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1、牛人工授精技术,广西武宣金泰丰农业科技有限公司,人工授精的概念,种畜配种：自然交配、人工授精 人工授精是指利用器械采取公畜的精液，经过适当的检查和处理，再用器械把精液输送到母畜生殖道的适当部位，使之受孕的配种方法。,人工授精的发展,试验阶段： 1780年意大利生理学专家司拜伦谨尼（Spallanzani）第一次进行狗的人工授精。20世纪初对马试验成功。 实用阶段：在20世纪30年代形成了一套较完整的操作方法。4060年代，欧洲多数国家，北美、大洋洲国家及日本人工授精已相当普及。 冷冻精液阶段： 出现：1949年英国波芝（Polge）对鸡精液冷冻成功。 发展：1950年英国的史密斯（Smith）
2、和波芝研究开发了牛精液冷冻保存技术。1960年后冷冻精液的人工授精技术广泛展开。我国的人工授精技术始于50年代（猪），但精液冷冻技术70年代才得以推广。,人工授精的意义,充分发挥优秀种公畜的种用价值和配种效能，加快品种改良步伐。 提高母畜的受胎率。 防止疾病特别是传染病的传播。 克服因家畜体形悬殊造成的配种困难。 冷冻精液的应用使种畜的利用不受时间和空间的限制。 是发展繁殖新技术的一项基础措施。,人工授精技术程序,采精 精液品质检查 精液稀释 精液保存 输精,采精,采精的准备 采精方法 采精频率,采精的准备,场地：宽敞、明亮、安静、清结，有消毒设施和保护栏。 台畜：活台畜、假台畜。 假阴道：安
3、装调试后具备适宜的温度、压力、和润滑度。 公畜：具备良好的繁殖体况；经过训练；采精前进行充分的性准备。,采精操作,假阴道法： 手握法： 电刺激法： 按摩法：,公畜的采精频率,公牛：每周两天，每天两次。 公猪、马：宜隔日一次，如果连续两天采精，要休息2-3天。 公羊：每天数次，连续数周。,精液的品质检查,外观检查 精子活力检查 精子密度检查 精子畸形率检查 其他检查,精液的外观检查,精液量 精液色泽 精液气味 云雾状,精子活力检查,平板压片法 悬滴法,载玻片预温,精液稀释,取样检查,镜检,活力估测,活力记录,将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37，然后放在载玻片,将生理盐水与精液
4、等温后，按1:10稀释,取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片,在400倍显微镜下观察,判断视野中直线前进运动精子所占的百分率,按“十级一分制“评分和记录,精子活力检查的程序,精子密度检查,估测法 血细胞计计数法 精子密度仪测定,估测法,密：在整个视野中，精子间空隙不明显，看不清单个精子运动。10亿ml。 中：在整个视野中，精子间空隙明显，可容纳12个精子，310亿ml 稀：在整个视野中，精子间空隙较大，可容纳数个精子，13亿ml。,(二)血细胞计数法：,在显微镜看清血细胞计数板上的方格： 稀释精液：用移液管吸取精液50微升置于小试管中，再吸取3%NaCI溶液450或950微升与精液混匀。
5、 镜检：在400倍的显微镜下找出具有代表性的五个中方格，四角和中间一个或对角线五个，用计数器计数其中的精子数。 计算：1毫升原精液精子数=5*5*10*1000*稀释倍数,精子密度仪,各种家畜精子密度比较,畸形率的检查,畸形精子：头部畸形、颈部畸形、尾部畸形 精子畸形率：精液中畸形精子占总精子数的百分率。 优质精液精子畸形率应小于：牛18%、羊15%、猪18%、马12%,畸形率的检查,取一滴原精液，均匀的涂在载玻片上，干燥12分钟。 用96%以上酒精固定23分钟。 用美蓝或墨水染色12分钟。 用蒸馏水轻轻冲洗。 干燥后镜检，,其他检查,顶体异常率 精子生存时间和生存指数的测定 PH测定 美蓝褪
