剂,参加临床考核和质量评价的厂家中，万泰HCV试剂盒的灵敏度、特异性等综合水平名列国产试剂最佳水平。,总体评价,易于操作，便于推广，实验条件要求较低，不存在污染问题。 筛查献血员，显著降低输血后HCV感染 广泛应
14、用于临床，起到辅助诊断的作用，有效减少医疗纠纷。,4、TP,简介,全称：梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒 方法：双抗原夹心酶联免疫法 检测对象：血液标本中的梅毒总抗体 原料：基因重组（万泰和厦大合作研制），包被P15、P17、P47，片段最齐全。,常用梅毒检测方法的比较,万泰TP EIA 与TPPA的比较,标本：类风湿病人血清10份，乙肝病人血清20份，红斑狼疮病人血清6份。来源于解放军301医院。,结论：在被检测的36份血清中，未发现假阳性反应。,万泰TP试剂对特殊标本的检测,检测单位：北医第一医院皮肤科、新疆HIV检测中心,结论：万泰梅毒EIA灵敏度较TPHA好,部分临床考核数据,万泰TP-ELI
15、SA 双抗原夹心多片段试剂,原料自产，根本上保证质量稳定！ 包被抗原片段多：P15、P17、P47 ，目前厂家中实际片段最多的生产家，混合包被保证梅毒灵敏度。 卫生部临床检验中心血清标准盘合格率100% 2001年上市，质量优秀，销量增长最快。,5、HEV系列试剂,HEV简介及危害,戊型肝炎（Hepatitis E）,由戊型肝炎病毒(HEV)引起、肠道传播为主的急性传染性肝炎。 可散发和流行,水源和食源暴发(50次) 发展中国家为主,占急性非甲非乙型肝炎 的3070%左右; 临床表现类似甲肝，但不同的是： 潜伏期更长, 40天 (1560天)； 年龄较大； 胆汁郁积更明显； 病死率较高(15%
16、)，孕妇(20%以上)； 乙肝患者发生戊肝容易导致重症肝炎； 二代病例罕见； 无有效疫苗和治疗方法。 戊肝是一种人兽共患病?!,基因分型 - 四型9群,戊型肝炎世界流行状况,戊肝广泛流行于世界各地，尤其是发展中国家。,Non-ABC中25%是HEV引起的。,与人类密切接触的动物如猪、牛、羊、鼠、鸡、狗和野猴等体内陆续检出HEV抗体，以猪的感染率最高； 猪、鼠体内分离的HEV与人HEV有很高的同源性； 猪HEV和人HEV可成功感染猪、恒河猴和黑猩猩； 以猪HEV感染过的猪肝、心、胰(静脉接种)和骨骼肌匀浆物、粪便(口服接种)再感染SPF猪，发现只有接种肝匀浆物的猪在3-7和14-20DPI出现抗体转阳和病毒血症。 外环境中HEV RNA污染严重，如印度垃圾（11%
