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1、土壤含水量的测定 1 土壤速效氮、磷、钾的测定 2 一. 土壤速效 N 的测定（碱解扩散法） 2 二. 土壤速效 P 的测定.4 三. 土壤速效 K 的测定（NH4OAC浸提，火焰光度计测定法）.5 土壤有机质测定（稀释热法） 6 光合作用强度测定 8 1.LI-6400 测定系统测定植物光合.8 2.TPS-1 光合作用测定系统操作方法10 叶绿素含量的测定 .11 植物组织中自由水和束缚水含量、相对含水量的测定 .13 植物根系活力的测定（TTC 法）16 植物伤流液中糖和氨基酸的鉴定 .18 膜透性的测定 .20 植物组织中丙二醛含量的测定 .20 脯氨酸含量的测定 .22 过氧化物酶活
2、性的测定 .25 过氧化氢酶活性的测定 .26 硝酸还原酶的测定 .29 酸性、中性转化酶 .30 植物组织中可溶性蛋白质含量的测定 .33 （考马斯亮蓝 G250 染色法） 33 植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮比色法） .34 叶片全 N、P、K 的测定 .36 一、样品的消化 .36 二、叶片 N、P、K 的测定 .37 叶片全 N 的测定37 叶片全 P 的测定38 叶片全 K 的测定39 1 土壤含水量的测定土壤含水量的测定 一、基本原理： 用取土钻从田间取来土样，在 100105恒温条件下，烘烤到干燥状 态，并用烘干前后的重量求出土样的含水量占烘烤土样多采用电热恒温干 燥箱，它能
3、控制适宜的烘烤温度，因此测定结果比较准确，使用较广，但 缺点是测定时间长。有的使用红外干燥箱，虽然缩短了烘土时间，但因温 度较高，容易影响测定精度。采用简易加热设备的，则因烘烤温度不易控 制，精度较差。称重烘干法是人工取土，劳动强度较大，又不能定点观测 土壤湿度的连续变化，往往某些有机质在此温度时能逐渐分解而失重或氧 化而增重。因此，用此法只能测得近似的水分含量。由于该法的准确度和 精密度通常已达到土壤分析的要求，故测定土壤水分仍以烘箱法为准。 二、仪器设备 铝盒，土钻，天平，坩埚钳，干燥器，电子天平，分析天平，电热式 恒温箱。 三、测定步骤： 1.在野外土壤水分观测点用土钻取样装入铝盒，取湿
4、土重量一般以 30-50g 为宜，太少容易产生太大误差。每个观测点应作三次重复。 2.称铝盒重：取有编号的铝盒一个，洗净，放入恒温箱中，敞开盖子，在 105-110烘干 30 分钟，用坩埚钳取出放在干燥器中盖好盖子，冷却到室 温（大约 20 分钟） ，在分析天平上称重，然后再烘 20 分钟称重，直到恒重 为止，此为铝盒重（W1） 3. 取代表性样品约 1520 克装入铝盒，在室内将装有土样的铝盒称重，在 电子天平上用一张小纸称风干土壤样品，并将土壤平铺上述已知重铝盒中， 2 盖上盖子，在分析天平上称量出铝盒加湿土的质量（W2） 。每个样品至少重 复三次。 4.揭开铝盒盖，放入烘箱中，在 105
5、下烘至恒重（6-8h） ，用坩埚钳从烘箱 中取出铝盒，盖好盒盖后放入底部有 CaCl2的干燥器中约 30 分钟，如无干 燥器则可放入磁盘或木盘中待至不太烫手时称质量。然后，再将样品放入 烘箱中烘烤 23 小时，马上在分析天平上称重称量，即铝盒加烘干土的重 量（W3） 。一直到前后两次称量相差不超过 0.05 克时为止。 三、结果计算： 以烘干土壤为基础水分的百分数 23 31 W -W =100% W -W 土壤含水量（% ） 以风干土壤为基础水分的百分数 23 21 W -W =100% W -W 土壤含水量（% ） 式中： W2湿土铝盒重 g W3烘干士铝盒重 g W1铝盒重 g 土壤速效
