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1、,原位杂交技术(FISH)在HER2检测中的应用,HER2及其检测的临床意义 HER2检测相关指南及指南关于ISH的内容更新 Her2检测常用的原位杂交方法,内容提要,HER2介绍及其检测的临床意义,HER2基因 人类表皮生长因子受体-2基因 Human Epidermalgrowth Factor Receptor-2(HER2) Gene 定位于染色体17q21 编码跨膜受体样蛋白（HER2蛋白）,具有酪氨酸激酶活性 HER2蛋白 分子量185 kDa的糖蛋白: 细胞外区（配体结合区） 跨膜区（传导信号） 细胞内区（激酶活性）,HER2,HER2过表达的结果,正常HER2 表达,HER2
2、基因扩增导致HER2过表达,HER2 过表达导致肿瘤增殖,促进细胞的生长和增殖-肿瘤发生 抑制细胞的凋亡 诱导血管新生 提高细胞运动能力,增强肿瘤的浸润转移作用,Moasser MM.Oncogene,2007.26(46):6577 Freudenbery JA, Wang Q, Katsumata, et al. Exp Mol Pathol.2009.87(1):1,HER2阳性的定义,蛋白水平(过表达): 细胞表面HER2蛋白受体表达大量增加 基因水平(扩增): HER2编码基因于细胞核内拷贝增加,IHC,FISH,HER2状态对乳腺癌的临床重要性,乳腺癌的HER2阳性率约为1525%
3、 对于乳腺癌患者，HER2过表达对早期乳腺癌预后不利；HER2过表达会降低乳腺癌转移/复发患者的存活率 HER2状态也可预测乳腺癌的药物治疗效果，包括 对曲妥珠单抗治疗的反应 对紫杉醇及蒽环类药物治疗的反应 对三苯氧胺的耐药性,Carlson RW, et al. JNCCN 2006:4(Suppl.3):S1S22.,HER2状态评估对于确定患者是否接受抗HER2靶向治疗至关重要,HER2状态对胃癌的临床意义,所有的胃或胃食管结合部癌患者都应在初次诊断时检测肿瘤的HER2状态。 HER2在胃癌中过表达预示更差的疾病结局以及进展性更强的疾病类型 准确的胃癌HER2表达和基因扩增检测结果是进展
4、期胃癌HER2靶向治疗患者筛选和疗效预测的前提 2010年，欧洲和美国先后批准化疗联合使用曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃及胃食管交界癌患者,Kelley JR and Duggan JM. J Clin Epidemiol 2003;56:19. Bang YJ, et al. Lancet 2010;376:687697. Bang YJ, et al. J Clin Oncol 2008;26:Abstract 4526. Gravalos C and Jimeno A. Ann Oncol 2008;19:15231529.,HER2检测指南中对于ISH检测的内容介绍,国内外相关指南,国外
5、指南： ASCO/CAP乳腺癌HER2检测指南（2013） NCCN 乳腺癌临床实践指南（2012） NCCN胃癌临床实践指南（2011） 欧洲胃癌HER2检测指南（2011） 国内指南： 乳腺癌HER2检测指南（2014版） 胃癌HER2检测指南(2011),10,Bilous M et al. Mod Pathol 2003;16:173182. Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118145. Albarello L, et al. Adv Anat Pathol 2011;18(1):5359,IHC为2+的HER2乳腺癌和胃癌患者均应进行IS
6、H复查！,ISH检测流程和判读标准（ASCO-CAP 2007版）,2007版,Arch Pathol Lab Med. 2007;131(1):18-43,ISH检测流程和判读标准（ASCO-CAP 2013版）,2013版 双探针,Arch Pathol Lab Med. 2013 Oct 7. Epub ahead of print,14,中国乳腺癌HER2检测指南（2014版）,HER2检测常用检测的ISH方法,HER2常用检测方法,免疫组织化学 (IHC): 应用抗体检测蛋白过表达是乳腺及胃组织检测HER2状态的首要方式1 原位杂交 技术(ISH): 利用核酸探针检测HER2基因扩增
7、，可用于复检经IHC检测难以确定结果的病例及疑难病例1,1. Wolff AC et al. J Clin Oncol 2007;25:118145.,实验室HER2检测的ISH方法总结,18,原位杂交技术原理,使探针与荧光素标记的特异亲和素之间发生免疫化学反应,最后用荧光显微镜对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。,FISH技术介绍,变性 和 杂交,FISH操作流程,组织固定和处理,组织切片和处理,探 针 制 备,洗 脱,杂 交 液的配制,信号放大或镜检,PathVysion 探针试剂盒,INFORM探针试剂盒,BMC Cancer 2009, 9:1,HER2() HER2(+) HER2(+),FISH探针,22,CISH技术介绍,使用生物素或者地高辛标记的探针进行杂交反应，再用鼠抗生物素抗体和辣根过氧化物酶抗鼠抗体进行免疫结合，最后DAB显色,CISH操作流程：, 预处理 变性和杂交 严格洗涤 免疫显色 衬染和封片 镜下观察和结果判读,HER2基因未扩增 HER2基因扩增,CISH探针,双色银染原位杂交技术（DSISH）,DSISH探针,HER2的ISH检测方法之优缺点,总结,HER2检测对于乳腺癌和胃癌诊疗具有重要意义 IHC2+的HER2乳腺癌和胃癌患者需进一步通过ISH明确HER2状态 选择合适的原位杂交方法检测HER2基因状态,谢谢!,
