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1、消毒剂消毒效果的验证 组长：* 组员：* * * * * * * * * 编号： 201412151135 版次： 2014 年 第 1 版 消毒剂消毒效果的验证2 目录目录 1概述概述 .3 1.1 消毒剂.3 1.2 消毒剂使用说明.3 2验证目的验证目的 .3 3验证内容验证内容 .4 4验证组织验证组织 .4 4.1 验证小组.4 4.2 验证委员会.4 5验证实施步骤验证实施步骤 .5 5.1 验证前准备.5 5.2 验证所需文件资料.5 5.3 悬液法定量杀灭试验.6 5.4 对裸手消毒效果试验.7 5.5 消毒剂对佩戴手套后的消毒效果验证.9 5.6 消毒剂对物体表面消毒效果验证
2、.11 5.7 消毒剂消毒效果验证结论.15 6验证主要依据验证主要依据 .15 7验证合格标准验证合格标准 .15 7.1 判断标准.15 7.2 现场考察试验合格标准.15 8. 再验证周期再验证周期 15 附录附录 .16 附录一 验证方案会审记录16 附录二 验证方案修改申请及批准书17 附录三 漏项和偏差处理记录18 附录四 悬液法定量杀灭试验记录19 附录五 消毒剂对佩戴手套后人员手现场试验记录22 消毒剂消毒效果的验证3 1概述概述 1.1 消毒剂 消毒剂的作用原理：破坏细胞膜类，阻断细胞食物摄取和废物排泄，钝化关键酶。以 下是几种常用的消毒剂： （1）新洁尔灭(苯扎溴铵)：是一
3、种常用的季铵盐类消毒剂，在浓度较低时即可有抑菌 的作用；当浓度较高时，可以杀灭多种细菌繁殖体和部分的病毒，但是不能杀灭细菌芽孢， 属于低效消毒剂。 （2）75%乙醇：适用于一般物体表面消毒以及手和皮肤的消毒，它无法杀灭细菌芽孢 和病毒。 （3）优洁：属于长效、强效、广谱杀菌剂，是一种新型消毒剂，其有效成分为复合季 铵盐和六亚甲基四胺，可有效快速地杀灭细菌繁殖体、芽孢、真菌和部分病毒等，各种微 生物对其均无抗药性，抑菌时间较长，可用于一般物体表面消毒，稳定性好，无腐蚀性， 无毒无害，并且由于杀菌时不受蛋白质及有机物的干扰，故使用衰减周期长，可循环使用， 相对使用成本低。 本次验证以优洁消毒剂的杀
4、灭效果为主，同时也可根据此验证方案对 75%乙醇、新洁 尔灭等消毒剂的杀灭效果进行评价。 1.2 消毒剂使用说明 对于不同的消毒对象，应使用不同的消毒剂，并制订消毒程序，消毒程序中应明确规 定： （1）消毒剂的浓度及配制方法； （2）消毒剂使用的条件； （3）消毒使用的设备、设施； （4）消毒操作的详细步骤； （5）消毒周期； （5）消毒效果的监测方法。 制订的消毒程序的消毒效果应经过验证后，才能批准使用。 本验证具体规定了评价消毒剂消毒效力的生物学检测方法及其效果评价方法。 2验证目的验证目的 药品在生产过程中会遭到来自微生物的污染，因此必须要采取一定措施使微生物污染 处于受控状态或者完全被
5、消除，这就需要对消毒剂消毒效果进行验证以确定相应的方案来 处理这些问题。在对消毒剂进行消毒效果验证的过程中，主要是要用特定的微生物与消毒 剂在规定的使用浓度下接触规定的时间后，对微生物进行培养计数，考察该消毒剂的消毒 效果，确定消毒剂消毒后的最长有效时间，并对消毒剂对微生物的杀灭效果进行评价。 确认洁净区按照规定的清洁、消毒程序进行清洁消毒后，能够达到防止交叉污染的目 消毒剂消毒效果的验证4 的，并在消毒有效期内能确保达到生产工艺所需要的效果。 本次验证以优洁消毒剂的杀灭效果为主，同时也可根据此验证方案对75%乙醇、新洁 尔灭等消毒剂的杀灭效果进行评价。 3验证内容验证内容 消毒剂消毒效果验证
6、包括两项考察：实验室考察和现场考察。实验室考察通常以悬液 定量法为主，且试验须重复3次，而现场考察可用来评估消毒剂对相应设施的实际消毒效果。 在消毒剂消毒效果试验中，消毒方法和消毒对象有很多。常用的方法有：喷洒法，浸 泡法，擦拭法等。常见的对象有：皮肤，洁净区的地面、墙面，设备表面等。此次试验我 们采用的消毒方法为喷洒法，消毒对象为人员裸手皮肤、人员佩戴无菌手套后的手套表面 和物体表面。 根据消毒对象所制定相应的试验方案有：悬液法定量杀灭试验、消毒剂对裸手消毒现 场试验、载体喷雾定量杀菌试验、消毒剂对佩戴手套后的手消毒现场试验以及消毒剂对物 体表面现场鉴定试验。通过以上几种试验来对消毒剂消毒的