6、氮、磷、钾的测定土壤速效氮、磷、钾的测定 一.土壤速效 N 的测定（碱解扩散法） 1、原理：用 1.0N 氢氧化钠水解土壤样品，使土壤潜在有效氮，转化为氨 气状态，不断逸出，由硼酸吸收，用标准酸滴定，然后计算出水解性氮的 含量。 2、仪器及试剂配制 主要仪器：扩散皿、半微量滴定管、恒温箱 试剂配制： 3 （1）1.0N 氢氧化钠 称取化学纯氢氧化钠 40 克，用水解溶解后冷却定容 1 升。 （2）硼酸指示剂液 称取硼酸（H3BO3）20 克加水 900 毫升稍稍加热溶 解，冷却，加混合指示剂（0.099 克溴甲酚绿和 0.066 克甲基红溶于 100 毫 升乙醇中）20 毫升，然后以 0.1N
7、 氢氧化钠调节溶液至红紫色（PH 约 5.0）最后加入水稀疏至 1000 毫升，使溶液混合均匀，贮存于塑料瓶中。 （3）0.005mol/L（1/2H2SO4）标准溶液 量取 H2SO4（化学纯） 2.83mL，加蒸馏水稀释至 5000mL，然后用标准碱或硼酸标定之，此为 0.020mol/L（1/2H2SO4）标准溶液，再将此标准液准确地稀释 4 倍，即得 0.005mol/L（1/2H2SO4）标准液。 （4）碱性胶液 取阿拉伯胶 40.0g 和水 50mL 在烧杯中热温至 7080。 搅拌促溶，约 1h 后放冷。加入甘油 20mL 和饱和 K2CO3水溶液 20mL，搅 拌、放冷。离心除
8、去泡沫和不溶物，清液贮于具塞玻瓶中备用。 3、操作步骤： 取通过 60 号筛的风干样品 2.00 克于扩散皿外室，水平的轻轻旋转扩散 皿，使样品铺平。在扩散皿内室加入 2%硼酸指示剂液 2 毫升，然后在扩散 皿外室边缘涂上碱性甘油，盖上毛玻璃，并旋转数次，以使毛玻璃与皿边 完全粘住，再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿漏出一条缝，迅速加入 1.0N 氢氧化钠 5 毫升于扩散皿外室，立即用毛玻璃盖好。水平轻轻旋转扩 散皿，使溶液与土壤充分混匀，用橡皮筋固定，随后小心的放入 40 度的恒 温箱中 24 小时取出，以 0.01N 硫酸标准溶液滴定扩散皿内室硼酸溶液吸收 的氨量，终点是由蓝绿色转变红紫色，
9、记下所用的标准酸量（V） 4、计算结果： 3 cV-V Nmg kg10 m A -1 0 （）14. 0 碱解氮（）含量 （）= 式中；c0.005mol/L（1/2H2SO4）标准溶液的浓度； V样品滴定时用去 4 0.005mol/L（1/2H2SO4）标准溶液体积（mL） ； V0空白试验滴定时用去标准液体积（mL） 14.0氮原子的摩尔质量（gmol-1） W样品质量（g） ； 103换算系数 二. 土壤速效 P 的测定 鲍士旦主编.土壤农化分析.第三版.北京： 中国农业出版社,2000.12:74-83 中性和石灰性土壤速效磷的测定（0.5M 碳酸氢钠法） 1、原理: 石灰性土壤由
10、于大量游离碳酸钙存在,不能用酸溶液提取有效磷.一 般用碳酸盐的碱溶液.由于碳酸根的同离子效应, 碳酸盐的碱溶液降低碳酸 钙的溶解度，也就降低了溶液中钙的浓度就有利于磷酸钙盐的提取，同时 碳酸盐的碱溶液，也降低了铝和铁的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。 2、仪器及试剂配制 主要仪器：往复振荡机、分光光度计 试剂配制： （1）0.5M 碳酸氢钠浸提液 溶解 42.0 克碳酸氢钠于 800 毫升水中，以 0.5N 氢氧化钠调节浸提液 pH 至 8.5。此溶液暴于空气可因失去 CO2而使 pH 增高，可于液面加一层矿物油保存。贮存超过一个月，应检查 pH 是否 改变。 （2）无磷活性炭 活性炭常常含
11、有磷，应做空白试验，检查有无磷存在。 含磷较多，须用 2N HCl 浸泡过夜，用蒸馏水多次后，再用 0.5M 碳酸氢钠 浸泡过夜，在平瓷漏斗上抽气过滤，每次用少量蒸馏水冲洗多次，并检查 到无磷为止。含磷较少可直接用碳酸氢钠处理即可。 （3）磷标准溶液 准确称取 105烘干过 48 小时的分析纯 KH2PO4 5 0.2197 克于小烧杯中，以少量水溶解，将溶液全部洗入 1000 毫升的容量 瓶中，然后加 H2SO4 5 毫升，用水定容至刻度摇匀，此溶液为磷标准溶液 (50g/mL P)，吸取 50 毫升此溶液稀释至 500 毫升，即溶液为磷标准溶液 (5g/mL P) （4）7.5N 硫酸钼锑
