《动物疫病监测的采样技术（修改）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《动物疫病监测的采样技术（修改）（91页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、动物疫病监测的采样技术,目的与意义,在动物疫病监测中，采样方法、采样部位、采样数量和样品质量直接决定监测结果的准确性和监测结论的科学性。因此，对采样人员采样方法、技术都有特定的要求。采样人员必须是兽医技术人员，而且应熟悉采样器具的使用，掌握正确采样方法。本片旨在为从事采样工作的技术人员如何科学采样提供技术指导。,第一节 采样的一般原则与采样方法 第二节 采样器械物品的准备 第三节 血液样品的采集方法及技术要求 第四节 动物活体样品的采集及技术要求 第五节 病死畜禽的解剖与病变组织脏器的采集及技术要求 第六节 样品的记录、保存、包装和运送 第七节 动物采样和运输过程的生物安全 第八节 重大动物疫
2、病采样及运输要求,第一节 采样的一般原则与采样方法（1）,一、采样的一般原则 1. 凡是血液凝固不良、天然孔流血的病、死动物，应耳尖采血涂片，首先排除炭疽，炭疽病死的动物严禁剖检。 2. 采样时应从胸腔到腹腔，先采实质脏器尽量做到无菌，避免外源性的污染，最后采腔肠器官等内容物易造成污染的组织、内容物等。 3. 采取的病料必须有代表性，采取的脏器组织应为病变明显部位。取材时应根据不同疫病或检验目的，采其相应血样、活体组织、脏器、肠内容物、分泌物、排泄物或其他材料。肉眼难以判定病因时，应全面系统采集病料。,第一节 采样的一般原则与采样方法（2）,4. 病料最好在使用治疗药物前采取，用药后会影响病料
3、中病原微生物的检出。死亡动物的内脏病料采取，最迟不超过死后6小时(尤其在夏季)，否则 ，尸体腐败，难以采到合格的病料。 5. 血液样品在采集前一般禁食8小时。采集血样时，应根据采样对象、检验目的及所需血量确定采血方法与采血部位。 6. 采样时应考虑动物福利和环境的影响，防止污染环境和疫病传播，做好环境消毒和废弃物的处理，同时做好个人防护，预防人畜共患病感染。,第一节 采样的一般原则与采样方法（3）,二、采样的种类和时间 采样前，必须考虑采样目的，根据检验项目和要求的不同，选择适当的样本和采样时机是十分重要。应严格按规定时间采样。合理采集样本。,第一节 采样的一般原则与采样方法（4）,1. 当疫
4、病诊断时，采集病死动物的有病变的脏器组织、血清和抗凝血。采集样品的大小及量要满足诊断的需要，以及必要的复检和留样备份。 1)一般情况下，对于采集的常规病料，有临诊症状需要做病原分离的，样品必须在病初的发热期或症状典型时采样，病死的动物，应立即采样。,第一节 采样的一般原则与采样方法（5）,2)采集血液样品，如果是用于病毒检验样品，在动物发病初体温升高期间采集；对于没有症状的带毒动物，一般在进入隔离场后7天以前采样；用于免疫动物血清学诊断时，需采集双份血清监测比较抗体效价变化的，第一份血清采于发病初期并作冻结保存，第二份血清采于第一份血清后34周，双份血清同时送实验室；,第一节 采样的一般原则与
5、采样方法（6）,3)用于寄生虫检验样品，因不同的血液寄生虫在血液中出现的时机及部位各不相同，因此，需要根据各种血液寄生虫的特点，取相应时机及部位的血制成血涂片和抗凝血，送实验室。,第一节 采样的一般原则与采样方法（7）,2. 进行免疫效果监测时，动物免疫后14-20天，随机采集同群动物血清样品30份。 3. 进行疫情监测或流行病学调查时，根据区域内养殖场户数量和分布，按一定比例随机抽取养殖场户名单，然后每个养殖场户按估算的感染率，计算采样数量，随机采取。,第一节 采样的一般原则与采样方法（8）,三、采样数量 1. 诊断时15只(头)病死动物的有病变的器官组织、血清和抗凝血各10份。 2. 免疫
