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1、天津医科大学 硕士学位论文 硫酸软骨素酶ABC治疗脊髓损伤时间窗的研究 姓名：柴宏伟 申请学位级别：硕士 专业：外科学神经外 指导教师：朱涛 20090501 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的：建立大鼠脊髓半横断损伤模型，为研究脊髓损伤后的病理、生理变化过 程及治疗效果提供稳定的实验平台，研究硫酸软骨素酶A B C ( C h A B C ) 对 大鼠脊髓损伤修复的影响，探讨C h A B C 治疗脊髓损伤的时间窗。 方法：1 将1 5 0 只成年雄性W i s t a r 大鼠，随机分为6 组制作脊髓半横断损伤模型， 其中对照组只行脊髓损伤不给药物治疗。余按照不同给药时间分为5 个
2、组：伤后立即给药组、伤后l d 给药组、伤后3 d 给药组、伤后7 d 给药组、 伤后1 4 d 给药组，分别于相应时间点予鞘内注射C h A B C 治疗，n = 2 5 。 2 分别在伤前、伤后定期进行B B B 功能评分，连续观察3 个月脊髓损伤 大鼠运动功能恢复情况。分别在伤后1 w 、2 w 、4 w 、8 w 随机处死各组大 鼠3 只，进行H E 染色及免疫组化G F A P 、N G 2 染色，W e s t e r nb l o t 检测 观察伤后脊髓胶质瘢痕组织形态变化情况及硫酸软骨素蛋白聚糖 ( C S P G s ) 表达水平。 结果：1 大鼠脊髓半横断损伤模型成功稳定，
3、伤口整齐，重复性好，损伤程度 恒定，解剖定位准确，功能障碍亦确定，便于进行脊髓损伤的基础理论 研究和神经生物学观察。 2 B B B 评分示伤后3 d 内各组大鼠B B B 评分均低至O 1 分，各组无明显差 异( 胗0 0 5 ) 。随后B B B 评分逐渐增高，脊髓损伤后1 8 w 脊髓功能恢复 较快，8 w 时伤后立即给药组、1 d 给药组、3 d 给药组、7 d 给药组运动评分 高于对照组，差异显著( P 0 0 5 ) 。继续观察至第1 2 w 伤后立即给药组、1 d 给药组、3 d 给药组、 7 d 给药组运动评分明显高于对照组，差异显著( 尸 0 0 5 ) ，1 4 d 给药组
4、与 对照组差异不明显( 胗0 0 5 ) 。 3 H E 染色显示：伤后对照组大鼠脊髓星形胶质细胞大量增生，胶质瘢痕 及空洞形成。治疗组可见到胶质瘢痕比对照组形成较轻。免疫组化显示： 伤后各组脊髓损伤区G F A P 的表达均增高，各组之间没有统计学差异 ( 扮O 0 5 ) ，说明C h A B C 对星形胶质细胞没有直接作用。 4 经N G 2 免疫组化、W e s t e r nb l o t 检测发现：C S P G s 的表达水平伤后即 天津医科大学硕士学位论文 增高，2 w 达到高峰。1 w 时伤后立即给药组、1 d 给药组、3 d 给药组、7 d 给药组C S P G s 明显低
5、于对照组，差异显著( P 0 0 5 ) ，1 4 d 给药组与对照 组差异不明显( 胗O 0 5 ) 。2 w 时伤后立即给药组、l d 给药组、3 d 给药组、 7 d 给药组C S P G s 明显低于对照组，差异显著( p 0 0 5 ) T h eB B B s c o r e st h e n g r a d u a l l yi n c r e a s e dw i t h t h et i m eg o i n go n , a n ds h o wt h a tt h e n e u r o l o g i c a lf u n c t i o nr e c o v e r
6、e dl a s t l yi n1 - 8w e e k sa f t e ri n j u r y , t h ed i f f e r e n c e so f I I I 天津医科大学硕士学位论文 B B Bs c o r ea m o n gt h e s eg r o u p sa r es i g n i f i c a n t , t h ei m m e d i a t e l yt r e a t e dg r o u p ，ld t r e a t e dg r o u p ，3 dt r e a t e dg r o u p ，7 dt r e a t e dg r o
7、 u pa r eb e t t e rt h a nt h ec o n t r o lg r o u p ， t h ed i f f e r e n c eb e t w e e nt h ee a r l yt r e a t e dg r o u p sa n dt h ec o n t r o lg r o u pi ss i g n i f i c a n t O 0 5 ) A f t e r1 2w e e k st h ei m m e d i a t e l yt r e a t e dg r o u p ，l dt r e a t e d g r o u p ，3 dt
8、 r e a t e dg r o u p ，7 dt r e a t e dg r o u pa r eb e t t e rr e c o v e r e dt h a nt h ec o n t r o l g r o u p ，t h ed i f f e r e n c e w a ss i g n i f i c a n t 0 0 5 ) 3 T h eH E s t a i n i n gs e c t i o n so ft h ec o n t r o lg r o u ps h o w e dal a r g en u m b e ro fg l i a lc e l l
