《免疫室sop文件资料》由会员分享，可在线阅读，更多相关《免疫室sop文件资料（59页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、泰山区人民医院制度规范 免疫室SOP文件丙型肝炎病毒抗体检测（酶联免疫法）1、原理：本法采用间接法酶联免疫吸附试验原理。在微孔条上预包被基因重组HCV结构和非结构区，配以酶标记IgG抗体及TMB显色等其他试剂，检测人血清或血浆中的丙型肝炎病毒抗体。2、标本采集与处理2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料
2、管或玻璃试管作为容器。2.4标本处理：血液标本应尽快地送实验室。本试剂使用样品为人血清或血浆，含EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。 2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。2.6标本储存：样品中应无微生物，可在2-8oc储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。 3、试剂与仪器：3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：北京万泰生物药业股份有限公司3.1.2批准文号：国药准字S200100143.1.3包装：96T13.1.3试剂配置： 浓缩洗涤液 50m
3、l1瓶 样品稀释液 12ml1瓶HCV酶标板 812孔或128孔 HCV酶标试剂 12 ml1瓶 HCV阳性对照 0.2ml1支 HCV阴性对照 0.2ml1支 底物液A、B液 各6ml1瓶 终止液 6ml1瓶 自封袋 1个 封版膜 2张 说明书 1份32测定仪器：3.2.1酶标仪： 上海安泰model MT-8583.2.2洗板机： ANALYTECH 8284、操作步骤：41配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。42编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔（空白对照孔只加稀释液不加样品及酶标试剂）其余各孔加入100UL样本稀释液。43 加样：分
4、别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照10微升，轻轻振荡混匀。44温育：用封版膜封版后，置37oc温育60分钟。45 洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。46加酶标抗体：空白对照孔不加 酶标试剂，每孔加入酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀。47温育：置37oc温育30分钟。48洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干49 显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，37oc避光显色30分钟。410终止：每孔加终止液1滴（50微升），轻轻振荡混匀。411测定：10分钟内测定结果，设定酶标仪单波长450 nm或双波长450 nm /600-650 nm测
5、定。用空白孔调零点后测定各孔A值。5：结果判断51目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为丙型肝炎病毒抗体（抗HCV）阳性；无色者为丙型肝炎病毒抗体（抗HCV）阴性。52酶标仪检测：521临界值（CUT/OFF）计算：CUT/OFF=阴性对照孔A均值+0.12。（不足0.02按0.02计算）522阳性判定：样品A值临界值（CUTOFF）者判为抗HCV阳性。(注意初试阳性应重新取样双孔复试)523阴性判定：样品A值临界值（CUTOFF）者判为抗HCV阴性。 6：注意事项：61本品仅用于体外诊断，操作应按说明书严格进行。封版膜不能重复使用，不同批号酶标板、酶标试剂和阴阳对照不可混用，不能
6、与其他厂家试剂混用。62避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂（如84消毒液）的环境下操作。63 使用前请将试剂平衡至室温（平衡30分钟以上）实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即放回2-8oc.未用完的微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封2-8oc保存。过期试剂请勿使用。64加样时必须使用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组分时，用更换加样器吸头和加样槽，以防出现交叉污染。65洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定30-60秒浸泡时间。再洗板结束后，必须立即进行下一步，不可使酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。66结果判定必
7、须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指印或划痕都可能影响板孔的读值。67所有样品、废液和废弃物都应按传染物处理。终止液为硫酸，使用时必须注意安全。68显色时必须加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。69由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测阴性并不排除HCV感染的可能。检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。7：临床意义：检测人血清或血浆中的HCV抗体。适用于血液的筛查及临床丙型肝炎病毒感染的辅助诊断。梅毒螺旋体抗体（酶联免疫法）1、原理：本试剂盒采用双抗原夹心法酶联免疫吸附试验原理。在微孔条上预包被梅毒螺旋体抗体基因重组抗原，配以
8、酶标记抗原及TMB显色剂等其他试剂，检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。2、标本采集与处理2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。2.4标本处理：血液标本应尽快地送实验室。本试剂使用样品为人血清或血浆，含EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。2.5标本接收：接收标本时应
9、检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。2.6标本储存：样品中应无微生物，可在2-8oc储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。 3、试剂与仪器：3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：北京万泰生物药业股份有限公司3.1.2批准文号：国药准字S200100133.1.3包装：96T13.1.3试剂配置： 浓缩洗涤液 50ml1瓶TP酶标板 812孔或128孔 TP酶标试剂 12 ml1瓶 TP阳性对照 0.2ml1支 TP阴性对照 0.2ml1支 显色剂A、B液 各6ml1瓶 终止液 6ml1瓶
10、自封袋 1个 封版膜 2张 说明书 1份32测定仪器：3.2.1酶标仪： 上海安泰model MT-8583.2.2洗板机： ANALYTECH 8284、操作步骤：41配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。42编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）43 加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照100微升，轻轻振荡混匀。44温育：用封版膜封版后，置37oc温育60分钟。45 洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。46加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀
11、。47温育：用封版膜封板后，置37oc温育30分钟。48洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干49 显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，37oc避光显色30分钟。410终止：每孔加终止液1滴（50微升），轻轻振荡混匀。411测定：10分钟内测定结果，设定酶标仪波长于450 nm（建议双波长450 nm /600-650 nm测定）用空白孔调零点后测定各孔A值。5：结果判断51目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为梅毒螺旋体抗体（TP-AB）阳性；无色者为梅毒螺旋体抗体（TP-AB）阴性。52酶标仪检测：521临界值（CUT/OFF）计算：临界值
12、=阴性对照孔A均值+0.18。522阳性判定：样品A值临界值（CUTOFF）者判为TP阳性。(注意:初试阳性应重新取样双孔复试)523阴性判定：样品A值临界值（CUTOFF）者判为TP阴性。 6：注意事项：61本品仅用于体外诊断，操作应按说明书严格进行。封版膜不能重复使用，不同批号酶标板、酶标试剂和阴阳对照不可混用，不能与其他厂家试剂混用。62避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂（如84消毒液）的环境下操作。63 使用前请将试剂平衡至室温（平衡30分钟以上）实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即放回2-8oc.未用完的微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封2-8oc保存。过期试剂请勿使用。64加样时必须
13、使用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组分时，用更换加样器吸头和加样槽，以防出现交叉污染。65洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定30-60秒浸泡时间。再洗板结束后，必须立即进行下一步，不可使酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。66结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指印或划痕都可能影响板孔的读值。67所有样品、废液和废弃物都应按传染物处理。终止液为硫酸，使用时必须注意安全。68显色时必须加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。69由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测阴性并不排除HCV感染的可能。检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。7：临床意义：检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。适用于血液的筛查及临床梅毒螺旋体抗体感染的辅助诊断。乙