7、效果进行验证。 4验证组织验证组织 4.1 验证小组 表表 4-1 验证小组及职责验证小组及职责 人员人员部部 门门职职 务务职职 责责 组 长 质保部部门负责人 （1）负责成立验证小组，明确各验证成员职责 （2）负责组织起草验证方案、验证记录和验证报告 （3）负责验证方案、验证记录和验证报告的审核工作 验证管理员 （1）负责起草验证方案 （2）负责对试验结果进行统计分析 （3）负责起草验证报告质保部 质保员 （1）负责现场取样 （2）负责验证过程在线监督 质检部部门经理 （1）负责组织对样品的检验 （2）负责验证所需试剂、试液等的准备。 质检部质检员 （1）负责样品的检验 （2）负责检验数据
8、的收集、整理。 部门经理负责组织现场操作，确保验证按进度进行。 卫生员负责消毒液的配制和发放。 生产部 各工序 操作人员 （1）负责洁净厂房的清洁 （2）负责按消毒程序进行消毒。 组 员 设备部部门经理 （1）负责仪器、仪表、量具的校正 （2）负责验证所用仪器、设备的安装、调试，并做好相应的记录 （3）负责纯化水的供给。 消毒剂消毒效果的验证5 4.2 验证委员会 4.2.1人员组成：由企业质量副总、生产副总及生产部、质量保证部、质量检验部、设备动 力部经理或主管组成。 4.2.2职责： 负责验证方案的审批； 负责验证的协调工作，以保证验证方案的顺利实施； 负责验证数据及结果的审核； 负责验证
9、报告的审核； 负责确定该项验证的再验证周期； 负责验证证书的发放。 5验证实施步骤验证实施步骤 5.1 验证前准备 在进行消毒剂消毒效果验证前，洁净厂房空气净化系统应经验证合格并正常运行，设 备动力部应提供洁净厂房空气净化系统的验证报告、空气净化系统操作程序；与验证相关 的各种设备、仪器均需通过相应验证，所需仪表、计量器具均需校验合格并具备校验证书。 5.2 验证所需文件资料 表表5-5-1 验证所需的文件资料及存放处验证所需的文件资料及存放处 资料名称资料名称编号编号存放处存放处 活菌数检测操作规程ZL-03-066GMP 办公室 菌落计数操作规程ZL-03-070GMP 办公室 培养基配制
10、操作规程ZL-03-073GMP 办公室 培养基配制、使用管理规程ZL-03-110GMP 办公室 消毒剂配制操作规程WS-04-029GMP 办公室 消毒剂的使用操作规程WS-04-030GMP 办公室 致病菌阳性菌株传代操作规程ZL-03-075GMP 办公室 实验器具清洗操作规程ZL-03-087GMP 办公室 实验器具灭菌、消毒及使用操作规程ZL-03-088GMP 办公室 进出微生物限度实验室操作规程ZL-03-259GMP 办公室 CHK 型显微镜操作规程SB-03-153GMP 办公室 厌氧罐操作规程SB-03-156GMP 办公室 MS1 型振荡器操作规程SB-03-381GM
11、P 办公室 BL610 型电子天平操作规程SB-03-324GMP 办公室 SKP-02B 型电热恒温箱操作规程SB-03-375GMP 办公室 SKP-02B 型电热恒温箱清洁规程SB-03-376GMP 办公室 微生物实验室清场操作规程ZL-03-064GMP 办公室 破伤风杆菌检测操作规程ZL-03-220GMP 办公室 DELTA-320PH 计操作规程SB-03-234GMP 办公室 消毒剂消毒效果的验证6 致病菌阳性菌管理规程ZL-03-112GMP 办公室 微波炉的操作规程SB-03-177GMP 办公室 洁净区情场操作规程ZL-03-112GMP 办公室 设备清洁操作规程SB-
