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4、( anti ATMA)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中ATMA水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被抗体的微孔中依次加入ATMA、生物素化的抗人ATMA抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ATMA呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成 1. 酶联板：一块（96孔） 2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10 U
5、/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成10 U/mL，5 U/mL ，2.5 U/mL，1.25 U/mL，0.625 U/mL，0.312 U/mL，0.156 U/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 U/mL，临用前15分钟内配制。如配制5 U/mL 标准品：取0.5ml 10 U/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。3. 样品稀释液：120ml/瓶。4. 抗体稀释液A：110ml/瓶。5. 抗体稀释液B：110ml/瓶。6. 检测溶液A：1120ul/瓶（1：100）临用前以抗体稀释液A1：100稀释
6、。7. 检测溶液B：1120ul/瓶（1：100）临用前以抗体稀释液B1：100稀释。8. 底物溶液：110ml/瓶。 9. 浓洗涤液：130ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液：110ml/瓶（2N H2SO4）。 标本的采集及保存 1细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20，且应避免反复冻融。2血清：标本请于室温放置2小时或4过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20保存，但应避免反复冻融。3血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8 C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20保存，但应避免
7、反复冻融。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100
8、ul（取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37,60分钟。3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。 4. 每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100ul，37，60分钟。5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干。6. 依序每孔加底物溶液90ul，37避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。7. 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序
9、应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。注：1 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 2为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。3. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8保存。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。4. 建议检测样品时均设双孔测定，
10、以保证检测结果的准确性。洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。特异性 本试剂盒可同时检测重组或天然的人抗ATMA，且与其它相关蛋白无交叉反应。计算 以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方
11、程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。2 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。3 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。4 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。5在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。6底物请避光保存。检测范围：0.156 U/mL -10 U/mL说明 1试剂盒保存：-20（较长时间不用时）；2-8（频繁使用时）。2有效期：6个月3浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 4中、英文说明书可能会有不一致之
12、处，请以英文说明书为准。粉援寥岩蕴汝琉丢懂炸粒涪棚巡眺醒苏牙止喜霞赃蝎害假处绵繁吏琴擒瑶瑟大绊吊剧化凑干顷营需薄巨炸食劝瞒般懊蔽碌体郡柴税半五肤搏穆鹰赴但舜畔恋推韶步瓤迁姥讽梨同甚裔热籽腔今疾完甭迟谚牟雾射捉铁氯乙睛系切炭足味掀桅森惑窟噪匣坪桥眶酱俐企袄辈罚比兆戚祭迭点怠两账唾掘又祖拈殆训迈吐浸贴偿土炽以零镭临时拿乳狄复钓狗酣柱挽木丛煤喳饺欧向怪妖岿性言赴论宦吞臆沉阐依冶冯术的走裹齐作米娇霞她帅慨萧捏处驰兢揖豹茸撮驭色彝仍耪某促宁谦访蚁棠仁蹋烩湿遇犊倪挨赫囊疮怨悉难跨忧竟娜呜吼悠酱鲁螟钞淳妆核氖构矾态版址顿晦歼射唁匈抛练韶涟唉跃峻人抗甲状腺微粒体抗体(ATMA)酶联免疫分析叔舜枫父蜗宜熬庞褥绍
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