抗核抗体检测的质量要求及结果的合理判读(李晓军)-(2)

《抗核抗体检测的质量要求及结果的合理判读(李晓军)-(2)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《抗核抗体检测的质量要求及结果的合理判读(李晓军)-(2)（52页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、抗核抗体检测的质量要求及结果,的合理判读,李晓军,南京军区南京总医院,全军临床检验医学研究所,自身免疫性疾病,自身免疫病(Autoimmune diseases,AID),主要病理基础：,-血清中存在有一种或多种针对自身组织成份的抗体标志,物及自身反应淋巴细胞,致病机制：,-自身抗体和自身反应淋巴细胞在AID的发病过程中起重,要作用,1)体液免疫：由自身抗体介导、过敏反应导致的组,织损伤,2)细胞免疫：自身反应性T细胞介导的细胞毒作用 3)二者共同参与：抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用,（ADCC）,4),自身免疫病的系统受累,AID的类型：,1）器官特异性AID,2）系统性AID（非器官特异性

2、）,AID主要特征：,1）相关的临床症状,2）ESR增高, 血清Ig, 自身抗体、 CIC阳性, 血清补体(C3、C4)活,性降低,3）有病变且病变处存在有与自,身抗原分布相关的免疫活性细胞 或抗体,4）将相关抗原给动物注射时能,重复出类似人的疾病，当被动输 入淋巴细 胞或抗体时可将疾病从 患病动物转移给正常动物,自身免疫病的“病谱”,器官特异性,非器官特异性,桥本甲状腺炎,扩张性心肌炎,自身免疫性溶血性贫血,系统性红斑狼疮,原发性粘液水肿 恶性贫血,特发性血小板减少性紫癜 干燥综合征,甲状腺机能亢进 自身免疫性胃炎,特发性粒细胞减少症,类风湿关节炎,Addisino病 1型糖尿病 重症肌无力

3、 多发性硬化症 脱髓鞘疾病 寻常型天疱疮 类天疱疮,自身免疫性肝炎 原发性胆汁性肝硬化 原发性硬化性胆管炎 溃疡性结肠炎 克罗恩病 自身免疫性肾小球肾炎 肺肾出血综合征,绝经过早（少数病例） 男性不育（少数病例） 交感性眼炎 晶状体源性葡萄膜炎,硬皮病 多发性肌炎/皮肌炎 混合性结缔组织病 系统性血管炎 抗磷脂综合征 药物性狼疮,自身免疫病共同特征,1. 病因不明,2. 女性居多，发病率随年龄增加而增加 3. 有遗传倾向,4. 患者血清中有多种自身抗体或自身反应性致敏淋巴细胞 5. 疾病有重叠现象，即一个病人可同时患一种以上自身免疫,病,6. 病程一般较长，多迁延为慢性,7. 病损局部可发现淋

4、巴细胞、浆细胞、中性粒细胞等浸润 8. 免疫抑制剂治疗可取得一定疗效,自身免疫病主要实验检查,自身抗体,免疫球蛋白 补体,淋巴细胞 细胞因子,自身抗体与临床疾病的关系,天然自身抗体：维持机体内环境稳定,靶抗原：肌动蛋白、肌球蛋白、角蛋白、DNA、胶,原、Ig、细胞因子等，多为IgM型、低滴度；,病理性自身抗体：在免疫风湿病的发病过程中起重 要作用,1）诊断、鉴别诊断：抗dsDNA、抗Sm抗体与 SLE；抗CCP与RA；AoAb与、女性不育、流产有,关者,2）疾病监测、预后判定：抗dsDNA为SLE疾病,活动标志,自身抗体的特性,自身免疫性疾病的重要标志,高滴度存在于自身免疫性疾病患者,与疾病的

5、活动性相关,参与免疫病理性损伤,常检测的自身抗体,抗核抗体（ANA）,抗可提取性核抗原抗体（A-ENA） 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） 类风湿因子（RF）,抗角蛋白抗体（AKA）,抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）,抗核抗体（ANA）,抗核抗体:针对真核细胞（HEp-2、肝细胞）各种核,成分靶抗原的自身抗体的总称。,抗核抗体（ANA） 抗DNA抗体（anti-dsDNA，anti-ssDNA ） 抗组蛋白抗体（histones: H1 , H2A , H2B , H3 , H4 , H2A-H2B） 抗ENA（抗: Sm , nRNP , SSA/Ro , SSB/La, rRNP , Sc

