生物制品化学规定规划

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1、生物制品化学规定规程本规程载人的化学检定项目，如采用其他方法测定，其结果与本规程所列应无显著差异。如遇制品质量存在疑问时，其最后判定应以本规程所列方法测定结果为准。标准液的配制与标定方法参看最新版中国药典 。PH 值测定（电位法）1 仪器校准（定位）用标准缓冲溶液应使用分析纯标准缓冲物质配制。1.1 0.05mol/L 邻苯二甲酸氢钾溶液称取于1155干燥23小时的邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4 ）10.120.01g，溶于蒸馏水，并稀释至1000ml。1.20.025mol/L 磷酸氢二钠和0.025mol/L 磷酸二氢钾混合溶液分别称取在1155干燥23小时的磷酸氢二钠（Na2HPO4

2、）3.530.01g 和磷酸二氢钾（KH2PO4）3.390.01g，溶于预先煮沸过1530分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。1.30.01mol/L 硼砂溶液称取硼砂（Na2B4O710H2O）3.800.01g（注意：不能烘！） ，溶于预先煮沸过1530分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。标准缓冲溶液于050的标准 pH 值温度() 0.05mol/L 邻苯二甲酸氢钾 0.025mol/L 混合磷酸盐 0.01mol/L 硼砂0 4.01 6.98 9.465 4.00 6.95 9.3910 4.00 6.92 9.3315 4.00

3、6.90 9.2820 4.00 6.88 9.2325 4.00 6.86 9.1830 4.01 6.85 9.1435 4.02 6.84 9.1040 4.03 6.84 9.0745 4.04 6.83 9.0450 4.06 6.83 9.022 操作使用玻璃电极酸度计测定，操作方法按仪器说明书进行。用两种标准缓冲溶液校正或核对，相差不得超过0.05。固体总量测定甲、105干烤法1 操作精确量取一定体积样品于干燥至恒重的扁称量瓶中，置105烤箱中烘至恒重。 2 计算烘干后样品重量样品固体总量%（g/ml）= 100样品 ml 数乙、50干烤法1 操作精确量取1mlA 群脑膜炎球菌多

4、糖 菌苗半成品原液于已干燥至恒重的称量瓶（22.5cm）中，置50干燥箱中，干燥至恒重。2 计算同105干烤法。半微量定氮法1 试剂1.1 硫酸化学纯，比重1.84。1.2 消化剂硫酸铜（CuSO45H2O）1份与硫酸钾（K2SO4）10份共同研细混匀即成。1.3 12.5mol/L 氢氧化钠液取氢氧化钠500g，加蒸馏水至1000ml，摇匀。1.4 2%硼酸吸收液硼酸20g 加蒸馏水使溶解成1000ml，加混合指标剂10ml，摇匀。1.5 混合指示剂0.2%（g/ml）溴甲酚绿酒精溶液5份与0.1% （g/ml）甲基红酒精溶液2份混合配成。1.6 标准0.01mol/L 盐酸或0.005mo

5、l/L 硫酸溶液。2 操作2.1 消化准确量取一定体积样品（含氮量在12mg 左右）于凯氏定氮瓶中，加消化剂约0.3g，浓硫酸1.0ml 进行消化，至澄明蓝绿色，继续消化约60分钟，同时做空白。2.2 蒸馏与滴定取10ml 硼酸吸收液于100ml 三角瓶内，将凯氏蒸馏器冷凝管末端浸入硼酸吸收液内，将消化好的样品移入凯氏蒸馏器内，用蒸馏水洗定氮瓶34次，洗液亦移入蒸馏器内，再加5ml 12.5mol/L 氢氧化钠溶液，然后进行蒸馏，待接收液总体积约3550ml, 将冷凝管末端取出液面，让蒸汽冲洗约1分钟，再用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端，接收液用标准0.01mol/L 盐酸或0.005mol/L 硫

