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1、 核酸核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 5050TAE Buffer TAE Buffer (pH8.5)(pH8.5) 1010T TB BE Buffer E Buffer (pH8.3)(pH8.3) 1010MOPS BufferMOPS Buffer 组组份份浓度浓度 2 M Tirs2 M Tirs- -醋酸，醋酸，100 mM EDTA100 mM EDTA 配制量配制量 1 L1 L 配制方法配制方法 1. 1. 称量下列试剂称量下列试剂，置于，置于 1 L1 L 烧杯中。烧杯中。 TrisTris 242242 g g NaNa2 2EDTAE
2、DTA2H2H2 2O O 37.237.2 g g 2 2. . 向烧杯中加入约向烧杯中加入约 8 800 ml00 ml 的去的去离子水，充分搅拌溶解离子水，充分搅拌溶解。 3. 3. 加入加入 57.1 ml57.1 ml 的醋酸，充分搅拌。的醋酸，充分搅拌。 4 4. . 加去离子水将溶液定容至加去离子水将溶液定容至 1 L1 L 后，室温保存后，室温保存。 组组份份浓度浓度 890 890 mmM TirsM Tirs- -硼酸，硼酸，20 mM EDTA20 mM EDTA 配制量配制量 1 L1 L 配制方法配制方法 1. 1. 称量下列试剂称量下列试剂，置于，置于 1 L1 L
3、 烧杯中。烧杯中。 TrisTris 108108 g g NaNa2 2EDTAEDTA2H2H2 2O O 7.447.44 g g 硼酸硼酸 5555 g g 2 2. . 向烧杯中加入约向烧杯中加入约 800 ml800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 3. 加去离子水将溶液定容至加去离子水将溶液定容至 1 L1 L 后，室温后，室温保存保存。 组组份份浓度浓度 200 mM MOPS200 mM MOPS，20 mM NaOAc20 mM NaOAc，10 mM EDTA10 mM EDTA 配制量配制量 1 L1 L 配制方法配制方法 1. 1. 称
4、量称量 41.8 g MOPS41.8 g MOPS，置于，置于 1 L1 L 烧杯中烧杯中。 2 2. . 加约加约 700 ml DEPC700 ml DEPC 处理水，搅拌溶解。处理水，搅拌溶解。 3. 3. 使用使用 2 N NaOH2 N NaOH 调节调节 pHpH 值至值至 7.07.0。 4 4. . 再向溶液中加入下列试剂再向溶液中加入下列试剂。 1 M NaOAc1 M NaOAc（DEPCDEPC 处理）处理） 2020 mlml 0.5 M EDTA0.5 M EDTA（pH8.0pH8.0） （DEPCDEPC 处理）处理） 2020 mlml 5 5. . 用用 D
5、EPCDEPC 处理水将溶液定容至处理水将溶液定容至 1 L1 L。 6 6. . 用用 0. 0.4545 mm 滤滤膜膜过滤除过滤除去杂质去杂质。 7 7. . 室温避光保存室温避光保存。 注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变 黑黑时不要使用。时不要使用。 溴乙锭溴乙锭 (10 mg/ml)(10 mg/ml) AgaroseAgarose 凝胶凝胶 组组份份浓度浓度 10 mg/ml10 mg/ml 溴乙锭溴乙锭 配制量配制量 1 100 ml00 ml 配制方法配制方法 1. 1. 称量称量 1 1 g g 溴乙锭溴乙
6、锭，加入到加入到 100 ml100 ml 容器中容器中。 2 2. . 加加入去离子水入去离子水 100100 mlml， 充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭。 3. 3. 将溶液转移至棕色瓶中，室温避光将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存保存。 4 4. . 溴乙锭的工作溴乙锭的工作浓浓度为度为 0.5 0.5 g/mlg/ml。 注注意意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。 配制方法配制方法 1. 1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液 （通常是配制适量的电泳及制胶用的缓冲液 （通常是 0.50.5TBETBE 或或 1 1TAETA
7、E） 。 2 2. . 根据制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当根据制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当 的锥形瓶中的锥形瓶中。 3. 3. 加入一定量的电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的加入一定量的电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的 50%50%容量）容量） 。 注：注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 4 4. . 在锥形瓶的瓶口封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在锥形瓶的瓶口封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后 在微波炉中加热熔化琼脂糖在微波炉中加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾加热过程中，当溶液沸腾 后，请戴
8、上防热手套，小心摇后，请戴上防热手套，小心摇动锥形瓶，使琼脂糖充分动锥形瓶，使琼脂糖充分 熔化。熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注 意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸 腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖 凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须 保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊 不清。不清。 5.
