《氯化1-十六烷基-3-甲基咪唑对泥鳅胚胎的毒性效应》由会员分享，可在线阅读，更多相关《氯化1-十六烷基-3-甲基咪唑对泥鳅胚胎的毒性效应（11页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 离子液体C16 mimCl对泥鳅胚胎及仔鱼的毒性研究学院名称： 专业名称： 年级班别： 姓 名： 指导教师： 2河南师范大学本科毕业论文河南师范大学本科毕业论文离子液体C16 mimCl对泥鳅胚胎及仔鱼的毒性研究摘 要 本研究以泥鳅的胚胎及仔鱼为试验材料，选择胚胎发育的五个不同时期（囊胚期、原肠胚中期、神经胚期、尾芽期和仔鱼孵出期）为开始处理时间，探讨了离子液体C16 mimCl的毒性作用。结果表明：随着C16 mimCl的浓度增加，泥鳅胚胎的孵化率下降，畸形率上升，具有明显的剂量效应关系；随着C16 mimCl的浓度增加，泥鳅仔鱼死亡率上升，处理组的仔鱼体长均短于对照组，具有明显的剂量效应
2、关系。结论：C16 mimCl对泥鳅胚胎及仔鱼的发育，有明显的抑制、致畸、致死作用，表现出明显的毒性作用。这可为C16 mimCl的合理使用提供依据。关键词 C16 mimCl，泥鳅，胚胎发育，毒性 Study on Toxicity of C16 mimCl on the Embryos and Larvae of loach （Misgurnus anguillicaudatus）Abstract In this paper, we used the embryos and larvae of loach（Misgurnus anguillicaudatus ）for the test m
3、aterials, choiced five different embryonic development periods ( Blastula stage, Mid-gastrulation, Neurula stage, tail bud stage and larval fish hatched period) as the beginning of the processing time, studied the toxicity effect of C16 mimCl on loach. The results showed：With the increase in the con
4、centration of C16 mimCl, the hatching rates of loach embryos were declined and meanwhile its abnomal embryos rates were increased, had obvious dose - effect relationship. With the increase in the concentration of C16 mimCl, the mortality ratio of loach larvae were increased. And the treatment groups
5、 were shorter than the control group, with significant dose - effect relationship. Conclusion: The Ionic Liquid (IL) of C16 mimCl had inhibited the development, teratogenic, lethal effect on the loach embryos and larvae, showing obvious toxicity. Therefore, it is necessary to provide a scientific ba
6、sis for the reasonable application amount of. C16 mimCl.Keywords C16 mimCl; Misgurnus anguillicaudatus; Embryonic development; Toxicity前 言离子液体(ILs)是一类完全由离子组成的室温下呈液态的新型化学试剂，因其不挥发、不易燃和热稳定等优势，具有广阔的应用前景，曾被认为是环境友好的“绿色产品” 1,2。虽然离子液体无挥发性因而不会造成大气污染，但大部分离子液体是水溶性的，在合成和应用过程中，它们很可能通过诸如偶然的泄漏事件、化学工业的污水排放等途径进入地表水和
7、地下水，从而对环境特别是水环境产生潜在的威胁3,4。对一些离子液体对发光细菌、大型蚤、斑马鱼和淡水蜗牛的毒性效应的研究发现，离子液体毒性的决定性因素是阳离子，毒性随阳离子取代基碳链的增长而增加5-7。因此，检测水体中C16 mimCl的指标具有重要的现实意义。泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)为鲤形目、鲤形亚目、鳅科中的鳅属，分布较广，易于在实验室饲养；具有抗污能力强、对外源物质反应灵敏等特点；在毒性试验研究中，是理想的水生生物试验材料8。本研究选用泥鳅的胚胎和仔鱼为试验材料，进一步探究了C16 mimCl的毒性影响旨在判断其对水生生物可能造成的危害，为有关生态风险评