6、酸进行滴定，至溶液显著变色。3 计算（样品滴定数 空白滴定数）标准盐酸 mol/L14样品总氮含量(mg/ml) 样品 ml 数附注1.蒸馏前应蒸洗蒸馏器15分钟。2.蒸汽发生瓶内应加数滴硫酸及甲基红指示剂至呈明显红色。蛋白质含量测定甲、钨酸沉淀法1 试剂1.110%钨酸钠溶液取钨酸钠10g，加蒸馏水使溶解成100ml。1.2 0.33mol/L 硫酸溶液量取化学纯硫酸1.86ml，缓缓注入适量的蒸馏水中，待冷加水稀释至 100ml。1.3 0.145mol/L 氯化钠溶液取氯化钠9g，加蒸馏水使溶解成1000ml。2 操作2.1 钨酸除蛋白质精确量取样品2ml 加蒸馏水14ml，加10%钨酸

7、钠2ml，0.33mol/L 硫酸2ml ，摇匀，静置30分钟过滤。2.2 精确量取样品1ml，用0.145mol/L 氯化钠溶液准确稀释至每 ml 含氮量1mg 左右。2.3 精确量取稀释液1ml 及除蛋白质滤液5ml，分别移入凯氏定氮瓶中，用半微量定氮法测定样品的总氮及非蛋白氮含量。3 计算样品总氮含量(mg/ml)=（样品滴定数-空白滴定数）标准盐酸 mol/L14稀释倍数样品非蛋白氮含量(mg/ml)=（样品滴定数-空白滴定数）标准盐酸 mol/L1412样品蛋白质含量(g/ml)=（总氮 -非蛋白氮）6.251/10附注1.样品蛋白质含量如超过10%(g/ml)，除蛋白质时应适当加大

8、样品稀释倍数，10%钨酸钠及0.33mol/L 硫酸用量相应地按比例增加，使溶液钨酸浓度仍保持 1%。2.总氮与非蛋白氮可用同一空白。乙、三氯醋酸沉淀法1 2%三氯醋酸溶液取三氯醋酸12g，加蒸馏水溶解至100ml。2 操作精确量取一定体积的样品（含蛋白质612mg 左右，于10ml 尖底离心管中，加等体积的12%三氯醋酸混匀，放置半小时后3000r/min 离心30分钟，倾净上清，沉淀用蒸馏水约3ml（分数次）洗入凯氏烧瓶，按半数量定氮法测定氮含量。 3 计算（样品滴定数 空白滴定数）标准盐酸 mol/L14样品蛋白质含量(mg/ml)6.25样品 ml 数丙、微量法（Lowry 法）1.试

9、剂1.1 4%碳酸钠溶液取4g 碳酸钠，加蒸馏水溶解成100ml。1.2 0.2mol/L 氢氧化钠溶液取0.8g 氢氧化钠加蒸馏水，溶解成100ml。1.3 0.04mol/L 硫酸铜溶液取1gCuSO45H2O 加蒸馏水溶解成100ml。1.42%酒石酸钾（或0.1mol/L 酒石酸钠）取2g 酒石酸钾（或酒石酸钠） ，加蒸馏水溶解成100ml 。1.5 碱性铜液临用前取试剂1.1和1.2各25ml，试剂1.3和1.3各0.5ml 混匀配制而成。1.6 酚试剂称取100g 钨酸钠(Na2WO42H2O),25g 钼酸钠(Na2MoO42H2O) ，置1500ml 烧瓶中，加入700ml 蒸

10、馏水，50ml 85%磷酸及100ml 浓盐酸，上联回流管（使用木塞或锡纸包裹的橡皮塞）微沸加流10小时，取下回流管，加入150g 硫酸锂，50ml 蒸馏水，几滴溴液，煮沸约15分钟，驱除过量的溴。冷却，加蒸馏水稀释至1000ml，过滤，为酚试剂贮备液。酚试剂贮备液经标准氢氧化钠液滴定，测定酸浓度，而后用蒸馏水稀释至相当1mol/L盐酸浓度，即为酚试剂。1.7 标准蛋白质溶液取牛血清白蛋白标准品（由检定所统一标定发给） ，准确稀释至1mg/ml( 含0.02%NaN3)，为标准蛋白质贮备液。精确量取标准蛋白质贮备液2.5ml 于25ml 容量瓶中，用含0.02%NaN3的蒸馏水稀释至刻度，为标

