《嗜水气单胞菌感染美洲鳗鲡的病理变化观察》由会员分享，可在线阅读，更多相关《嗜水气单胞菌感染美洲鳗鲡的病理变化观察（17页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、嗜水气单胞菌感染美洲鳗鲡的病理变化观察摘要 本研究利用嗜水气单胞菌攻毒感染美洲鳗鲡，采集鳗鲡肝、脾、肾、心, 观察鳗鲡经嗜水气单胞菌感染后各脏器发生的组织病理变化，从组织病理学角度研究嗜水气单胞菌对美洲鳗鲡的致病性。结果显示，经嗜水气单胞菌感染后鳗鲡各脏器组织细胞均出现不同程度的病变。心脏中心肌细胞空泡化，心肌纤维浑浊肿胀，颗粒变性，心肌横纹模糊不清。肝细胞脂肪变性，胞浆内充满空泡，部分肝细胞坏死，肝组织间有含铁血黄素沉着；脾脏组织疏松，淋巴细胞数量变少，红细胞大量分布在脾髓中，静脉管中充满大量红细胞，单核细胞和浆细胞；肾小球坏死裂解，结构消失，部分坏死细胞脱落至肾小囊腔中，集合管上皮细胞肿胀
2、，颗粒变性，部分上皮细胞脱落进入管腔中。关键词：人工感染 嗜水气单胞菌 美洲鳗鲡 组织病理变化 Histopathological changes of different organs of American eels (Anguilla rostrata) infected by Aeromonas hydrophilaAbstract :To study the pathogenicity and pathological changes of the infection of Aeromonas hydrophila to farmed American eels,The Aeromo
3、nas hydrophila were used to infect American eel and collected spleen，liver and kidney of the moribund eels .The results show that eel tissue organs are different degrees of pathological changes by Aeromonas hydrophila infection.The heart showed that the Cardiomyocytes became vacuolization and Myocar
4、dial fibers were cloudy swelling,and granular degeneration, myocardial stripes were blurred;the liver cell was full of vacuoles because of steatosis,some part of them were necrosis,Hemosiderin was came into being between the liver tissue;spleen lymphocytes reduced significantly ,a large number of er
5、ythrocyte appeared in red pulp,the vein contained a lot of erythrocyte and monocyte;the structure of renal disappeared because of necrosis,some necrosis cells shedding into renal cysts,The epithelial cells were swell and particals in Collection tube, some epithelial cells shed into the lumen.Key wor
6、ds:Anguilla rostrata Aeromonas hydrophila Artificial infection Pathological changes 目录引言11材料与方法21.1 供试鳗鲡21.2细菌来源21.3人工感染和脏器材料的采集21.4主要试剂的配制21.5包埋剂的配制31.6包埋块的制作31.7玻璃刀的制作41.8半薄切片的制作和染色观察41.9超薄切片的制作和染色观察42结果52.1鳗鲡的解剖病理变化52.2鳗鲡心脏的组织病理变化52.3 鳗鲡肝脏的组织病理变化52.4鳗鲡脾脏的组织病理变化52.5鳗鲡肾脏的组织病理变化53讨论64结论7致谢语7参考文献8图版说