12、03-187GMP 办公室 5.3 悬液法定量杀灭试验 5.3.1 试验所需要用的试剂 中和剂：0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液（0.9%N.S） 活菌计数用培养基：TSA培养基 稀释液：磷酸盐缓冲液（PBS 0.03mol/L 消毒剂配制用水：纯化水 有机干扰物质 5.3.2 试验所需要用的仪器 移液器、电动混匀器、计时器、生化培养箱 5.3.3 试验所需要用的菌种 可根据消毒技术规范2008年版4“细菌定量杀灭试验”中指导，本次试验选择金 黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉。再增加车间常见的菌： 洋葱伯克霍尔德菌。 5.3.4 试验所需要用的消毒液的浓度及作用时间
13、根据优洁消毒液说明书建议浓度为1%-3%，作用时间为1-2min，但根据厂家验证报告 0.1%及0.2%的浓度作用5min和15min也能符合规定，因此本次试验浓度选择0.2%，作用时 间选择2.5min、5min以及7.5min的条件进行确认，又因车间裸手消毒作用时间可能只有 30s，故本次试验同时对0.2%消毒剂作用15s、30s以及45s的条件进行确认。 5.3.5 试验所需要用到的场所 微生物实验室阳性间 5.3.6 悬液定量杀菌试验操作程序 （1）菌悬液：浓度为1108cfu/ml-5108cfu/ml （2）消毒液的配制：用纯化水按体积比配制浓度为0.2%的消毒液500ml （3）
14、磷酸盐缓冲液的配制：磷酸盐缓冲液（PBS 0.03mol/L）称取无水磷酸氢二钠 2.83g、磷酸二氢钾1.36g加入到1000ml蒸馏水中，待完全溶解后，调PH至7.2-7.4，灭菌后 使用。 （4）有机干扰物质的配制：按30g牛血清白蛋白中加入1000ml蒸馏水的比例配制约 100ml，溶解后用0.45um的无菌滤膜进行过滤除菌后使用，未用完的可于2-8冰箱中保存。 （5）试验过程（以浓度为0.2%优洁消毒剂对金黄色葡萄球菌作用2.5min为例） 试验组：取无菌大试管加入0.5ml金黄色葡萄球菌菌悬液，再加入0.5ml的有机干扰物 质，分别用无菌吸管吸取0.2%的优洁消毒液4.0ml，加入
15、试管中，迅速混匀并立即计时。待 金黄色葡萄球菌与0.2%的优洁消毒液相互作用2.5min时，吸取0.5ml试验菌与消毒剂的混合 消毒剂消毒效果的验证7 液，加于4.5ml经灭菌的0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液中，混匀。金黄色葡萄球菌与消毒 剂混合液经硫代硫酸钠-生理盐水溶液作用10min后，吸取1.0ml样液，按活菌培养计数测定 方法测定存活菌数，每管样液接种2个平皿即可。如果菌液浓度较高时，可进行10倍系列稀 释后，在进行活菌培养计数，作为试验组，其计数结果为CX。 阳性对照组：用4.0ml磷酸盐缓冲液代替4.0ml0.2%的优洁消毒液与0.5ml金黄色葡萄球 菌菌悬液、0.5ml有机干扰
16、物质混合2.5min后，取0.5ml混合液与4.5ml0.1M硫代硫酸钠-生理 盐水溶液反应，作用10min后。计数方法同试验组，计数结果为C0。 阴性对照组：吸取此次试验用的纯化水0.5ml、0.5ml有机干扰物质、4.0ml磷酸盐缓冲 液混匀，混匀后取0.5ml混合液与4.5ml0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液作用10min后，吸取 1.0ml混合液，按活菌培养计数测定方法测定存活菌数，作为阴性对照。 培养：所有用细菌试验的样品均放入30-35培养箱中培养，培养48小时观察结果；用 真菌试验的样品放入23-28培养箱中培养，培养72小时观察结果。 5.3.7 试验要求 作用于不同试验菌不同作用时间后的消毒效果试验均须进行3次，每次进行时应注意所 用的试剂等物品均应重新配制，防止系统误差的发生。 5.3.8 活菌计数结果应换算为对数值（N） 按计算公式杀灭对数值KL=阳性对照组平均浓度对数值（N0）-试验组活菌浓度对数值 （NX） 。计算杀灭对数值的时候，取小数点后两