11、准蛋白质溶液（100g/ml） 。2 操作2.1 样品精确量取一定体积样品（含蛋白质50g 左右）于试管中，加5ml 碱性铜液，混匀，于室温放置10分钟，快速加入0.5ml 酚试剂，摇匀，于室温放置 30分钟，用650nm 波长或红色滤光片比色（呈色后，如发现混浊，经3000r/min 离心15分钟后再比色） 。2.2 标准曲线精确量取标准蛋白质溶液（100g/ml）0、0.2、0.4、 0.6、0.8、1.0ml ，分别置于试管中，加蒸馏水补至1ml，其余操作同样品，可得一标准曲线。3 计算 从标准曲线查出样品相当标准蛋白质溶液之 ml 数 A；A0.01%样品蛋白质含量（g/ml）= 样品

12、 ml 数附注检测 A 群脑膜炎多糖抗原半成品原液可取 1ml（含抗原310mg ） 。硫酸铵含量测定1 试剂1.1 1mol/L 氢氧化钠液取化学纯氢氧化钠20g，加蒸馏水溶解成500ml。2 操作2.1 除蛋白质方法同蛋白质含量测定。2.2 蒸馏精确量取除蛋白质滤液10ml 于凯氏蒸馏器内，加1mol/L 氢氧化钠1ml ，加少量蒸馏水，按半微量定氮法进行蒸馏、滴定。3 计算样品硫酸铵含量%（g/ml ）= （样品滴定数-空白滴定数）标准盐酸mol/L144.7151/10氯化钠含量测定1 试剂1.1 0.1mol/L 硝酸银溶液取硝酸银17g，加蒸馏水溶解成1000ml。1.2 标准0.

13、05mol/L 硫氰酸铵溶液1.3 5.5mol/L 硝酸1.4 8% 硫酸铁铵指示液取8g 硫酸铁铵，加蒸馏水溶解成100ml。1.5 饱和高锰酸钾取高锰酸钾6.5g，加蒸馏水溶解成100ml。2 操作2.1 精确吸取样品1ml，准确加入0.1mol/L 硝酸银溶液5ml ，混匀（蛋白质含量高者加2ml 饱和高锰酸钾） ，加10ml 硝酸 (5.5mol/L) ，直接加热消化至溶液澄清为止。待冷，加蒸馏水50ml,8%硫酸铁铵指示液1ml,用标准 0.05mol/L 硫氰酸铵溶液滴定至溶液呈淡棕红色，振摇匀仍不退色，即为终点。2.2 空白试验 准确量陬0.1mol/L 硝酸银溶液 5ml，加

14、硝酸 (5.5mol/L)10ml，可不消化，其余操作同样品。3 计算样品氯化钠含量%(g/ml)（空白滴定数样品滴定数）硫氰酸铵 mol/L5.845钠离子含量测定（火焰光度法）1 试剂标准钠溶液：精确称取于110干燥至恒重的 NaCl2.9227g,用双蒸水溶解并稀释至1000ml, 为500mmol/L 标准钠溶液。2 操作2.1 样品精确量取样品0.5ml 于 50ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于火焰光度计， 589nm波长（或黄色滤光片）测其透光度。2.2 标准曲线精确量取标准钠溶液0.9、1.1、1.3、1.5、1.7ml 于50ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，钠含量分别

15、为0.9、1.1、1.3、1.5、1.7mmol/L ，其余操作同样品。3 计算由标准曲线上查出稀释后样品钠含量为 a mmol/L 。样品钠含量(mmol/L)=A100钾离子含量测定（火焰光度法1 试剂标准钾溶液：精确称取于110干燥至恒重的 KCl 0.3728g，用双蒸水溶解并稀释至500ml ，为10mmol/L 标准钾溶液。2 操作2.1 样品精确量取样品2ml 于50ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于火焰光度计 769nm 波长（或红色滤光片）测其透光度。2.2 标准曲线精确量取标准钾溶液0.15、0.30、0.45、0.60、0.75ml 于50ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，钾含量分别为0.03、0.06、0.09、0.12、0.15mmol/L，其余操作同样品。3 计算由标准曲线上查出稀释后样品钾含量为 Ammol/L 。样品钾含量(mmol/L)=A25枸橼酸离子含量测定1 试剂1.1 标准枸橼酸钠浓溶液 精确称取枸橼酸钠(Na3C6H 标准5O72H2O)0.5882g, 加蒸馏水溶解，并准确稀释至100ml ，为20mmol/L 枸橼酸钠液。1.2 标准枸橼酸钠溶液精密量取