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1、海 南 大 学 毕 业 论 文（设计）题 目：东寨港红树林吸血蠓的物种多样性学 号： 20120303310016 姓 名： 罗玉凤 年 级： 植物保护一班 学 院： 环境与植物保护学院 系 别： 植物保护 专 业： 植物保护 指导教师： 李加慧 完成日期： 2016年 5 月 17 日 东寨港红树林吸血蠓的物种多样性摘 要 红树林是生长在热带、亚热带海岸潮间带或河流入海口的木本植物群落，是适应陆地与海洋过渡带的一种特殊森林类型。由于其独特的海陆过渡特性，红树林具有极大的社会、经济、生态价值。红树林作为重要的海岸湿地类型是国际上湿地生态保护和生物多样性保护的重要对象。吸血蠓是一类微小型昆虫，隶
2、属双翅目, 蠓科。有吸血习性的蠓侵袭人畜，传播疾病，作为病原体的宿主，是一类重要的医学昆虫。采用传统的形态学分类特征对吸血蠓进行鉴定极易混淆,更难进行地理分布与遗传多样性分析,近年来迅速发展的分子鉴技术为解决吸血蠓遗传及鉴定等问题提供了有效的手段。本论文综合利用网捕、人诱和灯诱的方法对海南东寨港红树林的吸血蠓类进行系统采集，基于形态共成功鉴定出6种库蠓，包括棒须库蠓Culicoides clavipalpis、环基库蠓Culicoides circumbasalis、霍飞库蠓Culicoides huffi、尖喙库蠓Culicoides oxystoma、帛琉库蠓Culicoides peli
3、liouensis 和Culicoides ornatus 种团；系统研究了6种库蠓翅的色斑类型、翅脉和翅室的异同，并根据翅的特征编写了检索表；此外，成功测定了6种库蠓的DNA条形码基因COI的基因序列。该研究为吸血蠓类昆虫的分子鉴定奠定了基础，科为蠓类昆虫的防治提供理论依据。关键词：吸血蠓；形态鉴定；分子鉴定；DNA条形码；红树林Abstract Mangrove is growth in tropical and subtropical coast intertidal zone or river mouth of woody plant community, is to adapt to
4、 the land and ocean transition zone is a kind of special forest types. Because of its unique sea-land transition characteristics of mangrove is of great social, economic and ecological value. Mangrove as an important coastal wetland types are international wetland conservation and biodiversity prote
5、ction of important objects. Vampire midge is a kind of small insects, diptera, midge. Midge affect human and animal blood sucking habits, disease transmission, as the host of pathogens, is a kind of important medical insects. Using traditional morphological classification feature of vampire midge co
6、nfusing verification, harder to geographical distribution and genetic diversity analysis, in recent years the rapid development of molecular learning techniques to solve the vampire midge genetic provides an effective way and the problem of identification. Comprehensive utilization of the trap, this
7、 paper induced and trap method to the port of Hainan Dongzhaigang mangrove vampire midge systematically collected, based on morphology were successfully identified six midge, including Culicoides clavipalpis, Culicoides circumbasalis, Culicoides huffi, Culicoides oxystoma, Culicoides peliliouensis a
8、nd Culicoides ornatus group;System studied the 6 types of library midge wing spots, vein and wing rooms, as well as the similarities and differences of and according to the characteristics of the wings to write the retrieval table; In addition, the successful determination of 6 kinds of library of m
