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1、 分类号：Q933 单位代码：10389 密 级： 学号：1091735福建农林大学硕士学位论文福州市内河水域浮游生物种群多样性研究 学 科 门 类：理 学 一级学科名称：生物学 二级学科名称：微生物学研 究 方 向：真菌学与分子遗传学 研 究 生：张书田 指 导 教 师：刘 泓 教授 郑 武 博士 完 成 时 间：二O一二年十月Classified code: Q933 University code: 10389Secret degree: Student number: 1091735Dissertation for masters Degree of Fujian Agricultur
2、e and Forestry UniversityThe diversity research of plankton in two rivers in Fuzhou Discipline Class：Science Subject：Biology Specialty：Microbiology Research Field：Mycology and Molecular Genetics Posgraduate：Zhang Shu Tian Supevisor：Prof. Liu Hong Dr.Zheng Wu Submitted：October, 2012独创性声明本人声明，所呈交的学位（毕
3、业）论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位（毕业）论文作者亲笔签名：日期：论文使用授权的说明本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位（毕业）论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅; 学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。不保密，本论文属于不保密。学位（
4、毕业）论文作者亲笔签名：日期：指导教师亲笔签名：日期：本研究承福建省自然科学基金（2008J0305，2011J01389）和中国博士后科学基金（20100480709）资助，谨此谢枕！福建农林大学硕士学位论文目 录中 文 摘 要2Abstract2前 言21 溺水死亡法医学鉴定方法21.1 血液及其他化学元素检测法21.2 微生物检测法21.3 蛋白质检测法21.4 PCR检测法21.5 硅藻检测法21.5.1 酶消化法21.5.2 强酸消化法21.5.3 微波消解法22 浮游生物多样性研究22.1 传统形态学观察法22.2 应用PCR分子生物技术22.2.1 rDNA文库技术22.2.2
5、PCR-RFLP技术22.2.3 PCR-DGGE技术22.2.4 PCR-RAPD技术22.2.5 PCR-AFLP技术23 研究目的及意义2第一章 福州内河冬夏季节真核浮游藻类形态学分类研究21 材料与方法21.1 实验材料21.2 主要仪器和试剂21.3 方法22 结果与分析22.1 浮游藻类形态学鉴定观察22.2 晋安河不同季节藻种统计22.3 白马河不同季节藻种统计23 白马河与晋安河真核浮游微藻种群分布差异分析24 小结2第二章 真核浮游生物分子鉴定体系建立及其应用21 材料与方法21.1 材料21.2 主要仪器和试剂21.3 方法21.3.1 水样总DNA制备21.3.2 水样总
6、DNA含量的测定21.3.3 引物筛选21.3.4 PCR反应21.3.5 18SrDNA文库的建立21.3.6 RFLP筛选21.3.7 测序及分析22 结果与分析22.1 浮游藻类分子鉴定体系的建立22.1.1 水样总DNA 提取22.1.2 18SrDNA扩增结果22.2 晋安河18SrDNA文库的构建及序列分析22.2.1 菌液PCR筛选22.2.2 RFLP筛选阳性克隆子22.2.3 N-J法构建进化树22.3 冬季浮游生物多样性研究22.3.1 金藻门（Chrysophyta）22.3.2 硅藻门（Bacillariophyceae）22.3.3 绿藻门（Chlorophyta）2
7、2.3.4 类鞭毛原生动物（Bicosoecida）22.4 夏季浮游动物多样性研究22.4.1 纤毛亚门（Ciliophora）22.4.2 真菌（Fungi）22.4.3 复细胞动物类（Metazoa）22.5 夏季浮游藻类多样性研究22.5.1 隐藻门（Cryptophyta）22.5.2 绿藻门（Chlorophyta）22.5.3 金藻门（Chrysophyta）22.6 晋安河各水样点浮游生物差异性分析22.6.1 冬季分析22.6.2 夏季分析23 小结2第三章 动物溺水死亡实验21 材料与方法21.1 材料21.2 主要仪器和试剂21.3 方法21.3.1 体内浮游生物分离21
