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1、科技信息2009 年第 19 期SCIENCE Optical section; Fluorochromine 科教前沿 27 科技信息2009 年第 19 期SCIENCE & TECHNOLOGY INFORMATION （上接第367 页） 80m3h，两孔终孔后，水量基本保持稳定，水质清澈 且基本无压力。右侧T1孔出水后原左侧地板水量明显减小。因此可以 判定该出水点出水与原左侧底部出水为同源水。随后在掌子面上部拱 腰位置进行钻孔，T4孔钻至13m时出水，水量约50m3h，水质清澈。 该孔出水后，原探水孔出水量有所减小，但不明显，T3孔钻至设计深 度基本无水。 随后在右侧原T1探孔上方又
2、钻设探水孔T5，该孔水量 约25m3h，水量稳定。 由探汛情况结合该段9SP203预测分析，该水为 破碎带裂隙水，水流由掌子面右侧流向左侧，由于出水点距离掌子面 还有15m，为了保证工程进度和工期要求，决定先对前面10m进行开 挖施工，在每循环炮眼钻设时，用6m的钢钎在周边布孔探水。 同时对 涌水量进行现场测试，根据涌水量监测情况确定下一步的施工方案。 图5涌水量测试 掌子面开挖后测试结果如图5所示。 根据涌水量监测分析，水量 逐渐减小，水量保持在(40-50)m3/h，这说明涌水补给源不强，但短时间 内排完的可能性不大，采取排放措施，开挖后不会形成较大涌(突) 水。 开挖揭露后在ZK23+6
3、52附近右侧明显可以看到出水点是一条 20cm30cm横向张开断裂，断裂延伸人巷道右侧边墙，深度无法探测。 当开挖至ZK23+668时；该贯穿断裂已完全进入底板以下。 出水点分 散为大面积淋水，水量基本保持不变。因此决定，不采取超前预注浆措 施，在水量不发生异常的情况下，加强排水，继续开挖施工，对淋水采 取后期注浆处理。 5结论和建议 5.1综合运用多种超前地质预报技术，能提高地质预报的准确性， 特别是对断层富水带、岩溶溶洞的预报。 5.2对不同的涌水类型采用不同的处理方法， 可以减少工程造价 和缩短施工工期。 5.3修建长大巷道中开展专项防治水工作， 为巷道的高速优质修 建提供了安全保证。
4、5.4应进一步对超前地质预报技术、堵水方案、材料、工艺进行研 究，不断丰富防治水技术。 责任编辑：张新雷 科 同一样品不同层面的实时扫描成像，进行图像叠加可构成样品的三维 结构图像。它的优点是可以对样品的立体结构分析，能十分灵活、直观 地进行形态学观察,并揭示亚细胞结构的空间关系。 2.6荧光漂白恢复技术 该方法的原理是一个细胞内的荧光分子被激光漂白或淬灭，失去 发光能力，而邻近未被漂白细胞中的荧光分子可通过缝隙连接扩散到 已被漂白的细胞中，荧光可逐渐恢复。 可通过观察已发生荧光漂白细 胞其荧光恢复过程的变化量来分析细胞内蛋白质运输、受体在细胞膜 上的流动和大分子组装等细胞生物学过程。 2.7
5、长时程观察细胞迁移和生长 活细胞观察通常需要一定的加热装置及灌注室，以保持培养液的 适宜温度及CO2浓度的恒定。 目前的激光扫描共聚焦显微镜，其光子 产生效率已大大改善，与更亮的物镜和更小光毒性的染料结合后可以 减小每次扫描时激光束对细胞的损伤,用于数小时的长时程定时扫描, 记录细胞迁移和生长等细胞生物学现象。 3.激光扫描共聚焦显微镜的样品制备技术 3.1取材 组织标本：包括活检标本、手术切除标本、动物模型标本及尸检解 剖标本等， 应在标本离体后立即冰冻切片或贮存于-70冰箱备用， 以充分保存组织的抗原性。 细胞标本：根据培养的细胞特性分别采取不同的方法。纤维细胞、 粘液癌细胞等贴壁生长的细
