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1、 40-免疫分型教程(1)正常骨髓免疫分型 上图是正常骨髓经CD45、CD71、CD33染色后组成的CD45/SSC、CD71/CD33双参数散点图；通过这两个组合，能够分辨骨髓的正常细胞、检查是否有异常细胞存在、评估细胞的成熟情况。CD45/SSC图中可见：1，CD45强阳性SSC低信号的细胞群为淋巴细胞（褐色细胞群体）；2，中等强度的CD45表达，SSC信号最强的细胞群体为粒细胞（蓝色及红色细胞群体）；3，CD45表达与SSC信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体（绿色细胞群体）；4，CD45阴性，SSC信号最低的有核红细胞和细胞碎片；CD33/CD71图中可见：1，CD33表达最强
2、的单核细胞群体（绿色）；2，粒细胞CD33表达较单核弱，不成熟粒表达CD71，成熟后不表达。3，淋巴细胞、有核细胞和细胞碎片不表达CD33、CD71。CD11B/CD15图可用来评估髓系细胞向单核、粒分化的程度（随着髓细胞成熟，细胞逐步获得CD11B，粒细胞高表达CD15）：1，单核细胞（绿色）高表达CD11B，CD15中等到表达；2，粒细胞（蓝色及橘红色）高表达CD15，蓝色成熟粒CD11B表达较橘红色不成熟粒细胞强，幼稚髓细胞仅表达CD15而无CD11B。3，T、B淋巴细胞不表达CD15、CD11B，NK细胞表达CD11B而无CD15（红色细胞）。4，有核红细胞及碎片不表达CD15和CD1
3、1B。 根据骨髓细胞CD45/SSC图中分布情况设门圈定各类细胞：R1门为成熟淋巴细胞；R2门为正常单核细胞位置；R3门正常粒细胞位置；R4门为幼稚淋巴细胞出现位置；R5门为有核红细胞或细胞碎片位置；R6门为幼稚髓细胞出现位置；白血病细胞通常会在R4、R6两门位置处出现。M0免疫分型M0:急性髓细胞白血病微分化型 原始细胞在光镜下类似L2型细胞,核仁明显,胞浆透明,嗜碱性,无嗜天青颗粒及Auer小体,髓过氧化酶(MPO)及苏丹黑B阳性细胞3%的幼稚细胞表达MPO，较M0多。不表达CD11B，CD15，CD16等。M1:CD11B-/+,HLA-DR+,CD13+,CD33+,CD34+,CD1
4、4+,MPO+,TdT-/+to+/-M2免疫分型CD45/RALS图中细胞分布广泛与M1不同，这是因为M2细胞已进一 步分化幼稚细胞减少，粒细胞增多并与BLAST WINDOWS区域内细 胞相连。因细胞没有明显分群，很难将异常细胞与正常相区分， 故设立多个门进行分析检测其成熟度抗原的表达情况。M2免疫表型与M1类似，HLA-DR，CD33，CD13阳性。上图中可见 幼稚细胞CD33与CD71表达均比成熟粒细胞强。CD13表达强于CD33。M2肿瘤细胞弱表达CD15与CD11B,说明细胞已分化。 CD34表达显著降低。M2肿瘤细胞不表达CD5,CD7和TdT等抗原，如病例伴t(8;21),则
5、经常表达CD19偶表达CD56。一般肿瘤细胞MPO强阳性。偶见形 态为M2并伴t(8;21)，但CD13-，CD33-，CD14-，而MPO+。细胞分布广泛，幼稚细胞较M1少。CD13和CD33阳性，且CD13表达高于CD33。HLA-DR阳性，CD15弱阳性。M2肿瘤细胞伴t（8，21）CD19阳性。M3免疫分型上图为M3V，少颗粒型早幼粒白血病细胞，细胞中颗粒少RALS信号 低而集中，SS座标上出现大量肿瘤细胞。肿瘤细胞大，FS信号强。 通过CD45/RALS双参图可辨别出M3与M3V。下为经典M3多颗粒细胞的 CD45/RALS和SS/FS图。M3与M3V在免疫表型上无区别。M3肿瘤细胞
6、特征性地不表达髓系早期标志物CD34和HLA-DR；部分病例中CD9特征性地阳性，但不是完全特异。CD2在M3与M3V中会出阳性表达，在HLA-DR阴性的病例中，与染色体t(15,17)异常相关。肿瘤细胞CD33表达比正常粒细 胞强与正常单核细胞相似， CD13表达多样。肿瘤细胞不表 达晚期髓细胞分化抗原CD15， CD16和CD11B。肿瘤细胞完全不表达CD15，与正常早幼粒细胞表达CD15相区别；正常早幼粒细胞细胞周期中含高比例S期细胞，而肿瘤细胞中几乎不见细胞周期。肿瘤细胞MPO阳性，上图中MPO与LACTOFERIN双染来区分成熟粒 细胞。肿瘤细胞除表达CD2外，很少表达T或B系抗原。
7、M3肿瘤细胞因其胞浆内多颗粒，细胞具有很强的自发荧光。M3:CD33+,CD13+,MPO+,CD34-,HLA-DR-,CD11b-,CD14-,CD15-,TdT-M4免疫分型典型的M4病例CD45/RALS图中会出现一群异常的单核细胞和一群骨髓幼稚细胞，肿瘤细胞较M0，M1细胞的FS和SS信号增强。有时这两群细胞会相互叠加占据BLAST WINDOWS和成熟单核细胞位置，故难圈出独立成群的肿瘤细胞。对于M4病例一般都设多个门对异常细胞进行分析，且每个异常细胞群根据其成熟度的不同，表型也可能互不相同。本例为M4EO，增多的嗜酸细胞RALS信号与早幼粒相似CD45信号与单核细胞相似，本例中为
8、R4门中紫色细胞。幼稚细胞群表达CD34，HLA-DR，而异常单核细胞则CD34阴性，HLA-DR阳性。幼稚细胞CD33阳性，CD14阴性，而异常单核细胞则为CD33阳性，CD14，CD64阳性。CD64表达如象本图中强阳性表达则为单核细胞特异性标志。M4肿瘤细胞在CD11B/CD15图中会特征性分布如上，存在幼稚细胞及各期的粒细胞及单核细胞。CD2表达与M4EO有很大相关性，可能与16号染色体异常有关。M4/blast population: CD13+,CD33+,CD34+,HLADR+,CD11b-,CD14-M4/abnomal monocytic cell:CD13+,CD33+,CD34-,HLA-DR+,CD11b+,CD14+/-,CD4+/-M5免疫