6、色试验 果糖分解试验 精子耗氧量测定,顶体异常率的检查,取鲜精适量，在37下用生理盐水稀释。 涂片，干燥，用5%福尔马林固定10分钟。 姬姆萨液染色1.52小时。 干燥后用树脂封闭，制成标本。 400600倍镜检，数5001000个精子，计算项体异常率。,精子生存时间和生存指数的测定,精子生存时间：指精子在某温度下在体外的总的生存时间。 生存指数：将精液在某温度下，每隔812小时检查一次精子活力，直至无活动精子为止，相邻两次检查的平均活力与间隔时间的积之和为生存指数。,PH测定,正常精液PH： 牛、羊 6.56.9、猪、马 7.47.5 同种精液PH偏低的，品质较好，PH偏高的受精率、生活力和
7、保存效果都显著降低。,美蓝褪色试验,精液稀释,稀释的目的 稀释液的成分及作用 稀释液的配制方法 稀释倍数的确定 稀释方法,稀释的目的,大精液容量，增加了一次采精量的可配母畜数。 延长精子存活时间。 有利于精液的保存和运输。,稀释液的成分及作用,稀释剂：单纯扩大容量的等渗液。0.9%NaCl、5%葡萄糖。 营养剂：主要提供营养，以补充精子在代谢过程中消耗营养。 （1）奶类：奶粉(脱脂、速溶)1012%；鲜奶经消毒加入1020ml。 （2）卵黄，通常加入20%。 （3）糖类，3%葡萄糖，11%蔗糖。 保护剂：主要保护精子免受各种不良外界环境因素的危害。 （1）非电解质或弱电解质：降低精液电解质浓度
8、，常用糖类、氨基乙酸。 （2）缓冲物质：维持精液的PH，常用柠檬酸盐、酒石酸钾钠、磷酸二氢钾和三羟甲基氨基甲烷（tris)等。 （3）防冷物质：防止精子发生冷休克，常用卵黄、奶类。 （4）抗冻物质：甘油、二甲基亚砜(DMSO)。 （5）抗菌物质：青霉素、链霉素、氨基苯磺胺。 其他添加剂：激素类、维生素、酶类、染料类、有机酸、精氨酸等。,稀释液的配制要求,药物原料应选用化学纯和分析纯制剂。 用具须洗净消毒。 药品用蒸馏水溶解后，要进行过滤和水浴消毒。 蒸馏水要新鲜。 卵黄要取自新鲜鸡蛋。 最好现用现配，卵黄、奶类、抗生素现用现加。,稀释倍数的确定,一头公牛一次采得鲜精12毫升，经检查精子活力为0
9、.7，密度为11亿/毫升，如为母牛输精时要求有效精子数不少于0.1亿，输精量为0.25毫升，本次采得的精液可为多少头母牛输精？ （1）每毫升原精液中有效精子数：11*0.77.7亿/毫升 （2）稀释后每毫升精液中有效精子数：0.1/0.250.4亿/毫升 （3）稀释倍数：7.7/0.419.25 取19倍 （4）可配母牛头数：12*19/0.25912头,稀释方法,将精液精液与稀释液同处在30的环境中。 检查精液品质，确定稀释倍数。 稀释时，将稀释液沿着精液容器的壁慢慢加入精液中，同时慢慢转动精液瓶，使之混匀。 如需高倍稀释，应先做35倍的低倍稀释。,精液稀释,精液保存,常温保存：1525 低
10、温保存：05 冷冻保存：保存在液氮(-196)或干冰(-79) 中。,液氮及其容器,液氮的特性：超低温性、易挥发性、抑菌性。 利用液氮：防冻伤、防窒息、防爆炸 液氮罐：,液氮罐的构造,液氮罐的使用,购买时要检查合格证，查看各部件是否齐备完好，测定液氮损耗率是否正常。 运输液氮要有专门的车辆，防止剧烈振荡。 贮存液氮要在专门的室内。 当液氮量达容积的1/3时要及时充氮。 每年要清洗保养一次,精液的冷冻保存原理,玻璃化假说：稀溶液在冰晶化温区（060 ）易形成冰晶，冰晶为分子有序排列、形态规则、颗粒较大的固体，可对精子产生渗压和机械危害。如溶液快速降温，则形成分子无序排列、颗粒较小的玻璃化固体，对
11、精子危害小，再以同样的方式升温，精子即会恢复活力。,细管冻精的生产程序,采精及精液品质检查 精液稀释：二次稀释法 降温平衡： 分装 冻结：液氮熏蒸浸泡法 抽样检查,细管冻精的制作,人工授精技术,输精前的准备 输精的要求 输精方法,输精前的准备,母畜的准备：母畜经发情鉴定后，确定已到输精时间，将其适当保定，尾巴拉向一侧，清洗消毒外阴。 器械准备：输精所用的器械应彻底消毒，用稀释液冲洗后才能使用。 精液准备（1）液态保存的精液：轻轻振荡后升温至35，活力不低于0.6 （2）冷冻精液：需先解冻，活力在0.3以上。 术者准备：输精人员应穿好工作服，指甲必须剪短磨光，戴上长臂手套。,输精要求,输精时间的