9、idge DNA barcode COI gene sequences of genes. The study of blood-sucking insects like midge, laid the foundation of molecular identification of midge insect provide theoretical basis for the prevention and control.Key words: vampire midge；morphological identification；molecular identification；DNA bar
10、codes；mangrove forest目 录1前言12吸血蠓的介绍22.1吸血蠓的形态特征22.2吸血蠓的生活习性22.3吸血蠓的危害32.4吸血蠓的防治33材料与方法4 3.1仪器与设备43.2实验材料43.3标本采集43.4标本的制作43.5标本的鉴定53.6基因组DNA提取53.7DNA条形码基因的PCR扩增63.7.1PCR反应条件 63.7.2 PCR产物检测及测序 74 结果与分析74.1东寨港红树林吸血蠓类昆虫的的物种多样性74.2东寨港吸血蠓类的分类检索表84.3 吸血蠓的DNA条形码114.3.1PCR扩增及电泳产物检测 114.3.2红树林蠓科昆虫的COI基因的DNA条
11、形码序列 124.3.3 序列比对结果 145结论与讨论155.1结论155.2讨论15致谢17参考文献18III1前言 我国现知吸血蠓类共有3属413种，分布于全国各省区。其中细蠓属有3个亚属；刺蠓亚属为热带滨海地区的蠓类，全世界共有8种，其中7种分布于巴布亚新几内亚、澳大利亚、印度和坦桑尼亚。1种分布于我国海南三亚（亚龙湾）全蠓亚属和细蠓亚属虽说我国南北皆有，但全蠓亚属30种多数分布于我国古北界省区内，甚至在海拔3500m以上的阿尔金山上也有高山荒漠的特有种群1。细蠓亚属我国已知有病9种，多见于南方，其中5种是海岛和滨海地区的蠓种。湖北武当山仍然是这两个亚属的交汇区,这里既有广布川、鄂等地
12、区的郧县细蠓、又有长尾细蠓和原蠓亚属的白浪细蠓。从数量而言，西北地区细蠓不仅蠓种多而且密度也高2。库蠓属广布于世界各地，也是蠓科中最大的吸血蠓属,。我国是拥有库蠓最多的国家。其中有典型的古北界蠓种如雪翅库蠓和兴安库蠓只见于东北三省和西藏高原，虽是古北区广布蠓种但也见于东洋界内，如在我国既是东北林区优势蠓种，同时也出现于广西和四川；而异域库蠓虽是广布于两界的蠓种，但在我国，尚只见于东部季风区。尖喙库蠓除新疆、甘肃、青海尚无记录外，北自黑龙江，南抵台湾、海南，西抵西藏察隅，聂拉木皆有。原野库蠓遍布我国各省区，是我国分布最广的蠓种。我国蠓科昆虫的分布特点是鄂豫交界地带是东洋界和古北界蠓类种群的交汇带
13、；吸血蠓类中，细蠓多见于西北荒漠地区，蠛蠓是南方湿润地区的优势种群。库蠓种类繁杂，南北方各有不同优势种群。总之北方蠓类群落构成的种群较简单，而优势种突出；南方蠓类群落构成的种群复杂，优势种不很突出3。2吸血蠓的介绍2.1吸血蠓的形态特征蠓类是全变态双翅目昆虫，各发育阶段均有其显著的形态特征，除具有双翅目昆虫的基本形态外，这些特征在不同亚科和不同属间均有不同。成虫头部近球形。复眼发达，呈肾形。雄蠓两眼相邻接，雌蠓两眼距离较远。触角丝状，分15节。在触角基部之后有单眼1对。口器为刺吸式。中胸发达，前、后胸较小，胸部背面呈圆形隆起。有翅一对，静止或叮刺时，相叠平置于腹部背面。翅短宽，翅上常有斑和微毛
14、，其大小、颜色、位置等为分类依据。体长多数为1-5mm，少数更微小者短约0.7mm，或较大型者长约7mm，体表有毛，呈黑色、褐色或棕色，或黑白相间。足细长。腹部10节，雌蠓有尾须1对;雄蠓的第9、10腹节转化为外生殖器。卵的形状多数为一端稍细一端钝圆的梭形，长约0.34mm，卵壳表面光滑或有纹、突。幼虫细长形，蠕虫状。除细蠓外，头部有角化的头壳，内有具齿的咽和发达的大颚。胸部3节，腹部9节4。2.2吸血蠓的生活习性雌蠓吸血，而雄蠓只吸食植物汁液为营养。蠓科种类繁多，嗜食性广泛，各亚科间食性有别，在不同的种类有一定的倾向性，有的种类嗜吸人血，有的种类嗜吸禽类或畜类血。绝大多数种类的吸血活动是在白
15、天、黎明或黄昏进行。但常见的勒蠓属、库蠓属和拉蠓属，刺吸哺乳类的血液为主，有少数刺吸鸟类血液。蠓吸血一般没有严格的选择性，但有的种类也有倾向性，如陈旧库蠓等主要吸牛、马、猪的血，孝库蠓主要吸家禽的血;台湾拉蠓主要吸人的血;也有的蠓种刺吸禽血等。这些吸血雌蠓须吸足血后，卵巢方能充分发育。勒蠓、拉蠓在白天吸血;库蠓通常在晨、昏吸血。交配时，雄蠓成群飞舞，雌蠓加入婚舞求偶结对后，离群完成交配。 幼虫期生长发育的场所称为滋生地，雌虫选择滋生地一般以有机物质丰富的荫凉、潮湿的处所。成蠓平时多栖息于以草坪、树林、竹林、杂草、洞穴等避风和避光处，当温度、光线适宜，无风晴天，在草坪、田野、树林、溪边常有成群的蠓群舞。库蠓属成虫往往在日出前和日落后活动最频繁，而勒蠓属和拉蠓属则在天亮后活动较频繁。在阴天和无风天蠓活动更为频繁。2.3吸血蠓的危害蠓科昆虫有的可播授花粉或猎食其他昆虫，有的可