8、价提供参考依据。1 材料与试剂1.1 实验材料泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus） 购于新乡市鸿达市场，体重2230g，体长1317cm，健康，性成熟个体。1.2 实验试剂氯化1-十六烷基-3-甲基咪唑（1-hexadecyl -3-methylimidazolium chloride；英文别名：C16MIMCl；分子式：C20H39ClN2；分子量：343.01；纯度：99%）,购自上海成捷化学有限公司。实验用水为曝晒3天以上的自来水，同时用增氧机增氧，pH在7.0左右，DO5mg/l。使用时，用四层纱布过滤处理。1.3 实验器材 奥林巴斯光学显微镜、解剖镜、柯达数码
9、相机、12cm培养皿若干、小吸管、烧杯、量筒等。2 实验方法2.1受精卵的制备 在生殖季节，选取性成熟雌雄泥鳅。雌雄泥鳅的选择参考文献9-11。选择卵巢轮廓明显外观呈纺锤形的雌性泥鳅10尾,背部肌肉注射鱼用绒毛膜促性素(HCG) 800IU/ 尾；雄性泥鳅5尾，注射剂量减半。1014 h 后,轻压雌鳅腹部,立即将卵收集于不同的培养皿中,干法受精11,12。用干净毛巾擦干体表水，将雌鳅卵挤入培养皿中，并立刻进行雄鳅挤精，经羽毛搅拌约1 - 3分钟，使精液和卵粒混匀。2.2实验设计首先参照泥鳅成体的预试验结果，得到其成体的24hLC50为2.53 mg/l；在此基础上，设计本实验的处理组浓度。实验
10、共分六组，包括五个处理组和一个空白对照组，处理组浓度依次为0.81 mg/l、0.54 mg/l、0.36 mg/l、0.24 mg/l、0.16 mg/l，每组均设三个平行。实验容器采用直径122cm的培养皿，每皿加入相应溶液100 ml。由于泥鳅的卵为粘性卵，所以直接采集在培养皿中；每个培养皿中留100枚发育正常卵，其余剔除。实验温度约23 ，光暗比为168 。试验采用静水换水法13，每日更换一次试验溶液，及时剔除死亡个体。处理分别开始于胚胎的囊胚期、原肠胚中期、神经胚期、尾芽期和仔鱼孵出期(泥鳅的胚胎发育分期的确定参照文献9,12-14)，利用解剖镜连续观察其发育状况并及时拍照、记录。处
11、理组的前四组在孵化出仔鱼后终止实验，第五组（仔鱼孵出期）处理48h后终止实验。在第五组中，挑取体长相近、健康状况良好的仔鱼，每个培养皿内放20尾，试验卵黄囊吸收后每天上、下午各投喂一次蛋黄粉。孵化出仔鱼后的第三天，选取对照组的体长相近、健康状况良好的仔鱼放入培养皿中，每皿加入相应处理液100 ml，各放仔鱼20尾，处理48h后终止实验。观察记录指标主要包括：胚胎发育进程中各组孵化率及畸形率（如死亡个体同时存在畸形，则计入死亡）、仔鱼的死亡率、体长、外部形态特征及行为反应等，并计算出相应的EC50或LC50、安全浓度。2.3数据统计分析所有数据均采用SPSS16.0软件进行单因素方差分析（One
12、-Way ANOVA），用最小显著差数法（LSD）进行多重比较，同时还利用了Excel 2003进行分析作图，数据结果用平均数标准差表示。显著性差异以p值表示，p 0.05（*）表示差异显著；p 0.01（*）表示差异极显著。C16 mimCl对泥鳅仔鱼的半致死浓度（LC50）的计算方法:采用改进寇氏法(Karber) 8,15，该法要求：每个试验组动物数要相同；各组剂量要按等比级数分组；最小剂量的反应率（死亡率）p 0.2，最大浓度反应率（死亡率）p 0.8时，方能得到精确的结果。计算公式如下：lgLC50=Xm-i(p-0.5) S(lgLC50)= ipq/n 式中：m-lgLC50 q
13、-存活率 i -相邻两浓度组之对数浓度差值 p-各浓度组死亡率总和 Xm-最大浓度的对数值 n-每组动物数 p死亡率(以小数表示) S(lgLC50)-标准误差算得lgLC50 1.96 S(lgLC50)，求反对数可得到LC50值及95% 可信限范围。安全浓度的计算公式：按Turabell 公式Sc = 48hLC50 0.3/ (24hLC50/48h LC50) 2 求出安全浓度16-18。3 实验结果3.1 C16 mimCl对泥鳅胚胎孵化率、畸形率的影响3.1.1囊胚期开始处理图1 C16 mimCl对泥鳅胚胎孵化率、畸形率的影响（囊胚期）Fig.1 Effect of C16 mi
14、mCl on the hatching rate and abnomal embryos rate of loach embryos(Blastocyst stage)在囊胚期，用离子液体C16 mimCl处理泥鳅胚胎，以观察记录C16 mimCl对泥鳅胚胎发育的影响，结果如图1所示。与对照组比较，随着C16 mimCl的浓度增加，胚胎孵化率下降，浓度为0.24 mg/l、0.36 mg/l、0.54 mg/l、0.81 mg/l的处理组显著下降（p 0.01），具有明显的剂量效应关系；同时，C16 mimCl对泥鳅胚胎有明显的剂量致畸效应关系，胚胎畸形率随C16 mimCl的浓度增加而上升，
15、浓度为0.24 mg/l、0.36 mg/l、0.54 mg/l、0.81 mg/l的处理组变化极显著（p 0.01），其致畸的半数有效浓度（EC50）为0.437 mg/l。其胚胎的主要致畸症状表现有：体态异常，如弯体、弓背或弯尾等；卵黄吸收异常，如卵黄膨大、崩解等；胚体浑浊或自行解体等（图版）。3.1.2原肠胚中期开始处理图2 C16 mimCl对泥鳅胚胎孵化率、畸形率的影响（原肠胚中期处理）Fig.2 Effect of C16 mimCl on the hatching rate and abnomal embryos rate of loach embryos (Mid-gastrulation stage）在原肠胚中期开始处理, 结果如图2所示。与对照组比较，浓度为
