《大挑作品正文格式要求.》由会员分享，可在线阅读，更多相关《大挑作品正文格式要求.（8页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、大挑作品正文格式要求1. 标题为标准三号黑体字，居中；有副标题者，副标题另起，前面加破折号，字体为小三号黑体2. 小标题一般单独占行，前空两个汉字字符，所有级别小标题均用标准四号加粗楷体字3. 正文用四号楷体字，1.25倍行距4. 参考文献：英文文献用五号Times New Rome，中文文献用五号楷体标题副标题理科：1.一级标题（一级小标题用标准四号加粗楷体字）1.1二级标题（其余小标题用四号加粗楷体）1.1.1三级标题1.1.1.1四级标题正文（正文用四号楷体字，1.25倍行距）参考文献1 Chen G, Ito Y, Imanishi Y, et al. Photoimmobilizat
2、ion of sulfated hyaluronic acid forantithrombogenicityJ. Bioconjugate Chem ,1997, 8 : 7307342刘建源. B-干扰素及其临床应用J. 微生物学免疫学进展, 2000, 28(3): 91-94文科：一、一级标题（所有级别小标题均用四号加粗楷体字）（一）二级标题1.三级标题（1）四级标题示例：细胞因子载体药物对HeLa细胞凋亡的长效诱导活性1. 论文标题用标准三号黑体字，居中；有副标题者，副标题另起，前面加破折号，字体为小三号黑体。论文标题由作者自定，标题须与申报书保持一致。1. 论文一律用计算机打印，纸张
3、大小为A4；上下边距为2.5cm；左边距为3.0cm，右边距为2.5cm。2. 页脚需设置页码，页码采用五号黑体字，加粗，居中放置，格式如：1，2，3。3.关燕清 彭仕娟 陈文晓 杨鑫华 欧敏雅 张荷花 钟炼敏删去（华南师范大学生命科学学院，广州 510631）删除摘要：四号楷体，加粗采用光化学固定化方法将干扰素（IFN-）、肿瘤坏死因子（TNF-）共固定化在12孔聚苯乙烯培养板(PSt)上。无血清培养子宫颈癌（HeLa）细胞，通过动态细胞计数跟踪、倒置显微镜观察，研究细胞因子药物对HeLa细胞凋亡诱导作用的长效活性。结果表明，共固定化干扰素和肿瘤坏死因子能显著诱导HeLa细胞的细胞凋亡，在1
4、8天内，细胞发生了典型的细胞凋亡，最高抑制活性可达94.12%,未见细胞有重新生长的现象。关键字：同“摘要”光固定化 人重组肿瘤坏死因子- 重组人干扰素- 子宫颈癌细胞子宫颈癌正文，四号楷体，1.25倍行距（HeLa）是常见的妇科恶性肿瘤之一，全世界每年约有50万新发子宫颈癌，在中国约有13万，居妇科恶性肿瘤第一位。在临床上常见的宫颈癌治疗方法有手术治疗，药物治疗和物理治疗。但化学药物和放射药物的选择性不高，它们既能抑制和杀伤肿瘤细胞，也可损伤体内正常组织和细胞，在治疗中出现明显的毒副作用；而物理疗法，如激光、冷冻、电灼等治疗较多出现活动性渗血，造成下腹隐痛不适，出现阴道流液甚至感染等副作用，
5、给病人带来极大的生理上和心理上的痛苦。 目前，寻求降低治疗毒副作用、减轻病人痛苦、提高疗效的抗癌药物和治疗方法是肿瘤研究工作者的主要目标。干扰素(IFN)是诱导细胞产生的具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的一类蛋白质。经过30多年的临床研究和应用,已证明它是一种重要的广谱抗病毒、抗肿瘤治疗药物。肿瘤坏死因子（TNF）是迄今发现的抗癌作用最强的细胞因子。IFN与TNF协同抗肿瘤，可在一定程度上减轻TNF的毒副反应，我们的前期研究也证明了两者的协同作用抑制率明显高于单独使用任何一种细胞因子的抑制率，同时降低了单一细胞因子的剂量。高分子载体药物具有缓释、长效等优势，已成为新型药物的发展方向之一。利用光
6、化学固定法可以将各种多肽、酶、生长因子、蛋白质等接枝到生物医用高分子材料表面，制备出具有各种活性、各种用途的生物材料。Ito 已经利用光固定法成功地将生长因子1参考文献标注、硫酸盐处理的透明质酸2、肝磷脂3、热敏聚合物 4 、促红细胞生成素5、-半乳糖衍生物6、pullulan7固定在各种材料表面上，并进行体外活性研究。研究表明，固定化生长因子比游离状态的生长因子的传递信号作用时间长1，光固定后的促红细胞生成素仍然具有刺激细胞活性，且其活性比游离状态的高5 。我们曾经做过共固定化(TNF-+ IFN-)药物诱导HeLa细胞凋亡六天的研究，结果表明，固定药物诱导第五天即达到92的癌细胞抑制率，而
7、游离药物第三天出现抑制高峰后，到第五天，癌细胞抑制率已经下降到41。在前期研究的基础上，本研究将两种细胞因子共同偶联12孔组织培养聚苯乙烯基板，通过18天的体外诱导培养，对固定药物的长效性及失效期做进一步研究。1材料与方法1.1 材料来源重组人干扰素-购自珠海丽珠生物工程制药厂，重组人肿瘤坏死因子-购自上海赛达生物药业有限公司，二甲基甲酰胺（DMF）、N-（4-叠氮苯甲酸基）琥珀亚酰胺购自sigma公司。12孔组织培养板为BIOFIL公司产品。 RPMI medium 1640、胰酶为GIBCOBRI公司产品。新小牛血清购自杭州四季春生物工程材料研究所。人子宫颈癌细胞(HeLa细胞系)由中山医
8、科大学动物中心提供，经本实验室传代培养。1.2 方法1.2.1 子宫颈癌细胞HeLa细胞株继代培养细胞培养于RPMI 1640培养液（含10的新小牛血清、青霉素0.03mg/ml，链霉素0.05mg/ml，pH7.27.4），370C，5%CO2培养箱中。传代培养至对数生长后进行实验。 1.2.2 光固定化生物材料制备参照文献9制备光活性IFN-与TNF-。将光活性IFN-和TNF-加入12孔聚苯乙烯（PSt）培养孔内，并置于冰箱里4干燥后，在紫外灯(4w) 2cm下处照射15min。利用二甲基甲酰胺叠氮基十分活泼的特点，将细胞因子固定在PSt材料薄膜上。光固定化后用PBS(-) (pH7.4
