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1、光学显微镜,细 胞 生 物 学,王 懿,光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信息的光学仪器。,主要内容,1.光学显微镜的主要部件及其数值参数,2.显微镜的光轴调节,3.几种显微镜的介绍,5.口腔上皮细胞的观察,4.使用显微镜的注意事项,显微镜,1,2,3,4,5,6,7,8,开关,光亮度调节旋钮,1.1 显微镜的照明,1.光学显微镜的主要部件及其数值参数,显微镜的照明按其照明光束的形式，可分为“透 射式照明”和“落射式照明”两大类。透射式照明适用 于透明或半透明的被检物体，绝大多数生物显微镜属于此类照明法；落射式照明则适用于非透明的被检物体，因光源
2、来自上方，故又称“反射式照明”。,1.2 聚光器,1.光学显微镜的主要部件及其数值参数,聚光器使来自光源的光线放大，并聚成光束透过样品射入物镜，聚光器由聚光镜和孔径光阑两部分组成。有时制造商会在聚光器的下方加上一个蓝色滤光片。,聚光镜,孔径光阑,滤色片,光轴中心调节螺杆,1.3 物 镜,1.光学显微镜的主要部件及其数值参数,因为所观察的物体表面相距较近，通常也叫接物镜。显微镜的质量主要取决于物镜，因此物镜是显微镜各组件中最为重要的光学部件。,1.光学显微镜的主要部件及其数值参数,根据物镜前透镜与盖玻片之间的介质不同，将其分为：,干燥系物镜：物镜与盖玻片之间以空气为介质。,水浸系物镜：物镜与盖玻
3、片之间以水为介质。,油浸系物镜：也叫油镜，物镜与盖玻片之间通常以香柏 油为介质， 此类物镜的外表面常标有“oil” 字样。 注：油镜在用完之后须立即擦拭，否则容易污染物镜， 影响观察,1.3 物镜,1.3 物 镜,1、平场物镜,2、放大倍数,3、机械筒长无限大，盖片有无皆可,4、油浸系物镜,5、数值孔径,1.光学显微镜的主要部件及其数值参数,数值孔径是显微镜极为重要的参量，大小通常都直接标刻在显微镜的物镜表面，它的大小将直接决定显微镜的光学能力。,计算方法：,数值孔径（numerical aperture，NA）：也叫 “镜口率”或“开口率”，简称N.A.值。, :孔径角,:介质折射率,N.A
4、.=sin（/2）,1.4数值孔径,由10100 N.A.逐渐增大,1.4数值孔径,在孔径角无法改变时，增大介质折射率可增大N.A.,分辨率：分辨物体两点最短距离的能力，R值越小分辨能力越大。,计算方法：,1.光学显微镜的主要部件及其数值参数,1.5 分辨率,提高方法：,R ：最小分辨距离 ：光线的波长 N.A.：物镜的数值孔径,R=0.61/N.A.,B：用镜油做介质，增大N.A.,A：在光源处加上蓝色或蓝紫色滤片，减小波长,人眼：0.2mm 显微镜：0.2m 电子显微镜：0.2nm,1.6 目镜,1. 光学显微镜的基本结构和主要部件,目镜（Eyepiece）：其作用是把物镜放大的实像 （中
5、间像）再放大一次，并把物像映入观察者的眼中， 实质上目镜就是一个放大镜。,因为显微镜的分辨能力是由物镜的数值孔径所决 定的，目镜只是起放大作用。因此，尽管目镜可将所 观察影像再次放大，但它仍无法看出物镜不能分辨出 的结构。,2. 显微镜的光轴调节,在显微镜的光路系统中，光源、聚光器、物镜和目镜的光轴必须处在同一直线上，不然很难达到最佳的观测效果。 光路系统中物镜和目镜的位置固定无须调整，因此，光路的合轴实为聚光器和光源灯的调中,2. 显微镜的光轴调节,(1) 转动聚光器升降旋钮使聚光器升至顶点位置，将载物台也升到顶点,(2)打开电源开关。,(3)向右旋转镜座上的视场光阑，在视野中可见边缘模糊的
