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1、非酒精性脂肪性肝病兔脂肪肝程度与肝组织硫化氢浓度的关系谭华炳 1 谢杏榕 李 芳 胡 波 朱德文 2 李金科 3摘要 目的 研究非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）兔脂肪肝程度与肝组织硫化氢（H 2S）浓度的相关性。方法：40 只日本大耳白兔随机分为重度 NAFLD 组（重度组）、轻度 NAFLD 组（轻度组）、对照组。重度组给予高脂饲料 160 克/ 兔天，轻度组给予高脂饲料 80 克/兔天 + 普通饲料 80 克/兔天，对照组给予普通饲料 160 克/ 兔天。饲养至 10 周开始重度组每周肝脏 CT 检测了解 NAFLD 程度，至 13 周重度组达到重度NAFLD，终止实验。饲养前耳中动脉采血
2、 5ml 于肝素管中，离心后保存于 20的冰柜中待检。实验结束腹主动脉抽血 5ml 于肝素管中，离心后保存于20的冰箱中待检。全部血浆按照设备、试剂操作常规检测实验前后甘油三酯（triglyceride, TG）、胆固醇（totol cholesteral, TC）。肝组织匀浆检测肝组织 H2S 浓度。胱硫醚-裂解酶（cystathionine-lyase, CSE）免疫组织化学染色、HE 染色，光镜下观察肝脏组织形态学改变。结果： TC、 TG：饲养前重度组、轻度组、对照组 TC、TG 比较无显著差异。饲养后重度组 TC、TG 分别为 32.121.25、6.022.12mmol/L，轻度组
3、 TC、TG 分别为 18.344.10、4.392.23mmol/L，与饲养前比较有非常显著差异（P0.01） 。饲养后重度组 TG、TC 高于轻度组，比较有非常显著差异（ P0.01） 。 肝组织 H2S 浓度：重度组、轻度组肝组织 H2S 明显下降，重度组与对照组比较有非常显著差异（P0.001） ，轻度组与对照组比较有非常显著差异（P 0.01） ；重度组与轻度组比较，有显著差异（P0.05） 。 肝脏病理学：重度组重度 NAFLD，轻度组轻度中度NAFLD，对照组正常肝脏。CSE 免疫组织化学染色 CSE 阳性细胞轻度组强于正常组，重度组强于轻度组。结论：NAFLD 兔脂肪肝程度与肝
4、组织 H2S 浓度负相关，可以通过基金项目：湖北省教育厅科技项目（编号：D20102104） 。湖北医药学院 2010 年学生科研项目。作者单位 442000 湖北十堰 湖北医药学院附属人民医院感染性疾病科。作者简介：谭华炳，男（1963.10- ） ，学士，主任医师，从事感染性疾病临床工作。2：湖北医药学院学生。3 通讯作者：李金科，男（1964.） ，副教授，从事感染性疾病临床工作。Email: . 电话： 0719-8637659脂肪肝程度负向推测肝组织 H2S 浓度。肝组织存在 CSE 表达代偿性增强。关键词 脂肪肝，非酒精性；程度；硫化氢，肝组织；关系The Relationship
5、 of the degree of Nonalcoholic Fatty Liver Disease in Rabbits Between Hydrogen Sulfide Concentration in the Liver Tissue Tan Huabing, Xie Xingrong, Li Fang, et al. Department of Infectious disease, Peoples Hospital of Hubei medical college. Shiyan city 442000, ChinaAbstract Objective: The relationsh
6、ip of the degree of nonalcoholic fatty liver disease in rabbits between hydrogen sulfide concentration in the liver tissue. Methods: 40 Japanese white rabbits were randomly divided into severe NAFLD model group (severe group), mild NAFLD model group (mild group), blank control group (control group).