12、确定：母牛发情后924h输精两次，间隔8-12小时。（第一次输精经产牛在发情后12h左右，初产20h） 例：早9点某经产母牛发情，当晚78：30时第一次输精，次日早59时可第二次输精，第二次输精前检查卵泡。 细管冻精1支，0.5ml或0.25ml，有效精子数不少于1000万。,直肠把握子宫颈输精法操作要点,1、冻精的适宜解冻温度：3839 2、母牛的输精时间：发情开始后812小时一次，隔812小时一次。 3、适宜的输精部位：子宫颈深部和子宫体内。 4、精液解冻后要尽快输精。 5、精液解冻后要保存在3436下，温度不可波动过大。 6、细管装入枪内后，要检查一下精液是否能从套管外流出。 7、排出宿
13、粪后，先擦洗牛外阴部，再插入输精器。 8、插入输精器时，先斜向上方前进1015cm ，再水平插入。 9、向子宫颈插入输精器时，要注意两手协同操作。 10、输精器与子宫颈方向要保持一致。 11、注入精液困难时，要适当改变输精器方向或稍后拉，但切忌后退过多。 12、注入精液要缓慢，一般为10秒。 13、注入精液的同时要减缓母牛的努责，防止精液倒流。 14、输精同时要注意保护输精器不受粪便污染。 15、输精完毕后，先撤出输精器后撤出直肠内的手臂。,提高受胎率的措施,发情正常而屡配不孕的母牛：大麦芽120克，当归、红花、生地、地骨皮各60克，黑豆5001000克，加水熬汤。母牛发情13天开始喂药，每日
14、1剂，连服3剂，第3剂药服完后的第2天配种。 按碘片1克、碘化钾3克、蒸馏水6克的比例配成稀释液，同时取4毫升原液，加200毫升蒸馏水冲洗子宫。此方法对慢性子宫内膜炎、化脓性子宫炎、卡他性子宫炎、阴道炎等引起的母牛不孕症有明显疗效。,提高受胎率的措施,卵巢机能不全时，肌注0.5%新斯的明2毫升，连注3次，每次间隔48小时。第3次可同时注射孕马血清1000国际单位，82.4%的母牛可恢复机能。 对隐性子宫内膜炎的母牛，在发情配种前2小时，用生理盐水200500毫升冲洗子宫之后，注入青霉素40100万单位，链霉素100万单位，再适时输精，受胎率可达60%以上。,提高受胎率的措施,肌注维生素。输精后
15、1520分钟，肌肉注射维生素E500毫克，情期受胎率可提高14.4%。在输精的当天，输精后的第56天，各肌注维生素A58万单位，维生素D310万单位，维生素E500毫克一次情期受胎率可提高20%。 50%70%葡萄糖溶液加入青霉素和链霉素100200万单位，于人工授精68小时后注入子宫体内，对患子宫内膜炎的母牛可提高受胎率26%50%。,提高受胎率的措施,在母牛分娩后的第一、二情期，输精后57分钟，各肌肉注射4050万单位的催产素一次，受胎率提高20%。 肌肉注射促性腺激素10毫克，受胎率可提高12%19.1%：屡配不孕的牛经注射后受胎率提高26.1%。 在母牛分娩后4560天肌肉注射前列素F
16、两天，2025毫升、受胎率可达73%85%。长期不孕的牛，皮下注射初奶20毫升和0.5%新斯的明2毫升，受胎率提高24%。,提高受胎率的措施,益母草250克、红花30克、黑豆500克，煎汤内服。隔日1剂，连服23剂为宜。此方适于不发情母牛。 炒香附、云苓各45克，灸半夏、桔皮各40克，炒苍术50克，六曲100克。每日1剂，分两次煎服，连服6日，停药1日，为1个疗程。一般服一个以情周期（即3个疗程左右）为宜。此方适于体壮过肥，不发情或发情屡配不孕的母牛。,子宫内膜炎的治疗,扁豆花、鸡冠花、泽兰各30克，益母草、山楂各50克，红花、桃仁各20克。混合加水适量，煎后取其汁，与100克红糖调匀，1次给病牛灌服。 当归200克，红花、炙甘草各30克，益母草500克，鸡冠花150克，枳壳45克，野菊花90克。混合研为细末，平均分成3剂，每天1剂拌料喂服，连用3天。 酒当归50克，川芎15克，酒白芍35克，熟地50克，吴茱萸35克