9、5. 使溶液冷却至使溶液冷却至6060左右， 如需要可在此时溴乙锭溶液 （终左右， 如需要可在此时溴乙锭溶液 （终 浓度浓度 0.5 0.5 g/mlg/ml） ，并充分混匀。） ，并充分混匀。 注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时， 请戴好手套。请戴好手套。 6. 6. 将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳 子。凝胶厚度一般在子。凝胶厚度一般在 3 35 mm5 mm 之间。之间。 7. 7. 在室温下使胶凝固（大约在室温下使胶凝固（大约 3030 分钟分钟1 1 小时）
10、 ，然后放置小时） ，然后放置 于电泳槽中进行电泳。于电泳槽中进行电泳。 注： 凝胶不立即使用时， 请用保鲜膜将凝胶包好后在注： 凝胶不立即使用时， 请用保鲜膜将凝胶包好后在 4 4 下保存，一般可保存下保存，一般可保存 2 25 5 天。天。 琼脂糖凝胶浓度与线形琼脂糖凝胶浓度与线形 DNADNA 的最佳分辨范围的最佳分辨范围 琼脂糖浓度琼脂糖浓度 最佳线形最佳线形 DNADNA 分辨范围（分辨范围（bpbp） 0.5%0.5% 1,0001,00030,00030,000 0.7%0.7% 80080012,00012,000 1.0%1.0% 50050010,00010,000 1.2
11、%1.2% 4004007,0007,000 1.5%1.5% 2002003,0003,000 2.0%2.0% 50502,0002,000 6 6Loading BufferLoading Buffer (DNA(DNA 电泳用电泳用) ) 1010Loading BufferLoading Buffer ( (R RNANA 电泳用电泳用) ) 组组份份浓度浓度 3030 mM mM EDTAEDTA 3636%（V V/V/V） GlycerolGlycerol 0. 0.0 05%5%（W/VW/V） Xylene Cyanol FFXylene Cyanol FF 0.05%0.
12、05%（W/VW/V） Bromophenol BlueBromophenol Blue 配制量配制量 500 ml500 ml 配制方法配制方法 1. 1. 称量下列试剂，置于称量下列试剂，置于 500 ml500 ml 烧杯中烧杯中。 EDTAEDTA 4.44.4 g g Bromophenol BlueBromophenol Blue 250250 mmg g Xylene Cyanol FFXylene Cyanol FF 25250 0 mgmg 2 2. . 向烧杯中加入约向烧杯中加入约 200 ml200 ml 的去离子水后，加热搅拌充分溶的去离子水后，加热搅拌充分溶 解解。
13、3. 3. 加入加入 180 ml180 ml 的甘油（的甘油（GlycerolGlycerol）后，使用）后，使用 2 N NaOH2 N NaOH 调节调节 pHpH 值至值至 7.07.0。 4 4. . 用去离子水定容至用去离子水定容至 500 ml500 ml 后，室温保存后，室温保存。 组组份份浓度浓度 1 10 mM 0 mM EDTAEDTA 5050%（V/VV/V） GlycerolGlycerol 0. 0.2 25%5%（W/VW/V） XyleXylene Cyanol FFne Cyanol FF 0. 0.2 25%5%（W/VW/V） Bromophenol B
14、lueBromophenol Blue 配制量配制量 1 10 ml0 ml 配制方法配制方法 1. 1. 称量下列试剂，置于称量下列试剂，置于 1 10 ml0 ml 离心管离心管中中。 0.5 M 0.5 M EDTAEDTA（pH8.0pH8.0） 200200 l l Bromophenol BlueBromophenol Blue 2525 mg mg Xylene Cyanol FFXylene Cyanol FF 2525 mgmg 2 2. . 向向离心管离心管中加入约中加入约 4 4 mlml 的的 DEPCDEPC 处理水后，充分搅拌处理水后，充分搅拌 溶解溶解。 3. 3. 加入加入 5 5 mlml 的甘油（的甘油（GlycerolGlycerol）后，）后，充分混匀充分混匀。 4 4. . 用用 DEPCDEPC 处理处理水定容至水定容至 1 10 ml0 ml 后，室温保存。后，室温保存。
