《硫芥诱导淋巴细胞凋亡作用及其机理初步研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《硫芥诱导淋巴细胞凋亡作用及其机理初步研究（51页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第三军医大学 硕士学位论文 硫芥诱导淋巴细胞凋亡作用及其机理初步研究 姓名：赛燕 申请学位级别：硕士 专业：军事预防医学 指导教师：刘勇 20030501 第三军医大学硕士学位论文 S t u d y o nt h em e c h a n i s mo f a p o p t o s i s i nl y m p h o c y t e s i n d u c e d b y s u l f u rm u s t a r d A b s t r a c t S u l f u rm u s t a r d ，a sb l i s t e r a g e n t ，c a r ld i r e
2、 c t l yi m p a i rt i s s u e a n dc e l l ，l e a d i n gl o c a l i n f l a m m a t i o na n dg e n e r a li n t o x i c a t i o na f t e ra b s o r p t i o n O n eo ft h em o s tt h r e a t e n i n ge f f e c t s o fs u l f u rm u s t a r di sas e v e r es u p p r e s s i o no f t h ei m m u n e
3、s y s t e m ，w h i c h C a l ll e a d ，i nt h ec a s e o fl e s i o n sa n db l i s t e r s ，t oo p p o r t u n i s t i ci n f e c t i o n s ，s e p t i c e m i aa n dd e a t h n l es u p p r e s s i o no f t h ei m m u n es y s t e mi n d u c e db ys u l f u rm u s t a r dh a p p e n se a r l i e ra
4、 n dr e c o v e r sm o r er a p i d l y L y m p h o c y t ei st h em a j o ri m m u n o c y t ea n dp e r f o r m si m m u n o l o g i c a lf u n c t i o n I th a sb e e n f o u n dt Ob es e n s i t i v et os u l f u rm u s t a r d L y m p h o c y t o p e n i ah a sb e e nt h o u g h tt ob et h em a
5、 j o r c a u s e ，w h i c hl e a d st Ot h es u p p r e s s i o no f t h ei m m u n es y s t e ma f t e rs u l f u rm u s t a r de x p o s u r e H o w e v e r ，t h e m e c h a n i s mo fs u l f u rm u s t a r d - i n d u c e d l y m p h o c y t o p e n i a h a sn o tb e e n c o m p l e t e l yc l a
6、r i f i e d T h e r e f o r e ，t h ee f f e c t i v em e a s u r e so fe a r l y d i a g n o s i s ，p r e v e n t i o na n d c u r eh a v en o tb e e nf o u n d O b j e c t i v e ：A p o p t o s i sa n dn e c r o s i sa r et w od i f f e r e n tt y p e so fc e l l d e a t hi n d u c e db y s u l f u
7、rm u s t a r d T h em o d e lo fl y m p h o c y t ee x p o s u r et os u f u rm u s t a r dw a se s t a b l i s h e dt o o b s e r v ea p o p t o s i sa n dt h er o l eo fc a s p a s e 一3o ni t T h ee x p e r i m e n ti sa i m e dt oo f f e rm o r e u n d e r s t a n d i n go nt h er u l eo fi m m u
8、 n o l o g i c a li m p a i r m e n ti n d u c e db ys u l f u rm u s t a r da n dt o e x p l o r eC a s p a s e 一3p r o t e a s ea st h e r a p e u t i ct a r g e t sf u rt h ec o n t r o lo fi n a p p r o p r i a t ea p o p t o s i s i n d u c e d b ys u l f u rm u s t a r di nl y m p h o c y t e
9、M e t h o d ：( 1 ) L y m p h o c y t e i nv i t r oi n t o x i c a t i o nm o d e l ：l y m p h o c y t ew a s s e p a r a t e da n d c u l t u r e df r o m s p l e e no f W i s t a rr a t R e l a t i v ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fE Bc o m b i n e dw i t h D N A ，D N Al a d d e r ，a p
10、 o p t o t i ci n d e xa n dc e l lc y c l ew e r ed e t e c t e dt om a k e t h e ma st h e m a r k e r so fc e l ld a m a g ei n d u c e db ys u l f u rm u s t a r d ；R T - P C R ，W e s t e r nb l o ta n df l u o r e s c e n t q u a n t i t a t i v ea s s a yw e r ee x p l o r e d t od e t e c tm
11、R N A e x p r e s s i o n ，p r o t e i ne x p r e s s i o na n d t h e a c t i v i t yo f c a s p a s e 一3 F l u o r e s c e n tp r o b e l a b e l e dw i t hR h o d a m i n e1 2 3w a su s e dt os t u d y m i t o c h o n d r i a l p o t e n t i a l ；M e a n t i m e ，t h ei n t e r v e n t i o no f t
12、 e t r a p e p t i d e ( A c - D E V D C H O ) o n c y t o t o x i ca c t i o ni n d u c e db ys u l f u rm u s t a r dw a se v a l u a t e d ( 2 ) A n i m a li nv i v oi n t o x i c a t i o n m o d e l ：W i s t a rr a t sw e r e r a n d o m l y d i v i d e di n t oc o n t r o lg r o u pa n de x p e
13、 r i m e n t a lg r o u p T h e s p l e e ni nt h ee x p e r i m e n t a lg r o u p w a sc o l l e c t e da f t e rl d ，3 d ，5 di n t o x i c a t i o n T h e 3 第三军医大学硕士学位论文 m o r p h o l o g yo fs p l e e nw i t hH Es t a i n i n ga n dC a s p a s e 3m R N Ae x p r e s s i o n w i t hR T - P C R w e
14、 r ei n v e s t i g a t e d R e s u l t s ：( 1 ) A p o p t o t i ci n d e x i n c r e a s e dw i t hi n t o x i c a t i o nt i m ee x t e n t i o n ，k e e p i n g h i g l l l e v e l st i l l 2 4 h H o w e v e r , a p o p t o t i ci n d e x o fi n h i b i t o rg r o u pd e c r e a s e dm a r k e d l
15、 y c o m p a r e dw i t hs u l f u rm u s t a r di n t o x i c a t i o ng r o u pa c c o r d i n g l y ( 2 ) D N Af r a g m e n ta n a l y s i s d i s p l a y e dD N A l a d d e rm o r eo b v i o u s l yw i t ht i m ee x t e n t i o ni nc o n t r a s tw i t hD N A l a d d e r d i s a p p e a r i n g
16、o rb e i n g o b s c u r ei nt h ei n h i b i t o rg r o u p ( 3 ) S u l f u rm u s t a r di n t e r f e r e dw i t hc e l l c y c l e ，Sa n dG 2 Mc e l lc y c l ed e c r e a s i n ga n dG d G 0 c e l lc y c l ei n c r e a s i n g ( 4 ) C a s p a s e 一3 m R N A e x p r e s s i o ni n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l ya t3 hc o m p a r e d w i t hc o n t r o lg r o u p ( 5 ) C a s p a s e 。3 w a sa c t i v a t e db ys u l f u rm u s t a r d T h ep r o t e i ne