6、效果监测时 每群血清样品应采集30份。 3. 疫情监测或流行病学调查时采集血清、各种拭子、体液、粪尿或皮毛样品等，采样数量可根据动物年龄、季节、周边疫情情况估算其感染率，然后计算应采样品数量。,第一节 采样的一般原则与采样方法（9）,4. 当种群疫病监测净化时， 要制定疫病监测净化方案，按照方案确定的采样次数和采样日期，逐头采样。,第二节 采样器械物品的准备（1）,一、器 械 1. 采样箱、保温箱或保温瓶、解剖刀、剪刀、镊子、酒精灯、酒精棉、碘酒棉、注射器及针头等。 2. 样品容器包括小瓶、平皿、离心管及易封口样品袋、塑料包装袋等。 3. 试管架、玻片、铝盒、瓶塞、无菌棉拭子、胶布、封口膜、封
7、条、冰袋等。 注意：采样刀剪等器具和样品容器须无菌。,第二节 采样器械物品的准备（2）,二、采样记录用品 不干胶标签、签字笔、记号笔、采样单、采样登记表、畜禽标识阅读器等。 三、保存液 阿氏液(A1severs)、30甘油盐水缓冲液、肉汤、PBS液、双抗。以上溶液配制详见附录A。 四、人员防护用具 口罩、防护镜、一次性手套、乳胶手套、防护服、防护帽、胶靴等。,第三节 血液样品的采集方法及技术要求（1）,采集动物血液是采样的一项重要内容，对疫病监测意义重大。采血过程中应严格保持无菌操作。采血前，应用酒精棉对采血部位消毒。采血完毕，局部消毒并用干棉球按压止血。采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥无
8、菌。在采血、分离血清过程中，应避免溶血。几种常用的动物主要采血方法介绍如下。,第三节 血液样品的采集方法及技术要求（2）,一、禽的采血方法 1. 雏鸡心脏采血 左手抓鸡，术者手持采血针，平行颈椎从胸腔前口插入回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。 2. 成年禽心脏采血 成年禽只采血可取侧卧或仰卧保定。 (1)侧卧保定采血 助手抓住禽两翅及两腿，右侧卧保定，在触及心搏动明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的12处消毒，垂直或稍向前方刺人23厘米，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。 (2)仰卧保定采血 胸骨朝上，用手指压离嗉囊，露出胸前口，用装有长针头的注射器，将针头沿其锁
9、骨俯角刺入，顺着体中线方向水平穿行，直到刺入心脏。,第三节 血液样品的采集方法及技术要求（3）,3. 翅静脉采血 在翅下静脉处消毒，手持采血针，从无血管处向翅静脉丛刺入，见有血液回流，即把针芯向外拉使血液流入采血针。 也可保定禽只，使翅膀展开，露出腋窝部，用消毒棉消毒。拇指压近心端，待血管怒张后，用装有细针头的注射器，由翼根向翅方向平行刺入静脉，方向反了？放松对近心端的按压，缓慢抽取血液。采血完毕用棉球按压止血。,第三节 血液样品的采集方法及技术要求（4）,二、猪的采血方法 1. 耳缘静脉采血站立保定，助手用力在耳根捏压静脉的近心端，手指轻弹后，用酒精棉球反复涂擦耳静脉使血管怒张。沿血管刺入，
10、见有血液回流，缓慢抽取所需量血液或接入真空采血管。用棉球按压止血。 2. 前腔静脉采血 (1) 站立保定，保定器保定让猪头仰起，露出右腋窝，从右侧向心脏方向刺人，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血针。 (2)仰卧保定，把前肢向后方拉直。如何操作？是否向上向外一般用装有20号针头的注射器采血，其穿刺部位在胸骨端与耳基部连线上胸骨端旁2厘米的凹陷处，向后内方与地面呈60度角刺入23厘米，当进入约2厘米时可一边刺入一边回抽针管内芯；刺入血管时即可见血进入针管内，采血完毕，局部消毒。,第三节 血液样品的采集方法及技术要求（5）,三、牛、羊的采血方法 1. 牛、羊颈静脉采血 将动物保定，稍抬头
11、颈，于颈静脉沟上13与中13交界部剪毛消毒，一手拇指按压采血部位下方颈静脉沟血管，促使颈静脉怒张，另一手执针头，与皮肤呈45度角，由下向上方刺入，血液顺器壁流入容器内，防止气泡产生。待血量达到要求后，拔下针头，用消毒棉球按压针眼，轻按止血。 2. 牛尾静脉采血： 固定动物，使牛尾往上翘，手离尾根部约30厘米。在离尾根10厘米左右中点凹陷处，先用酒精棉球消毒，然后将采血针针头垂直刺人(约1厘米深)。针头触及尾骨后再退出1毫米进行抽血。采血结束，消毒并按压止血。,第三节 血液样品的采集方法及技术要求（6）,3. 乳房静脉采血：奶牛、奶山羊可选乳房静脉采血，奶牛腹部可看到明显隆起的乳房静脉，消毒后在