6、胞只需将玻片插入培养液即可收集到理 想标本；某些细胞只能在培养液中生长，则必须将培养液经过沉淀离 心涂片法处理。 3.2固定 固定的目的是使构成组织细胞成分的蛋白等物质不溶于水和有 机溶剂，并迅速使组织细胞中各种酶降解、失活，防止组织自溶和抗性 弥散，保持组织细胞的完整性和所要检测物质的抗原性。 固定方法有 浸入法、灌注法、AMEX（改良的冰冻置换法）、微波固定等。 常用的固定剂包括如下几种。 （1）醛类固定剂：双功能交联剂，使组织之间相互交联，保存抗原 于原位，其特点是对组织穿透能力强，收缩性小，是常用的固定剂。 （2）非醛类固定剂：如碳化二亚胺、二甲基乙酰胺、二甲基辛酰胺、 对苯醌等，适用
7、于多肽类激素的组织固定，可与戊二醛或多聚甲醛混 合使用。 （3）丙酮及醇类固定剂：适用于免疫细胞化学染色的固定剂，其作 用是沉淀蛋白质和糖，对组织的穿透性强，保存抗原的免疫活性较好， 可与冰醋酸、乙醚、氯仿、甲醛等混合使用。 3.3封片 盖玻片与载玻片之间用甘油与PBS混合液封片， 甘油具有抗荧 光淬灭的作用。 对于活细胞， 则可使其悬浮于相应的溶液中，直接滴 片和封片，立即观察，不加上述封片剂。 3.4其他制备要求 3.4.1载玻片、盖玻片：载玻片厚度在0.81.2mm，表面光洁、厚度 均匀，无明显自发荧光。 盖玻片的厚度通常为0.17mm左右。 3.4.2组织切片或细胞标本不能太厚， 并且
8、应避免细胞重叠或杂 质掩盖。 4.激光扫描共聚焦显微镜的日常管理与维护 4.1严格按照操作规则使用， 避免因使用不当造成损坏。 4.2为保持良好工作状态，延长使用寿命，工作环境应保持清洁、 干燥、远离辐射源。每次使用后，要做好清洁工作，及时清洁目镜、物镜 等容易污染的光学部件。 4.3系统应设立专门房间， 安装在防震台上， 工作间内要安装空 调， 抽湿及防尘装置。 无论仪器是否工作， 最好使其环境始终保持在 221的恒温。 4.4注意保护仪器的光纤， 防止被挤压， 仪器常用的零配件及专 用工具由专门人员负责保管。 4.5仪器工作间必须常年保持清洁、卫生。 4.6使用者必须培训合格后， 在管理人
9、员的指导下， 方可上机操 作。 【参考文献】 1White J.G. et al. Confocal microscopy comes of ageJ. Nature(London), 1987, 328:183-184. 2Brakenhoff G.T. et al. Three dimensional imaging in fluorescence by confocal scanning microscopyJ. Micros,1989,153(2):151-159. 3李楠,尹岭,苏振伦.激光扫描共聚焦显微术 M.北京:人民军医出版社,1997. 4王春梅，黄晓峰，杨家骥，陈志南.激光
10、扫描共聚焦显微镜技术 M.西安：第 四军医大学出版社，2004. 5Carol L., Wymer Alison F., Beven Kurt Boudonck and Clive W. Loyd. Confocal microscopy of plant cells.J. In confocal microscopy methods and protocols.1999: 103-130. 6Paddock S W. Confocal laser scanning microscopyJ. Biotechniques,1999,27 (5): 992-996,998-1002,1004. 7Bahlmank,Jakobss,et a1.4Pi -confocal microscopy of live cellsJ. U la microscopy, 2001,87(3):155-164. 作者简介：韩卓（1980），女，辽宁锦州人，硕士，工程师，主要从事生化分 析类大型精密仪器的使用及管理。 责任编辑：汤静 科 科教前沿 28