9、)溶液反复洗涤基板，直至PBS(-)溶液蛋白紫外吸收为零。 1.2.3 HeLa细胞生长抑制的长效性研究用含有胰蛋白酶0.25%（w/v）和EDTA 0.02%（w/v）的PBS（-）消化HeLa细胞，用血清培养基及无血清培养基洗涤细胞数次，制备成1106cell/ml的细胞悬液。各取1.5ml细胞液于已共固有药物的培养板和没有药物的培养板（做空白对照），培养细胞。为提供营养，每6天补充0. 5ml无血清培养基模拟体内环境，供给细胞必要的营养。每48h显微观察、记录和拍摄细胞的生长状况。并用血球计数板计算活细胞数量。重复实验三次。2 结果与分析（正文内容省略，不再列举）3 讨论TNF-与IFN
10、-是细胞因子网络中的重要组成部分，具有强大的抗肿瘤作用。并且IFN-对TNF-具有显著的协同效应，主要表现在如下几个方面：促进肿瘤坏死因子的诱生；增加靶细胞表面肿瘤坏死因子受体的数目，提高靶细胞对肿瘤坏死因子的敏感性10，11。两种细胞因子在临床上已用于治疗各种恶性肿瘤，但大剂量全身用药会产生毒副作用，降低剂量又难以在局部达到有效的抗癌效果，因而，寻求不同细胞因子之间协同抗肿瘤作用成为目前研究的焦点。在本研究中，我们采用光化学固定法将两种细胞因子共同接枝到聚苯乙烯材料上，制备出具有抗肿瘤活性的固定化TNF-与IFN-。其中图1的结果表明，细胞因子的各种剂量（20100ng/well）对于HeL
11、a细胞都有不同程度的抑制效应，而在低剂量20ng/well时抑制作用极其显著，抑制率为82。因而，我们选用20ng/well做为共固定剂量，并对共固定药物进行18天的长效性研究。由图2，我们可以直接观察到药物诱导6天到18天HeLa细胞的形态学变化情况。结果表明，HeLa细胞出现了典型的细胞凋亡现象，并且随着时间的延长，展现出早期凋亡到晚期凋亡的变化过程，这从形态学的角度证实了固定化药物的长效活性。固定化药物的长效活性也可从图3中得到印证。由图3可知，共固定化药物（20ng/well）对HeLa细胞生长有抑制效应，并且抑制效果持续18天，在第18天达到抑制顶点，抑制率为94.12。实验中发现，
12、第611天出现细胞数目的小波动，我们认为是由于新的培养基补充，在一定程度上改变细胞生长环境而使细胞数目有微回升。Ito等认为固定的活性因子可避免被细胞内吞、消耗，保证与细胞表面受体长时间相互作用，从而起到提高活性因子的活性，延长活性因子的作用时间的作用8。我们认为共固定化两种细胞因子亦可通过避免细胞的内吞、消耗作用而保持持续的抑制癌细胞增殖的效果。综上所述，我们认为是TNF-与IFN-经光共固定化制成高分子药物后，两种细胞因子表现出显著的抑制宫颈癌HeLa细胞体外生长的作用，诱导HeLa细胞凋亡，使细胞数量显著下降，抑制作用长达18天并未见细胞成长。经固定有TNF和IFN的生物材料，可以进一步
13、研制一种具有抗肿瘤活性的宫颈药帽，戴在人类子宫颈上，直接与宫颈癌细胞表面接触发挥药效。这种载体药物经临床应用后，可望成为一种理想的治疗宫颈癌的靶向药物，将为子宫颈癌的临床提供了一种新的治疗手段。 参考文献四号楷体，加粗1Ito Y, Chen G Imanishi Y. Artificial juxtacrine stimulation for tissue engineeringJ. Biomater Sci PolymEdn ,1998, 9: 879890 英文文献用五号Times New Rome,中文文献用五号楷体2Chen G, Ito Y, Imanishi Y, et al.
14、Photoimmobilization of sulfated hyaluronic acid forantithrombogenicityJ. Bioconjugate Chem ,1997, 8 : 730734 3Ito Y , Hayashi M. and Imanishi Y , Gradient micropattern immobilization of heparin and its interaction with cellsJ, Biomater Sci Polym Edn 2001, 12: 367378 4Liu H, Ito Y. Gradient micropatt
15、ern immobilization of a thermo-responsive polymer to investigate its effect on cell behaviorJ. Biomed Mater Res , 2003, 67A : 14241429 5Ito Y, Hasuda H, Yamauchi T,et al. Immobilization of erythropoietin to culture erythropoietin-dependent human leukemia cell lineJ. Biomaterials,2004, 25: 22932298 6Kang IK, Kim G. J. Co-culture of hepatocytes and fibroblasts by micropatterned immobilization of-galactose derivativesJ. Biomaterials ,2004, 25: 42254232 7Hirokazu H, Hyeong K, Inn-Kyu K,et al. Synthesis of ph