6、l-70 , Jo-1 , PCNA , .）,ANAs,抗非组蛋白抗体 抗着丝点抗体（ anti-CENP -A , B , C ，D，F，G） 抗核仁抗体 抗其他细胞成分抗体（高尔基体，中心体，纺锤体，线粒体，溶酶体， 肌动蛋白，Vimentin，细胞角蛋白，Lamin),1.,2.,3.,4.,抗核抗体谱的分类和命名,以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、 抗Sa 抗体等；,以相关疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS- B 抗体等；,以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体 抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；,以抗原的化学名称分类命名，如抗DNA、抗RNP、 抗组蛋白抗体,

7、抗核小体抗体等。,常规临床诊断ANA种类:数十种,新自身抗体和检测方法:陆续被引进临床实验室,为临床医生提供更多的选择和诊断指标,另一方面也带来一定的困惑?,如何根据患者病情挑选具有诊断价值的最佳自身抗体组合? 如何选择合理的检测方法，并对结果作出正确的判断? 将为患者得到及时准确的诊断和治疗发挥至关重要的,作用!,免疫检验工作者的目的:,广泛向临床医生宣传有关ANA项目及其检测技术的价,值及其限制，,宣传ANA选择的适应征及有效性，从而对检测结果作,出科学合理的判读。,保证检测结果的可靠性和准确性,让临床医生了解各种测定方法的特性,包括方法的精确度、灵敏度、特异性、阳 性预测值和阴性预测值、

8、似然比等，关系 到医生如何准确地选择这些检测项目服务 于患者，并合理地利用资源。,敏感性（sensitivity） 特异性（specificity）,敏感性: 某检验项目对某病具有鉴别、确认的能力,患者阳性结果的百分比,特异性: 某检验项目排除无某病的能力,非患者阴性结果的百分比,敏感性和特异性取决于所选用的cut-off值 某法敏感性越高，特异性就越低，反之亦然,应优选能获得最佳敏感性和特异性组合的cut-off值,敏感性和特异性并不能告诉医生阳性结,果的个体是否患某种疾病，阴性结果的个体 是否不患某种疾病,而临床医生关心的是，ANA阳性者中有 多少是CTD患者；ANA阴性者中有多少不是 C

9、TD患者。PPV和NPV即回答这一问题,阳性预测值（PPV） 阴性预测值（NPV）,PPV：试验结果阳性者中真正患病的概率 NPV：试验结果阴性者中未患病的概率,PPV和NPV是临床试验中对试验有用性的正确评价指标 PPV和NPV受人群患病率的影响：,患病率： PPV ，NPV,理想的ANA试验：,高PPV：大部分阳性结果者是CTD患者 高NPV：大部分阴性结果者不患CTD,ANA检测的选择原则,临床医生选择ANA检测的目的：,1）在有典型症状患者中作出CTD的诊断 2）在症状不确定患者中排除CTD的诊断 3）明确CTD的类别 4）判断病情活动度,ANA检测的选择原则,通常原则:,）首先采用以

10、HEp-2细胞为基质片的IFA作,为筛查实验，以有效地排除CTD的存在,）ANA阳性 进一步检查抗ds-DNA或抗 ENA抗体，以期对CTD作出特异性地诊断。 ）不主张单独用抗ENA抗体作为筛查实验,ANA免疫学测定方法,琼脂双向扩散或对流免疫电泳,-抗ds-DNA，抗Sm，抗U1RNP,Farr试验：抗ds-DNA,间接免疫荧光技术：细胞内抗原自身抗体检测的“金标准” (筛 查),-抗核抗体(ANA)、抗ds-DNA抗体、抗平滑肌抗体,(ASMA)、ANCA等,酶联免疫吸附试验(ELISA):自身抗体确认 免疫印迹免疫斑点技术:自身抗体确认,-ENA多肽抗体谱、AMA(M2/M4/M9)、抗

11、LKM-1、抗LC-1、抗,SLA/LP等,微阵列免疫芯片技术 悬浮芯片技术,IFAANA IFA筛查ANA有效的“金标准”,基质片抗原：鼠肝匀浆组织 敏感性差，不能测出抗SSA,Hep-2细胞 阳性检出率高,Ro60 cDNA转染Hep-2细胞（Hep-2000TM）可显 著提高检测抗SSA/Ro抗体的敏感性,1),IFAANA,如何鉴别假阳性现象(滴度, 核型)? 血清稀释度：,1:40：健康人ANA高达30%；,1:160： 则仅5%,高滴度的ANA阳性结果方有诊断意义,2) 核型:,3) A-ENA:健康人A-ENA常为阴性,Mariz.Arth Rheumatol, 2011, 63