12、贮存液 A. 5gL-1酒石酸氧锑钾溶液：取酒石酸氧锑钾 0.5g，溶解于 100mL 水 中。 B. 钼酸铵硫酸溶液：称取钼酸铵 10g，溶解于 450mL 水中，缓慢地 加入 153mL 浓 H2SO4，边加边搅。再将上述 A 溶液加入到 B 溶液中，最 后加水至 1L。充分摇匀贮于棕色瓶中此为钼锑抗混合液。 （5）钼锑抗混合显色剂 于 100 毫升钼锑贮存液中，加入 1.5 克左旋抗坏 血酸，此试剂有效期 24 小时，宜用前配制。 3、操作步骤： 称取通过 20 目筛的风干样品 5.00 克于 200 毫升三角瓶中，加入 0.5M 碳酸氢钠溶液 100 毫升，再加一角勺无磷活性炭，塞紧瓶
13、塞，在振荡机上 振荡 30 分钟，立即用无磷滤纸过滤，滤液承接于 100 毫升三角瓶中，立 即用无磷滤纸过滤，滤液承接于 100mL 三角瓶中，吸取滤液 10mL（含磷 量高时吸取 2.55.0mL，同时应补加 0.5M 碳酸氢钠浸提液至 10mL）于 150mL 三角瓶中，再用滴定管准确加入蒸馏水 35mL，然后移液管加入钼 锑抗试 5mL，摇匀，放置 30min 后，用 880nm 或 700nm 波长波长进行比色。 以空白液的吸收值为 0，读出待测液的吸收值（A） 。磷标准曲线绘制： 分别取 5 Pg/mL 磷标准溶液 0、1、2、3、4、5mL 于 150mL 三角瓶 中，再加入 0.
14、5M 碳酸氢钠 10mL，准确加水使各瓶的总体积达到 45mL， 摇匀；最后加入钼锑抗试剂 5mL，混匀显色。同待测液一样进行比色，绘 成标准曲线。最后溶液中磷的浓度分别为 6 0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5g/mL。 4、计算结果： 3 V mg kg1000 m 10 ts k A -1 土壤中有效磷（P）含量（）= 式中式中：p由标准曲线计算出 P 的质量浓度（g/mL） V显色时定容体积 ts为分取倍数（即浸提液总体积与显色对吸取浸提液体积之比） ； m风干土质量（g） k 将风干土换算成烘干土质量的系数； 103将 g 换算成 mg； 三. 土壤速效 K 的测定（NH4O
15、Ac 浸提，火焰光度计测定法） 1、原理：以 NH4OAc 作为浸提剂与土壤胶体阳离子起交换作用。NH4OAc 浸提剂常用火焰光度计直接测出。为了抵消 NH4OAc 的干扰影响，标准钾 溶液也需要用 1N NH4OAc 配制。 2、仪器及试剂配制： 主要仪器：火焰光度计、往返式振荡机。 试剂配制： （1）1N 中性醋酸铵溶液 称取化学纯醋酸铵 77.09 克加水稀释，定容至 近 1L，用 HOAc 或 NaOH 调至 PH7.0，然后稀释至 1 升。 （2）钾的标准溶液的配制及标准曲线的绘制 准确称取烘干（105 4-6 小时）的分析纯 KCl 0.1907 克溶于水中，定溶至 1 升，即含
16、K100g/mL。 然后分别准确吸取此 100g/mL K 标准液 0、 2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、40.0mL 放入 100mL 容量瓶中，用 1N 中性醋 酸铵溶液定容，即得 0、2.5、5、10、15、20、40g/mL K 标准系列溶液。 7 3、操作步骤： 称取通过 1 毫米筛孔的风干土 5.00 克于 100 毫升三角瓶中，加入 50 毫升 1N 中性 NH4OAc 溶液，塞紧橡皮塞，振荡 30min，用干的普通定性 滤纸过滤。滤液盛于小三角瓶中，同钾标准系列溶液一起在火焰光度计上 测定，记录其检流计上的读数，然后从标准曲线上求得其浓度。 4、结果计算： -1-1 V mg kgg mL W 土壤速效钾（）=待测液（） 式中：V加入浸提液毫升数 W样品烘干重（克） 土壤有机质测定（稀释热法）土壤有机质测定（稀释热法） 一、原理 稀释热法（水合热法）是利用浓硫酸和重铬酸钾迅速混和时所产生的 热来氧化有机质，
