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1、三聚氰胺 HPLC 检测方法之固相萃取(SPE)法 发布公司：天津市恒奥科技发展有限公司 点击次数：发布时间：2008-10-24 9:09:491. 依据：GB/T 223882008 2. 原理：试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用高效液相色谱测定，外标法定量。 3. 试剂与材料：除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 3.1 甲醇：色谱纯； 3.2 乙腈：色谱纯； 3.3 氨水：含量为 2528； 3.4 三氯乙酸； 3.5 柠檬酸。 3.6 辛烷磺酸钠：色谱纯； 3.7 甲醇水溶液：准确量取 50 mL 甲醇和 50 mL
2、水，混匀后备用； 3.8 三氯乙酸溶液（1）：准确称取 10 g 三氯乙酸于 1 L 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用； 3.9 氨化甲醇溶液（5）：准确量取 5 mL 氨水和 95 mL 甲醇，混匀后备用； 3.10 离子对试剂缓冲液：准确称取 2.10 g 柠檬酸和 2.16 g 辛烷磺酸钠，加入约 980 mL 水溶解，调节 pH 至 3.0 后，定容至 1L 备用。 3.11 三聚氰胺标准品：CAS 108-78-01，纯度大于 99.0%； 3.12 三聚氰胺标准储备液：准确称取 100 mg（精确到 0.1 mg）三聚氰胺标准品于 100 mL 容量瓶中，用甲醇水溶液（3
3、.7）溶解并定容至刻度，配制成浓度为 1 mg/mL 的标准储备液，于 4避光保存。 3.13 阳离子交换固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60 mg，3 mL，或相当者。 3.14 定性滤纸。 3.15 微孔滤膜：0.2 m，有机相。 3.16 氮气：纯度大于等于 99.999 4. 仪器和设备 4.1 高效液相色谱（HPLC）仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 4.2 分析天平：感量为 0.00001 g 和 0.01 g。 4.3 离心机：转速不低于 10000 r/min。 4.4 天津恒奥超声波提取器。HS,HU 系列 4.5 天
4、津恒奥固相萃取装置。HSE-12D 4.6 天津恒奥氮吹仪。HGC,HSC 系列 4.7 天津恒奥涡旋振荡器。HMS-350 4.8 天津恒奥真空泵。HPD-25 4.9 天津恒奥精密气体稳流调节阀。 4.10 具塞塑料离心管：50 mL。 5. 样品处理 5.1 提取 称取（液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等）2 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL 具塞塑料离心管中，加入 15 mL 三氯乙酸溶液（3.8）和 5 mL 乙腈，超声提取 10 min，再振荡提取 10 min 后，以不低于 10000 r/min 离心 30 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶
5、液定容至 25 mL，移取 5 mL 滤液，加入 5 mL 水混匀后做待净化液。 注：若样品中脂肪含量较高，可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分配除脂后再用 SPE柱净化。 5.2 活化 依次用 3 mL 甲醇、5 mL 水活化（3.13）阳离子交换固相萃取柱。旋转固相萃取装置前的精密气体稳流调节阀使洗液流速不超过 1 mL/min 5.3 上样 将 5.1 中的待净化液转移至固相萃取柱（5.2）中。 5.4 淋洗 依次用 3 mL 水和 3 mL 甲醇洗涤，抽至近干后， 5.5 洗脱 用 6 mL 氨化甲醇溶液（3.9）洗脱，用试管收集洗脱液。整个固相萃取过程流速不超过 1 mL/min。
6、5.6 浓缩 洗脱液于 50下用氮气吹干，残留物（相当于 0.4 g 样品）用 1 mL 流动相定容，涡旋混合 1 min，过微孔滤膜后，供 HPLC 测定。 6. 高效液相色谱测定 HPLC 参考条件 a) 色谱柱：C8 柱，250 mm4.6 mm（i.d.），5 m，或相当者； C18 柱，250 mm4.6 mm（i.d.），5 m，或相当者。 b) 流动相：C8 柱，离子对试剂缓冲液（3.2.10）-乙腈（85+15，体积比），混匀。 C18 柱，离子对试剂缓冲液（3.2.10）-乙腈（90+10，体积比），混匀。 c) 流速：1.0 mL/min。 d) 柱温：40。 e) 波长：240 nm。 f) 进样量：20 L。 7. 分析 用 GB/T 223882008 标准检测方法分析，使用天津恒奥的设备测得样品的回收率结果如下： 添加水平（mg/Kg） 回收率 空白 2 116% 4 108% 6 92% 8 96% 由上表可以看出：使用天津恒奥设备处理样品，不仅可以提高分析样品的速度而且还可以得到满意的回收率。
