《基质金属蛋白酶在大鼠慢性阻塞性肺疾病模型气道细胞外基质重塑中的作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《基质金属蛋白酶在大鼠慢性阻塞性肺疾病模型气道细胞外基质重塑中的作用（9页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 论 著 作 者 单 位 ： !#$ 北 京 ， 解 放 军 第 #% 医 院 呼 吸 科 （ 李 红 梅 、 崔 德 健 、 佟 欣 、 马 楠 、 陆 连 荣 、 梁 延 杰 ） ； 军 事 医 学 科 学 院 病 理 科 （ 高 亚 兵 、 崔 雪 梅 、王 德 文 ）基 质 金 属 蛋 白 酶 在 大 鼠 慢 性 阻 塞 性 肺 疾 病模 型 气 道 细 胞 外 基 质 重 塑 中 的 作 用李 红 梅 崔 德 健 佟 欣 马 楠 高 亚 兵 崔 雪 梅 陆 连 荣 王 德 文 梁 延 杰【 摘 要 】 目 的 研 究 基 质 金 属 蛋 白 酶 （ &(） 及 其 组 织 抑 制 剂
2、 （ )*&+!） 在 大 鼠 慢 性 阻 塞 性 肺 疾病 （ ,-.） 模 型 气 道 和 肺 组 织 中 的 表 达 及 其 在 细 胞 外 基 质 重 塑 中 的 作 用 。 方 法 采 用 熏 香 烟 加 气 管注 内 毒 素 法 ， 建 立 大 鼠 ,-. 模 型 ， 观 察 其 气 道 重 塑 的 病 理 改 变 、 肺 功 能 及 血 气 变 化 ； 用 生 化 法 测 定 支气 管 肺 组 织 羟 脯 氨 酸 含 量 ； 用 免 疫 组 化 法 观 察 &+/、 &+0 及 )*&+! 的 蛋 白 定 位 及 表 达 ； 用 逆 转 录 +聚 合 酶 链 反 应 法 测 定
3、&+/、 &+0 及 )*&+!1234 表 达 ； 用 5.5+467 明 胶 酶 谱 学 测 定 支 气 管 肺 组织 &( 酶 活 性 。 结 果 用 熏 香 烟 加 气 管 注 内 毒 素 法 建 立 的 大 鼠 ,-. 模 型 ， 其 病 理 形 态 学 改 变 、 肺功 能 及 血 气 变 化 均 与 人 类 ,-. 的 改 变 相 似 。 ,-. 模 型 组 支 气 管 肺 组 织 羟 脯 胺 酸 含 量 、 支 气 管 黏 膜下 成 纤 维 细 胞 、 淋 巴 细 胞 数 和 肺 泡 巨 噬 细 胞 数 及 以!型 胶 原 为 主 的 细 胞 外 基 质 含 量 显 著 高 于
4、 健 康 对照 组 （ ! 值 均 8 9!） 。 ,-. 模 型 组 &+/、 &+0 及 )*&+! 在 气 道 上 皮 、 成 纤 维 细 胞 、 肺 泡 巨 噬 细胞 、 血 管 内 皮 细 胞 及 部 分 肺 泡 壁 细 胞 表 达 均 明 显 增 强 ， 支 气 管 肺 组 织 &+/、 &+0 及 )*&+! 1234表 达 亦 显 著 增 强 ， $0 &+0 及 /0 &+/ 酶 活 性 亦 显 著 增 高 。 结 论 &( 表 达 增 强 提 示 细 胞外 基 质 降 解 增 加 ， 支 气 管 肺 结 构 破 坏 增 加 。 )*&+! 在 抑 制 &( 活 性 的 同
5、时 ， 促 进 成 纤 维 细 胞 增 生 及胶 原 等 合 成 增 多 ， 是 导 致 细 胞 外 基 质 修 复 和 重 塑 的 重 要 机 制 之 一 。【 关 键 词 】 疾 病 模 型 ， 动 物 ； 金 属 蛋 白 酶 类 ； 细 胞 外 基 质!# $%&# % ()*$+, (#*)&%-$%*#+.)/#/ +. #,*$)0#&1&)$ ()*$+, $#(%2#&+.3 +. 0$%.+0 %4/*$10*+5# -1&(%.)$62+/#)/# $)* (%2#&/ # $%&()*!， +,# -).*/&， 0123 4*&， 56 2/&， 361 7/8*&，
6、+,# 49)()*， , */&:%&，;623 -)/:?()&? % A)B*:/?%:C 5)D*E*&)， 0F) GHI?F $%B*?/J % +F*&)B) !6， K)*.*&LHHHGM， +F*&/【 74/*$)0*】 849#0*+5# ): (; ;? A:B :C 1;DBB:EA:;FGD(（ &(） FG ;? DFAHD I;ADJBB =F(D(（ ,-.） AD; 1:=B(9 :#*%2/ )? ,-. AD;1:=B( H?FJ? HD( (;DLBF(?= L FG;AD;ADJ?DB FG(;FBBD;F:G :C 0K BFE:E:B(DJJ?