12、静脉隆起处，针头向后肢方向快速刺入，见有血液回流，接人真空采血管。,第三节 血液样品的采集方法及技术要求（7）,四、其他动物血液采集 1. 家兔和豚鼠采血，心脏部位约在胸前由下向上数第三与第四肋骨间，用手触摸心脏搏动最强部位，剪毛消毒，将注射器针头由此部位垂直刺入心脏，家兔略有颤动，表明针头已穿入心脏，然后轻轻地抽取，如有回血，表明已插入心腔内，即可抽血；如无回血，可将针头退回一些，重新插入心腔内，若有回血，按压心脏，缓慢抽取所需血量。,第三节 血液样品的采集方法及技术要求（8）,2. 小鼠采血，可以先麻醉，一般取其仰卧姿势，在其锁骨与剑突连线的中点沿胸骨左边缘进针5毫米左右，边刺人边抽吸，即
13、可采血。也可进行尾静脉采血，固定动物并露出鼠尾。将尾部浸在45左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器(刀或剪刀)割去尾尖o3o5厘米，让血液自由滴人盛器或用血红蛋白吸管吸取，。采血结束，伤口消毒并按压止血。 小鼠通常采用眼球摘除法采血。若需反复采血可采用毛细血管眼内眦采血法或断尾采血法。,第三节 血液样品的采集方法及技术要求（9）,五、血液样品的制备 常规血液制备可分为两类，即抗凝血和非抗凝血。 1抗凝血常用作细菌或病毒检验样品 采血前，预先在真空采血管或其他容器内按每10毫升血液加入0.1肝素1毫升或EDTA 20毫克。采集的血液立即与抗凝剂充分混合，防止凝固，但要轻轻混匀以
14、免溶血。也可将血液放入装有玻璃珠的灭菌瓶内，振荡脱纤维蛋白。采集的血液经密封后贴上标签，立即冷藏送实验室。必要时，可在血液中按每毫升加入青霉素和链霉素各5001000国际单位，以抑制血源性或采血过程中污染细菌。,第三节 血液样品的采集方法及技术要求（10）,2非抗凝血 即不加抗凝剂的血液，等血液凝固后析出血清一般用作血清学监测试验。血清分离方法：血液在室温下倾斜放置24小时(防止暴晒)，待血液凝固自然析出血清，或用无菌剥离针剥离血凝块，将试管放在装有2537温水的杯内或37温箱内1小时，待大部分血清析出后取出血清，必要时经1 5002000转分离心5分钟，分离血清。将血清移到另外的小塑料离心管
15、中，盖紧盖子，封口，贴标签，4冷藏。须长期保存时，将血清置于一20冷冻。,第三节 血液样品的采集方法及技术要求（11）,3血片 采取末梢血液、静脉血或心血。 取一滴血液样品，滴在已消毒的载玻片上，另取一片载玻片作推片，将推片自血滴左侧向右移动，当血滴均匀地附着在两片之间后再将推片向左平稳地推移(两片成3045度夹角)，推出均匀的血膜，火焰固定后置于载玻片盒或载玻片架中。,第四节 动物活体样品的采集及技术要求（1）,一、家禽活体的样品采集 1. 家禽咽喉拭子和泄殖腔拭子采集方法 取无菌棉签，插入鸡喉头内或泄殖腔转动3圈，取出，插入离心管中(事先加入1毫升含青霉素、链霉素各3000国际单位pH为7
16、2的PBS)，剪去露出部分，盖紧瓶盖，做好标记。,第四节 动物活体样品的采集及技术要求（2）,2. 羽毛采集方法 拔取受检鸡含羽髓丰满的翅羽或身上其他部位大羽，将含有羽髓的羽根部分按编号分别剪下收集于小试管内，于每管内滴加蒸馏水23滴(羽髓丰满时也可不加)，用玻璃棒将羽根挤压于试管底，使羽髓浸出液流至管口，用滴管将其吸出。,第四节 动物活体样品的采集及技术要求（3）,二、猪活体的样品采集 1. 扁桃体采取方法 从活体采取扁桃体样品时，应使用专用扁桃体采集器：先用开口器开口，可以看到突起的扁桃体，把采样钩放在扁桃体上，快速扣动扳机取出扁桃体放离心管中，冷藏送检。,第四节 动物活体样品的采集及技术要求（4）,2. 腔拭子、咽拭子采集方法 应用灭菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉的分泌物，蘸取分泌物后，立即将拭子浸入保存液中，密封低温保存。常用的保存液有含抗生素的PBS保存液(pH7.4)、灭菌肉汤(pH7.27.4)或30甘油盐水缓冲液。若准备将待检标本接种组织培养，则应保存于含0.5乳蛋白水解液中。一般每支拭子需保存液1毫升。,