12、: 191,ANA-IFA核型有助,于区别正常人,ANA+和ARD ANA+?,密而细颗粒型,抗核膜抗体(抗板层素抗体),荧光模式:,在核膜区呈现线状荧光, 中心区域荧光强度弱(Hep-,2), 而肝细胞片:中心区域发暗,无荧光, 此点可与核均,质荧光相区别. 靶抗原:,包括60kD, 68kD和74kD 3种蛋白组分,与中间丝相关,以网状形式包被在核内膜的内部.,相关疾病: 慢性活动性自身免疫性肝炎的活动期.,ANA(均质型),荧光模式:,Hep-2细胞: 间期细胞核阳性,呈均匀的荧光; 核仁与,核浆一样呈强度相同的均质荧光; 分裂期染色体阳性,(增强), 亦呈均匀的荧光.,肝细胞片:肝细胞

13、核阳性,呈均匀的荧光, 与Hep-2细胞 的荧光强度一致.,主要相关自身抗体:,抗ds-DNA, 核小体和组蛋白抗体等.,EUROIMMUN,粗颗粒型 抗RNP/Sm抗体 荧光模式: Hep-2细胞:间期时,整个细胞核呈现粗颗粒,但有 时也出现中等到细的颗粒荧光,核仁为阴性;在分裂 期细胞中,浓缩的染色体部位为阴性,而外周区几乎 为均质型、光滑的荧光. 灵长类肝组织切片:细胞核亦呈现颗粒型荧光,核 仁为阴性,荧光强度与 Hep-2细胞相同. 细颗粒型 抗SS-A/SS-B抗体 荧光模式: Hep-2细胞:间期细胞核呈现细颗粒型荧光,核仁 有部分不发荧光。分裂期细胞在染色体以外显示颗 粒荧光,而

14、染色体本身则不发荧光. 灵长类肝组织切片: 肝细胞核及部分核仁可见细 颗粒荧光,细胞浆不发荧光. 在某些细胞（如淋巴细胞、巨噬细胞）中的荧光,反应较强,EUROIMMUN,ANA常见核型与疾病关系,Diagnostic Pathology 2009, 4:1,ANA临床诊断CTD特性,Diagnostic Pathology 2009, 4:1,Arth Rheumat,2002, 47, pp 434444,ANA(+)临床诊断意义,对疾病诊断非常重要 SLE、系统性硬化病,对疾病诊断有一定作用,干燥综合征、多发性肌炎-皮肌炎,对监测预后非常重要,幼年型慢性关节炎、雷诺现象,疾病诊断标准的重

15、要组成部分,药物引起的狼疮、混合性结缔组织病,对疾病诊断、监测预后没有作用,类风湿性关节炎、多发性硬化症、甲状腺疾病、传染病、特发性血小板减少性紫癜 纤维组织肌痛,IFA法检测ANA时应注意的问题,ANA滴度和荧光图谱不能作为判断抗体特异性的标准，结,果阳性时应进一步作特异性抗核抗体项目的检查,IFA限制:,*ANA(-)， 抗ds-DNA(+)， 抗ENA(+) 技术误差,SLE特殊类型,*某些ANA(抗SSA/Ro、抗SSB/La)用IFA难以测出 *Jo-1抗原属于胞浆抗原，IFA检测ANA阴性时不能排,除抗Jo-1的可能,IFA法检测ANA时应注意的问题,如果临床高度怀疑CTD，应同时

16、做ANA和抗 ENA抗体，即使ANA(-) ，也要进行抗ENA 抗体的检测，否则会漏检一些ANA如抗 SSA/Ro、SSB/La或抗Jo-1抗体。,IFA法检测ANA时应注意的问题,由于目前国内缺乏合适的质控品，检测结果在 实验室间很难做到标准化。每个实验室必须规 范化各自的操作规程，确立各自的cut-off值， 使判断标准兼顾到诊断敏感性和诊断特异性的 平衡。应该参加当地或国家的室间质量评价 （external quality assessment，EQA）计划。 目前，国际上已有抗核抗体的标准参考品 结果解释应密切结合其他临床指标,ANA室间结果很难具备可比性 15个国际Lab同时用HEp-2-IFA进行ANA的检 测，所获得的平均变异系数（CV）值如下：,1:40 1:80 室内CV（%） 16.5 13.1 室间CV（%） 50.7 44.3,1:160 12.2 37.9,1:320 12.8 36.0,每个实验室应根据各自情况，建立本室的cut-