6、视场光阑图象 。,2. 显微镜的光轴调节,(5)微降聚光器，至视野光阑的图象清晰聚焦为止。,（6）用聚光器的两个调中螺杆推动聚光器，使缩小的视场光阑图像调至视场中央。,（7）开放视场光阑，使多边形的周边与视场边缘相接。若不相接可反复调试几次。,（8）将聚光器恢复到最高位置。,5,6,7,3. 几种显微镜的介绍,明视野显微镜（brightfield microscope，BF）：也 叫明视场显微镜。这类显微镜在日常工作中的使用率 最高。,明视野显微镜的主要特征是以标本的颜色及投射 率为基础，标本通常需要染色才便于观察，当然缩小 光阑或上下调节聚光器（减小光亮度）也可达到观测 的目的。,4.1明视
7、野显微镜,根据丁达尔效应原理设计的一种在黑色背景条件下观察 标本的显微镜。,不让直射光线进入物镜的镜头，而是先让直射光线经过暗 视野聚光器后改变途径，使其斜向射向被检物体。,能观察到明视野下看不到的极其微小的物体，可判断物质 颗粒的存在与否。,在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光图像，并非物 体的本身，所以只能看到物体的存在和运动，不能辨清物体的 细微结构。,3. 几种显微镜的介绍,4.2暗视野显微镜,(1)将显微镜聚光器调到最高位置，用低倍镜对好焦距。 (2)取下目镜，从镜筒中观察并调节光阑的大小，使其与镜筒中所见物镜的视野相等。 (3)用厚黑纸剪制中央挡光板。 (4)将中央挡光板放在滤光
8、片框架上，开大光阑进行样品观察。 a光圈孔径 b滤光片直径,3. 几种显微镜的介绍,4.2暗视野显微镜的制作,(1)把暗视野聚光器装在显微镜的聚光器支架上。 (2)选用强的光源，但又要防止直射光线进入物镜，所以一般用显微镜灯照明。 (3)在聚光器和标本片之间要加一滴香柏油，目的是不使照明光线于聚光镜上面进行全反射，达不到被检物体，而得不到暗视野照明。 (4)进行中心调节，使聚光器的光轴与显微镜的光轴严格位于一直线上。 (5)选用与聚光器相应的物镜，调节焦距，操作方法与普通显微镜相同，找到所需观察的物像。,4.2暗视野显微镜的制作,3. 几种显微镜的介绍,剑水蚤,相差显微镜是一种将光线通过透明标
9、本细节时所产生的光程差（即相位差）转化为光强差的特种显微镜。,3. 几种显微镜的介绍,4.3 相差显微镜,3. 几种显微镜的介绍,4.3 荧光显微镜,3. 几种显微镜的介绍,4.4 视频显微镜,将传统的显微镜与摄象系统或者电脑相结合。,3. 几种显微镜的介绍,4.5 解剖显微镜,4. 使用显微镜的注意事项,（2）观察显微镜必须两眼齐睁，两手并用。,（1）拿取显微镜时，必须右手握住镜臂，左手托住镜座，不可单手提，以免部件脱出。,（3）注意不让水及药品沾污镜头或镜台，万一沾上应立即擦净，以防锈蚀。目镜、物镜上如有灰尘，应用拭镜纸擦净，其他部件可用绸布擦拭，切勿口吹、手摸或用其他物品擦拭。,4. 使用显微镜的注意事项,（4）调节粗、细准焦螺旋时都不应作单方向的过度旋转，以免压碎玻片，损伤物镜。,（5）显微镜用毕后，降下载物台，取下玻片标本，转动物镜转换器，使两个低倍物镜呈八字形对准载物台,5. 口腔上皮细胞的观察,实验步骤： 1、在一张干净的载玻片上滴一滴清水。 2、清水漱口后，用牙签在口腔内侧轻轻刮几下。 3、将蘸有口腔上皮的牙签在这滴清水中涮几下，然后将水在载玻片上涂匀，面积不要过大，占载玻片的1/2即可。 4、待水干后显微镜观察。,6、作业,绘10倍或40倍镜视野中口腔上皮细胞图,绘图：,Thank you！,