9、 s h y p e r p l a s i aa n dt h ef o r m a t i o no fg l i a lS C a ra f t e ri n j u r y T h eg l i a ls e a l “ i nt h et r e a t e d g r o u p sw e r el e s st h a nt h ec o n t r o lg r o u p I m m u n o h i s t o c h e m i s t r ys h o w e dt h a tt h e e x p r e s s i o no fG F A Pi na l lt h
10、 ea n i m a l so f 蝎u r e dg r o u p si n c r e a s e dt h a nn oi n j u r e d a n i m a l s ，b u tt h e r ew a gn os t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c ea m o n ga l lo ft h e s eg r o u p s 0 0 5 ) T h i si n d i c a t e st h a tC h A B Ch a sn od i r e c te f f e c to na s t r o c y t e sc
11、e l l s 4 N G 2i m m u n o h i s t o c h e m i s t r ya n dW e s t e r nb l o ti n d i c a t e d ：C S P G se x p r e s s i o nl e v e l s i n c r e a s e da n dr e a c h e dt h ep e a k2w e e k sa f t e ri n j u r y C S P G se x p r e s s i o nl e v e l so f t h ei m m e d i a t e l yt r e a t e dg
12、r o u p ，ldt r e a t e dg r o u p ，3 dt r e a t e dg r o u p ，7 dt r e a t e d g r o u pw e r es i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a nt h ec o n t r o lg r o u p ( P 0 0 5 ) 4 w e e k sl a t e r , T h el e v e l so ft h ei m m e d i a t e l yg r o u p ，ldt r e a t e dg r o u p ，3 dt r e a t e d g
13、r o u p ，7 dt r e a t e dg r o u pw e r es i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a nt h ec o n t r o lg r o u p ( P 0 0 5 ) 8w e e k sa f t e ri n j u r yC S P G se x p r e s s i o nl e v e l so ft h ei m m e d i a t e l yt r e a t e d g r o u p ，ldt r e a t e dg r o u p ，3 dt r e a t e dg r o u pa n
14、d7 dt r e a t e dg r o u pw e r es i g n i f i c a n t l y l o w e rc o m p a r e dw i t ht h ec o n t r o lg r o u p ( P 0 0 5 ) C o n c l u s i o n s ： 1 T h er a ts p i n a lc o r dh e m i s e c t i o nm o d e li ss u c c e s s f u la n ds t a b l e ，a n dt h ew o u n di s c l e a n ，t h em o d l
15、 ei sr e p r o d u c i b l ea n dt h ei n j u r yg r a d ei sc o n s t a n t ，t h ea n a t o m i c a l 1 0 c a t i o ni Sa c c u r a t e ，t h ed y s f u n c t i o ni Sa l s o c o n f n r n e d I naw o r d ，t h i sm o d l ei S I V 天津医科大学硕士学位论文 s u i t a b l ef o rt h eb a s i cr e s e a r c ho ns p i
16、 n a lc o r d 蜥u r ya n df o rt h en e u r o b i o l o g i c a l r e s e a r c h 2 C h A B Cc a l lp r o m o t et h em o t o rf u n c t i o nr e c o v e r ya f t e rs p i n a lc o r di n j u r y , t r e a t m e n t 埘mC l 础Ca f t e rs p i n a lc o r d 面u r yi n h i b i t s 西i a lS C a rf o r m a t i o na n d h a sb e n e f i c i a le f f e c t so nt h er e p a i ro fn e u r a lc e l l s 3 n l e t h e r a p e u t i c e f f e c to fC h A B CW a