7、 Severe group given high fat diet 160 g/rabbitDay, mild group given high fat diet 80 g/rabbitday and normal diet 80g/rabbitday, and control group was given normal feed 160 g/rabbitday. Feeding to 10 weeks, liver CT test to understand the extent of NAFLD in severe group Weekly, to 13 weeks in the sev
8、ere group to severe NAFLD, terminate the test, the 13 week feeding period. Ear artery before feeding 5ml blood in heparin tube, centrifuged stored at -20 in the freezer to be tested. At the end of the experiment, abdominal aortic blood 5ml in heparin tube, centrifuged stored at -20 in refrigerator t
9、o be tested. All plasma in accordance with the equipment, reagents, experimental operation of routine testing before and after triglyceride (TG), cholesterol (TC). Detection of liver tissue H2S concentration in liver tissue. Observed morphological changes of liver tissue in light microscope (HE stai
10、ning, CSE immunohistochemistry). Results: TC, TG: keeping the former, the TC and TG were no significant difference in group A, group B and C group. After keeping, group A and group B compared with the feeding before there was a significant difference (P0.01). After feeding TG and TC in group A highe
11、r than the group B, there was a significant difference compared (P0.01). H2S concentration in liver tissue: Group A and group B significantly decreased in liver, Group A and group C there was a significant difference (P0.001), group B and group C there was a significant difference (P0.01). Liver pat
12、hology: Group A of severe NAFLD, group B of mild to moderate NAFLD, group C of normal liver. CSE immunohistochemistry, staining positive cells in mild group than normal group and severe group stronger than the mild group. Conclusions: NAFLD rabbit degree of fatty liver and liver concentrations of H2
13、S negative correlation, and degree of fatty liver by negative speculation H2S concentration in the liver tissue. There CSE expression in liver tissue compensatory increase.Keywords: Fatty liver disease, Nonalcoholic; Degree; Hydrogen sulfide, Liver tissue；Relationship非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liv
14、er disease, NAFLD）是指以肝实质细胞脂肪变性为病理特征，无过量饮酒史，又除外其他肝病的临床综合征，其病理类型包括单纯性脂肪肝，脂肪性肝炎（NASH）及 NASH 相关肝硬化，后者可发展为肝癌 1-3。随着生活方式的改变，NAFLD 在我国的发病率急剧增加，已成为日益严重的社会问题。已有研究证明内源性硫化氢（H 2S）参与肝硬化的发病过程 1,2。内源性 H2S 在NAFLD 发病中的作用，特别是肝组织 H2S 与 NAFLD 的关系，国内外未见报告。本课题通过高脂饲料饲养建立不同程度 NAFLD 动物模型，观察不同程度 NAFLD 动物模型肝组织内 H2S 浓度变化，并探讨其机
15、理。1 材料和方法1.1 一般材料 40 只日本大耳白兔（ 雌雄各半，月龄相似），体质量 2.20.2 kg，湖北医药学院动物实验中心提供（批号：No.00006546 ）。实验地点：湖北医药学院临床医学研究所，湖北省十堰市实验动物中心（实验设施使用证明号：No. 00008391） 。普通饲料由湖北医药学院动物实验中心提供。高脂饲料由湖北医药学院动物实验中心按实验配方配制成成品使用（配方：86普通饲料2胆固醇6蛋黄6猪油） 。实验用胆固醇购自北京双旋生物培养基制品厂（批号：2009.07.15） 。猪油由市售板油自行炼制而成。蛋黄粉由市售鸡蛋自行制作。TG、TC 检测试剂为瑞士 Roche/
16、Hitache公司原装进口试剂。1.2 实验设备 Olympus DP-70 显微摄影系统（日本奥林巴斯公司产品） 。全自动生化检测仪（瑞士产，Roche/Hitache7600 ） 。肝组织 H2S 检测应用北京大学生理学系相关设备及试剂进行检测。1.3 实验模型的建立1.3.1 动物分组与饲养：兔购入普通饲料饲养观察 1 周，无不良反应后，将 40 只兔随机数字法分为 3 组。重度 NAFLD 模型组（重度组：14 只）：每兔每天高脂饲料160g。轻度 NAFLD 模型组（轻度组：13 只）：每兔每天高脂饲料 80g +普通饲料80g。空白对照组（对照组：13 只）：每兔每天普通饲料 160g。上午 9 时、下午 5 时各组分别投入一半饲料。全部动物单笼、单兔喂养，自由饮水。建立高脂血症致重度NAFLD 动物模型、轻度 NAFLD 动物模型、空白对照动物模型