8、.3.2 水样浮游生物PCR检测22 结果分析22.1 动物溺水死亡实验结果22.2 溺死点水样PCR检测结果23 小结2展 望2参考文献2附 录2致 谢2II中 文 摘 要溺死（俗称淹死）是因液体阻塞呼吸道及肺泡，导致气体交换阻碍，使体内缺氧，二氧化碳浓度升高，而发生窒息死亡的过程。由于我国境内河流分布众多，也成为了溺死事件高发的主要原因之一，而这些受检尸体中部分为死后入水，部分为溺水身亡。在江、河、湖海中发现的尸体绝大部分属意外，但溺死是自杀的手段之一，而且少数属他杀，甚至有死后抛尸入水伪装溺死的，因此，水中发现的尸体很可能跟刑事命案有关，进行法医学检验以认定其死亡性质是十分有必要的。福州
9、地处东南沿海，境内河流分布众多，因此每年都有相关溺水死亡的案件发生，而法医学中对于浮游生物的检测是诊断溺水死亡的主要指标。本研究通过分段研究白马河、晋安河水域浮游生物种群分类情况，对于法医学溺水死亡鉴定提供重要的数据。本研究在2010年12月和2011年6月对晋安河不同季节的浮游生物种群的种类及分布情况进行了调查，建立了浮游生物18SrDNA文库并对晋安河冬季获得的104个和夏季获得的168个不同酶切类型的真核浮游生物克隆子测序后，从NCBI中比对亲缘关系最近的已知物种的18SrDNA序列并通过MEGA4.0软件使用N-J法构建浮游生物系统发育树。冬季晋安河浮游生物系统发育树主要分为：金藻门(
10、Chrysophyta)、硅藻门(Bacillariophyceae)、绿藻门(Chlorophyta)和一种鞭毛类原生动物共四类浮游有生物组成。夏季浮游生物种群主要分为：绿藻门(Chlorophyta)、金藻门(Chrysophyta)、隐藻门(Cryptophyta)、纤毛亚门(Ciliophora)、真菌(Fungi)和复细胞动物(Metazoa)共六类。而且在晋安河不同季节里，浮游生物的组成比例发生了变化，冬季水样中金藻和硅藻类占的比例为80%以上，所以这两种真核藻种为优势物种，而绿藻和原生动物较少。夏季则为隐藻、绿藻、原生动物和纤毛亚门类真核浮游生物四类各占约总量的20%，为夏季水域
11、的优势物种，而金藻和真菌类只占到总量的一成，初步明确了晋安河冬夏季节浮游生物种群多样性存在一定的差异。并通过动物溺水死亡实验验证了，浮游生物检测对法医学溺水死亡诊断的重要意义。关键词：溺水死亡；浮游生物；18SrDNA；遗传多样性AbstractDrowning(drowningcommonly known) is aliquid blockageofthe tractand respiratory alve-olar gasexchangehindered, so thatin vivohypoxia,elevatedconcentrations of carbon dioxide toas
12、phyxia death.Because of large numberofrivers in our countey,so that has also becomeone of the main reasons forthe high incidence ofdrowningevents.Mostofthebodies foundisan accede-nt inthe rivers lakes and seas. butdrowningisoneofthemeans ofsuicide.Andafewcase of ho-micide,evenafter the death ofthe d
13、ead bodiesinto the water camouflagedrowning. Therefore,we found bodyis in the water that may be to dowith hominide case,So the forensic examination identifiedthenatureofhis deathis verynecessary.Fuzhouislocatedinthesoutheastcoastalrivers inthe distribution ofmany, soevery yeardrowningcases,forensicdetectionforplanktonarethe main indicatorsofdiagnosis ofdrowning.This studyprovide importantdataforforensicdrowningidentification by segmentationresea