7、DAF= :GJ C:A MA ;H: HN(（ ;HFJ） ， DG= IE:(= ;: OP (1:N C:A 9 O ?Q= C:A % HN(9 )? ED;?:B:KFJDB J?DGK( HA :L(AM=， B1E?:J;( :C LA:GJ?FDB HDBB( DG= DBM:BDA1DJA:E?DK( HA J:=A:IEA:BFG :C LA:GJ?FDB BLF:J?1F(;A 1;?:=9 )? IEA(F:G :C &+/， &+0 DG= ;F( F11(F( DG= L AMA( ;ADG(JAFE;F:G+E:B1AD( J?DFGADJ;F:G DGDB(F(
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10、1） E( *)30 3,./,4,2*/+)1 &,.&( +&*/ +&03 ,/ +& ;0（ ?CC$ B !$C */2+,-)1， ! F !$!#） $ !#$%&(# %& 4,/ (.=)*+,0/3 047789:， 77896 */ E&,2& ;*1 20/+(,K=+ +0 +& *+&0./3,3 04*,(4)0E ),;,+*+,0/ +&(0=.& +& *,(E*1 (;0&13;*） $ %& LH703,+,0/ E( ,;K*)*/20/3,K) 40( +& ,/4)*;*+,0/ */(0233， */0/3,K) 40( +&(*,( */(02
11、33 04 +& *,(E*13， ;*1 )*1 */ ,;0(+*/+ (0) ,/ +& *,(E*1 LH7 (;0(0+,/*33； LM+(*2)=)*( ;*+(,M细 胞 外 基 质 是 存 在 于 细 胞 之 间 的 动 态 网 状 结构 ， 由 胶 原 、 蛋 白 聚 糖 及 糖 蛋 白 等 大 分 子 组 成 。 在 细胞 9细 胞 间 及 细 胞 9基 质 间 的 信 号 传 导 、 炎 性 细 胞 浸润 、 肿 瘤 转 移 、 细 胞 增 殖 和 分 化 等 方 面 起 着 重 要 作用 。 以 胶 原 为 主 的 细 胞 外 基 质 在 气 道 壁 过 度 沉 积
12、是慢 性 阻 塞 性 肺 疾 病 （ HI8J） 气 道 重 塑 的 重 要 病 理 改变 ， 是 引 起 气 道 壁 纤 维 化 、 气 流 阻 塞 的 主 要 原 因 之一 。 基 质 金 属 蛋 白 酶 （ 7783） 及 金 属 蛋 白 酶 组 织 抑制 剂 （ %G783） 是 调 节 细 胞 外 基 质 降 解 、 合 成 的 主 要 酶类 #， 本 研 究 通 过 7783 和 %G783 的 基 因 转 录 、 蛋 白定 位 和 表 达 及 7783 酶 谱 学 分 析 ， 探 讨 7783 和%G783 在 HI8J 气 道 细 胞 外 基 质 重 塑 和 肺 气 肿 形 成
13、中 的 作 用 。材 料 与 方 法一 、 动 物 分 组 及 模 型 制 作鼠 龄 为 #6 周 的 二 级 雄 性 N,3+*( 大 鼠 （ 军 事 医 学科 学 院 动 物 中 心 ） 6D 只 ， 体 重 （ 6?! B 6!） .， 随 机 分 为6 组 ， 每 组 #6 只 。#$健 康 对 照 组 ： 二 级 动 物 房 内 饲 养 。6$HI8J 模 型 组 ： 采 用 熏 香 烟 加 气 管 注 内 毒 素法 ， 即 实 验 第 #、 #D 天 经 气 管 注 入 内 毒 素 （ # ;.O;)，P,.;* 公 司 ） 6!.， 次 日 始 熏 AQ（ -O-） 香 烟 共
14、6C ， :D、A、 56各 ! 3， ?A 个 循 环 ；（ 6） 7789: 引 物 ， 上 游 ：D:? 中 华 内 科 杂 志 6!6 年 月 第 D# 卷 第 期 H&,/ a G/+(/ 76?）扫胶，图像分析，表达强度用积分光密度（ !）表示。五、支气管肺组织 4452 活性的测定支气管肺组织蛋白采用 $AB;C 试剂盒油相蛋白提取法提取，考马斯亮蓝 !/ 比色法对所提取的蛋白进行定量。 DED#5&F 明胶酶谱学测定支气管肺组织 4452 酶活性 (。取 6/!G 提取的蛋白与非还原性加样缓冲液（ !9DED、 1/9甘油、 /8/(9溴芬兰、 /8) H;CIJ $A2
15、， +K .87）混合至总体积为 )/!C，上样于含 6 HGIHC 明胶的 6/9聚丙烯酰胺加样孔中， 1/ H 电泳，酶孵育液（ 1/ HH;CIJ L=%C、 ! HH;CIJ %=%C1、 /8/19?AM#(!、 !/ HH;CIJ $A2， +K 08!）孵育，染色，脱色，摄像，扫描，用 ?=N5= 2#6 J#6）UA（ 5= 2#6 J#6）5=%R1（ HH KG）5=R1（ HH KG）D=R1（ 9）健康对照组 7 7, Q ! 1, Q 66 10 Q , ). Q ) , Q ( ,7 Q 6%R5E 模型组 6/ 0. Q ) ), Q 6/ )1 Q . !( Q ) 76 Q 6( ,6 Q ! 值 .W/!)W/6)W6(W.,)W1)#)W(1#注： 6 HH KGX /W6( 5= 检验，% Y /W/6，% Y /W/6； 检验，#% Y /W/6图 ! %R5E 模型组可见小叶中央性肺气肿 KF Z 1/图 %R5E 模型组可见气道壁型胶原大量沉积，并向周围小气道及周围组织延伸 天
