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1、1柱色谱分离化合物一、实验目的了解柱色谱的原理，初步掌握柱色谱法分离物质的操作过程和方法。二、实验内容柱色谱分离甲基橙和次甲基兰的混合物。三、实验原理液-固色谱是基于吸附和溶解性质的分离技术，柱色谱属于液-固吸附色谱。当混合物溶液加在固定相（吸附剂）上，由于吸附剂对各组分的吸附能力不同，当流动相流过固体表面时，混合物各组分在液-固两相间分配。吸附牢固的组分在流动相分配少，吸附弱的组分在流动相分配多。流动相流过时各组分会以不同的速率向下移动，吸附弱的组分以较快的速率向下移动。随着流动相的移动，在新接触的固定相表面上又依这种吸附-溶解过程进行新的分配，新鲜流动相流过已趋平衡的固定相表面时也重复这一
2、过程，结果是吸附弱的组分随着流动相移动在前面，吸附强的组分移动在后面，吸附特别强的组分甚至会不随流动相移动，各种化合物在色谱柱中形成带状分布，分别收集即可达到分离混合物的目的。 本实验以中性氧化铝为吸附剂，以乙醇和水为洗脱剂分离含有甲基橙和次甲基兰混合色素。根据各色素受极性吸附剂作用强弱不同，在柱中可观察到不同的色谱带。四、实验方法与步骤1 装柱 在色谱分离柱的底部装少许脱脂棉(约5 mm厚)，用玻棒推至底部，并将其压实，将色谱柱垂直固定在铁架上，然后称取10克氧化铝慢慢倒入柱内，边倒边用橡皮塞或手指轻弹色谱分离柱，使氧化铝充填均匀紧密 1。加毕，用套在玻璃棒上的橡皮塞轻轻敲击柱身，使氧化铝上
3、表面平整，并在上面压上一片圆形滤纸（其直径正好等于色谱柱内径） 。打开色谱分离柱下面的活塞，从柱顶徐徐注入95的乙醇 (洗脱剂)，柱子下面放置50 mL锥形瓶以回收流出的溶剂，当有乙醇从下部流出色谱柱即可使用 2。注意：加入液体时不要破坏氧化铝表面的平整性，不要把滤纸冲起来。2 加样 当柱内乙醇液面刚好降至柱顶氧化铝的滤纸表面时，关上柱子下面的活塞，将含有甲基橙和次甲基兰的酒精溶液l ml用滴管沿柱壁均匀地慢慢加入柱中，并用少量乙醇溶液冲洗柱壁。重新打开活塞，使溶液的液面再次刚好降至柱顶氧化铝的滤纸表面，此时混合溶液已全部进入色谱柱，即可用洗脱剂进行洗脱。 3 洗脱 慢慢加入 95乙醇洗脱液，观察黄色谱带的出现，待黄色谱带被洗出完后，然后改用蒸馏水作洗2脱剂，观察色带的出现，将第二种物质洗出，并用锥形瓶分别收集各色带的流出液。预习思考题：1. 柱色谱分离化合物的原理是什么？2. 洗脱剂是用什么方法选定的？3. 根据分离时是否加压，色谱柱可以分为哪三类？4. 分离用色谱柱用柱子长度如何选择？5. 干法裝柱的关键是什么？6. 色谱柱分离化合物的关键操作有哪些？7. 分离有色化合物应该如何分段接收洗脱液？分离无色化合物应该何接收洗脱液？