7、明10引言美洲鳗鲡（American eel, Anguilla rostrata）为辐鳍鱼纲鳗鲡目鳗鲡亚目鳗鲡科中的一种。有一个蛇形身体及一个尖锐细小的头部。背部为棕色，腹部为茶黄色。它的牙齿尖锐但没腹鳍。随着世界养鳗业的发展，近十年来我国的鳗鲡产值逐年增长，发展更加迅速,但在目前高密度的集约化养殖生产过程中，鳗鲡病害时有发生,研究发现因细菌性疾病造成的经济损失约占90%，经济损失以亿元计。如何有效地防治鳗鲡细菌性疾病，这是近年来鱼病研究者们极其关注的课题。而对于高密度养殖的鳗鲡而言,由嗜水气单胞菌引起的疾病常常呈现较高的发病率和较高的死亡率，严重制约了鳗鲡养殖业的健康发展。嗜水气单胞菌(A
8、eromonas hydrophila)是养鱼池中的常见菌，可引起鳗鲡的赤鳍病1，鲤鱼和金鱼的竖鳞病2，鲢鳙鱼的打印病3，青鱼和草鱼的细菌性肠炎，鲟鱼，鲑鳟，革胡子鲶，斑点叉尾鮰，异育银鲫等鱼类的败血症4-6。其在侵入鱼内后，能产生多种毒力因子如：内毒素、外毒素、胞外酶 、S 层蛋白 、菌毛等7,8，引起鱼体的全身溶血性贫血和广泛的组织细胞变性、坏死，引发各脏器组织的损伤。近年来，许多研究者对嗜水气单胞菌感染不同鱼类的病理学变化进行了较为深入的研究，如鲫鱼感染嗜水气单胞菌后的脾、肾、肝均有不同程度的出血、溶血，并形成多量的黑素-巨噬细胞9；杂交鲟感染嗜水气单胞菌后肝、肾、脾等内脏器官组织发生循
9、环障碍，微血管扩张，广泛出现充血、出血或溶血，实质细胞经变性发展到坏死，严重时出现弥散性坏死灶10；海南牛鼻鲼感染嗜水气单胞菌后脾表现为急性败血型，肝呈弥漫性坏死,组织结构被破坏，肾病变以肾小球严重肿大和肾小管上皮细胞坏死为主11，但有关于嗜水气单胞菌侵染鳗鲡后各脏器组织病理变化的研究较少。鉴于该菌对鳗鲡的危害性较大，有必要了解其致病后所引起的一系列病理变化。本试验拟通过嗜水气单胞菌感染美洲鳗鲡体内不同脏器中引起的病理变化进行观察研究，并与正常脏器进行比较，以了解该病原菌主要侵害的组织及病理变化过程 ,了解嗜水气单胞菌的致病机理，为鳗鲡嗜水气单胞菌病的诊断提供参考依据。1 材料与方法1.1 供
10、试鳗鲡 20尾美洲鳗鲡购自集美大学海水养殖场，平均体重为15g。鳗鲡置于480L水族箱内，水温保持在23-26之间，水族箱保持充足氧气，每天投饵与换水各两次，投饵后3h换水40%，鳗鲡暂养一周后进行感染。病原菌分离自发病美洲鳗鲡肝脏。1.2 细菌 用于试验的细菌分离于发病美洲鳗鲡的肝脏，Biolog 生化鉴定和16S rRNA基因鉴定均为嗜水气单胞菌。1.3 人工感染和脏器材料的采集 20尾鳗鲡平均体重为15g均分为PBS和细胞注射组。用灭菌生理盐水将新培养的细菌稀释为1.0108cfu/ml后于鳗鲡背部肌肉注射0.1ml。观察感染后死亡或濒死鳗鲡的体表症状，解剖后对内部脏器组织进行病理变化观
11、察。采集鳗鲡的实质脏器（心、肝、肾和脾）并制备3mm3mm3mm大小的组织块。1.4 主要试剂的配制1 PBS缓冲液：甲液0.2mol/L Na2HPO412H2O 35.82g加蒸馏水溶解，最后稀释至500mL；乙液NaH2PO42H2O 15.605g，稀释至500mL。取甲液36.0ml和乙液14.0ml混合配制磷酸盐溶液（PH为7.2）。2 Epon812树脂，DDSA，MNA，DMP-303 染色剂 Pual 蓝；洋红；硼氢化钠4 50%丙酮溶液，70%丙酮溶液，80%丙酮溶液，90%丙酮溶液。5 2%醋酸双氧铀 ：0.2g醋酸双氧铀加50%乙醇溶解，最后稀释至10ml。 柠檬酸铅：
12、0.663g硝酸铅+0.88g柠檬酸铅加蒸馏水溶解，最后稀释至15ml1.5 包埋剂的配制为了使包埋块质地柔软，容易进行修块，所以按照以下方案配制：配制剂量 70mLEpon812 35mLDDSA 8mLMNA 27mLDMP-30 1.4mL1.6 包埋块制作实验项目 实验内容 所需时间预固定 组织块（小于1mm）浸入2.5戊二醛 2h(室温)或 磷酸缓冲液 过夜(4oC)漂洗 0.1mol/L PBS缓冲液漂洗3次，10 min/次 30min后固定 1%锇酸缓冲液，室温下 10min漂洗 0.1mol/L PBS缓冲液漂洗3次，10 min/次 30min系列脱水 50%丙酮 10min 70%丙酮 10min 80%丙酮 10min 90%丙酮 2次，10min / 次 20min 100%丙酮 2次，15min/ 次 30min浸透 丙酮 ：包埋剂 1 : 1 60min 1 : 2 60min 1 : 3 60min 纯包埋剂 60min 包埋 纯包埋剂 60min聚合 Epon812 24-36h1.7 玻璃刀的制作将2.5cm*40cm硬质条形玻璃的光滑边沿朝上，放在制刀机操作台面上，将其平均划割成2.5cm正方形小
